江冉冉，王莉平，李曉東，閆 樺

（1.冀中能源峰峰集團(tuán)有限公司總醫(yī)院，河北 邯鄲 056200；2.邯鄲市中心醫(yī)院，河北 邯鄲 056001）

癲癇（epilepsy，EP）是一種因大腦神經(jīng)元同步異常放電而引發(fā)的腦功能障礙綜合征，我國EP發(fā)病率均7‰，是僅次于腦卒中的第二大神經(jīng)系統(tǒng)疾病，嚴(yán)重危害著人類的生命健康。EP發(fā)作是神經(jīng)元過度興奮和自由基堆積的過程，發(fā)作時(shí)間超過30 min即可造成大腦神經(jīng)元損傷或喪失，其中海馬神經(jīng)元最為敏感。有研究發(fā)現(xiàn)，氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)在EP所致腦損傷過程中發(fā)揮著重要作用[1-2]，而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是機(jī)體調(diào)控氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵通路[3-4]。藏紅花素（又名西紅花苷）為中藥藏紅花的主要活性成分，具有良好的抗氧化、抗炎活性[5-6]。有研究發(fā)現(xiàn)藏紅花素能夠通過抑制氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)對(duì)缺血性腦損傷起到保護(hù)作用[7]，但藏紅花素對(duì)EP所致腦組織損傷及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路的影響尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過制備EP大鼠模型，研究藏紅花素對(duì)氯化鋰-匹羅卡品（Li-Pc）所致EP大鼠腦組織的保護(hù)作用及其機(jī)制，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物8周齡SPF級(jí)健康雄性SD大鼠120只，體質(zhì)量230～250 g，購自河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（冀）2018-004。飼養(yǎng)于邯鄲康業(yè)制藥有限公司，使用許可證號(hào)：SCXK（冀）2019-003。適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后開展實(shí)驗(yàn)，飼養(yǎng)條件：光照黑暗各12 h交替，室溫23～25℃，相對(duì)濕度55%～65%。本實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)冀中能源峰峰集團(tuán)有限公司總醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，倫理批件號(hào)：FFZY[K]字2019-028。

1.2 藥物與試劑 藏紅花素（美國Sigma公司，純度≥98%，批號(hào)：17304-1G）；注射用丙戊酸鈉（VPA，四川科瑞德制藥股份有限公司，批號(hào)：20190826）；MDA檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：191107）、SOD檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：190830）、CAT檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：191214）（南京建成生物工程研究所）；TNF-α試劑盒（貨號(hào)：SEKR-0009）、IL-1β試劑盒（貨號(hào)：SEKR-0002）、IL-6試劑盒（貨號(hào)：SEKR-0005）（北京索萊寶生物技術(shù)有限公司）；調(diào)節(jié)蛋白78（GRP78，貨號(hào)：bs-1219R）、增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白（CHOP，貨號(hào)：bs-1630R）、激活型半胱氨酸蛋白酶-12（Cleved Caspase-12，貨號(hào)：bs-1105R）、B細(xì)胞淋巴瘤基因-2（bcl-2，貨號(hào)：bs-20352R）、bcl-2相關(guān)X蛋白（Bax，貨號(hào)：bsm-52316R）、核因子-κB（NF-κB，貨號(hào)：bs-0465R）、β-actin（貨號(hào)：bs-0061R）（北京博奧森生物技術(shù)有限公司）。

1.3 主要儀器RM2125型石蠟切片機(jī)（德國Leica公司）；CKX31型倒置光學(xué)顯微鏡（日本Olympus公司）；UV762型紫外-可見分光光度計(jì)（上海楚定分析儀器有限公司）；Synergy-HT型多功能酶標(biāo)儀（美國BioTck公司）；SE300型電泳儀、TE22型轉(zhuǎn)膜儀（美國Hoefer公司）；EC3 410型化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)（美國UVPN公司）。

1.4 分組與造模 將120只大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對(duì)照組，模型組，丙戊酸鈉組和藏紅花素低、中、高劑量組，每組20只。除正常對(duì)照組外，其余各組均采用氯化鋰-匹羅卡品（Li-Pc）化學(xué)點(diǎn)燃法制備EP大鼠模型[8]：以127 mg/kg劑量腹腔注射Li溶液，20 h后以15 mg/kg劑量背部皮下注射Pc溶液；空白對(duì)照組各步驟均同步給予0.9%氯化鈉溶液。造模成功判斷標(biāo)準(zhǔn)[9]：按照Racine分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)EP發(fā)作進(jìn)行分級(jí)（見“1.6.1”），連續(xù)出現(xiàn)5次4～5級(jí)EP發(fā)作即認(rèn)定為造模成功。

1.5 實(shí)驗(yàn)給藥 各組大鼠均于注射Pc前30 min腹腔注射給藥1次，丙戊酸鈉組腹腔注射給予濃度60 mg/mL的丙戊酸鈉溶液（注射劑量5 mL/kg）[10]，藏紅花素低、中、高劑量組分別腹腔注射濃度1、2、4 mg/mL的藏紅花素（注射劑量5 mL/kg）[11]，模型組和正常對(duì)照組同步腹腔注射給予0.9%氯化鈉溶液（注射劑量5 mL/kg）。

1.6 觀察指標(biāo)

1.6.1 EP發(fā)作程度分級(jí)Pc注射后2 h，對(duì)照Racine分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)EP發(fā)作進(jìn)行分級(jí)[9]：無發(fā)作為0級(jí)；口周及面部肌肉抽搐為1級(jí)；點(diǎn)頭或頻繁抖動(dòng)為2級(jí)；前肢局限性陣攣為3級(jí)；前肢局限性陣攣伴后肢站立的全身強(qiáng)直性發(fā)作為4級(jí)；前肢局限性陣攣伴有站立并摔倒、翻滾的全身強(qiáng)直陣攣發(fā)作為5級(jí)。

1.6.2 HE染色法行大腦海馬組織病理學(xué)檢查Pc注射24 h后，分別隨機(jī)取各組大鼠10只，腹腔注射10%水合氯醛溶液（3 mL/kg）實(shí)施麻醉，脊椎脫臼處死，斷頭取腦，去除小腦、腦干后置于4%多聚甲醛溶液固定72 h，石蠟包埋、5μm厚度切片、梯度乙醇脫蠟和二甲苯透明，然后行HE染色，通過光學(xué)顯微鏡觀察各組大鼠海馬組織病理學(xué)改變。

1.6.3 TUNEL法觀察海馬神經(jīng)元凋亡水平 取腦組織石蠟切片，經(jīng)梯度乙醇脫蠟和二甲苯透明后，按照TUNEL試劑盒操作說明進(jìn)行染色處理，封片后通過光學(xué)顯微鏡觀察各組大鼠海馬神經(jīng)元凋亡狀態(tài)；凋亡指數(shù)（Apoptosis Index，AI）計(jì)算：每只大鼠選取同部位5張染色切片，每張切片選取5個(gè)不重疊視野計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞總數(shù)，取平均值，AI（%）=（凋亡細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)）×100%。

1.6.4 海馬組織生化制備檢測(cè)Pc注射24 h后，分別取各組剩余的10只大鼠，麻醉后脊椎脫臼處死，在冰上斷頭取腦并剝?nèi)『ｑR組織，加入適量4℃裂解液后研磨勻漿，4℃、3 000 r/min離心（離心半徑10 cm）10 min取上清液，然后遵照試劑盒操作方法進(jìn)行處理后，通過紫外-可見分光光度計(jì)檢測(cè)各組大鼠海馬組織MDA含量和SOD、CAT活力，通過酶標(biāo)儀檢測(cè)TNF-α、IL-1β、IL-6含量。

1.6.5 Western blotting法檢測(cè)海馬組織蛋白表達(dá) 取海馬組織勻漿液，4℃、12 000 r/min離心（離心半徑10 cm）25 min取沉淀，通過BCA法檢測(cè)蛋白總濃度后95℃水浴使蛋白變性，30μg蛋白量上樣、SDS-PAGE膠電泳、濕法轉(zhuǎn)PVDF膜、5%脫脂奶粉37℃封閉1 h后，滴加目標(biāo)蛋白和β-actin一抗后4℃孵育過夜，洗膜后滴加IgG二抗室溫孵育1 h，洗膜后滴加DAB顯色，以β-actin為內(nèi)參半定量目標(biāo)蛋白表達(dá)，檢測(cè)海馬組織糖調(diào)節(jié)蛋白78（GRP78）、增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白（CHOP）、激活型半胱氨酸蛋白酶-12（Cleved Caspase-12）、B細(xì)胞淋巴瘤基因-2（Bcl-2）、Bcl-2相關(guān)X蛋白（Bax）、核因子-κB（NF-κB）蛋白表達(dá)情況。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 25.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；EP發(fā)作等級(jí)比較采用Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)，兩兩比較采用Nemenyi法檢驗(yàn)；P〈0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠EP發(fā)作等級(jí)比較 正常對(duì)照組大鼠未見EP發(fā)作；模型組大鼠EP發(fā)作等級(jí)明顯高于正常對(duì)照組（P〈0.01）；丙戊酸鈉組和藏紅花素中、高劑量組大鼠EP發(fā)作等級(jí)明顯低于模型組（P〈0.01）；藏紅花素低劑量組大鼠EP發(fā)作等級(jí)與模型組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〉0.05）；藏紅花素高劑量組EP發(fā)作等級(jí)明顯低于丙戊酸鈉組（P〈0.01）。（見表1）

表1 各組大鼠EP發(fā)作等級(jí)比較

2.2 各組大鼠大腦海馬組織病理學(xué)改變情況 正常對(duì)照組大鼠大腦海馬神經(jīng)元呈圓形或橢圓形，排列整齊，核膜、核仁邊界清晰；模型組大鼠海馬神經(jīng)元可見形態(tài)不規(guī)則、排列紊亂、層次不清，核膜不清，核仁固縮、偏移、深染等病理學(xué)形態(tài)結(jié)構(gòu)改變；與模型組比較，丙戊酸鈉組和藏紅花素低、中、高劑量組大鼠海馬神經(jīng)元病變呈不同程度減輕；藏紅花素高劑量組大鼠大腦海馬神經(jīng)元形態(tài)較規(guī)則、排列較整齊、核膜核仁邊界清晰，效果優(yōu)于藏紅花素低、中劑量組。（見圖1）

圖1 各組大鼠大腦海馬組織病理學(xué)改變比較（HE，×400）

2.3 各組大鼠海馬神經(jīng)元凋亡情況比較 與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠海馬神經(jīng)元凋亡數(shù)量明顯增多；與模型組比較，丙戊酸鈉組和藏紅花素中、高劑量組大鼠海馬神經(jīng)元凋亡數(shù)量明顯減少；藏紅花素低劑量組大鼠海馬神經(jīng)元凋亡數(shù)量與模型組比較，未見明顯變化；與丙戊酸鈉組比較，藏紅花素高劑量組大鼠海馬神經(jīng)元凋亡數(shù)量明顯減少。（見圖2）

圖2 各組大鼠海馬神經(jīng)元凋亡情況（TUNEL，×400）

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠海馬神經(jīng)元AI明顯升高（P〈0.01）；與模型組比較，丙戊酸鈉組和藏紅花素中、高劑量組大鼠海馬神經(jīng)元AI明顯降低（P〈0.01）；藏紅花素低劑量組大鼠海馬神經(jīng)元AI與模型組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〉0.05）；與丙戊酸鈉組比較，藏紅花素高劑量組AI明顯降低（P〈0.01）。（見表2）

表2 各組大鼠海馬神經(jīng)元AI比較（±s）

表2 各組大鼠海馬神經(jīng)元AI比較（±s）

注：與正常對(duì)照組比較，aP〈0.01；與模型組比較，bP〈0.01；與丙戊酸鈉組比較，cP〈0.01

組別 動(dòng)物數(shù)（只）給藥劑量（mg/kg）AI（%）正常對(duì)照組 10 - 2.98±0.52模型組 10 - 48.15±8.74a丙戊酸鈉組 10 300 17.03±3.22b藏紅花素低劑量組 10 5 42.96±8.59藏紅花素中劑量組 10 10 24.70±4.73b藏紅花素高劑量組 10 20 14.18±2.83b c

2.4 各組大鼠海馬組織SOD、CAT活力和MDA含量比較 與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠海馬組織SOD、CAT活力降低，MDA含量升高（P〈0.01）；與模型組比較，丙戊酸鈉組和藏紅花素中、高劑量組大鼠海馬組織SOD、CAT活力升高，MDA含量降低（P〈0.05或P〈0.01）；藏紅花素低劑量組大鼠海馬組織SOD、CAT活力和MDA含量與模型組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〉0.05）；與丙戊酸鈉組比較，藏紅花素高劑量組大鼠海馬組織SOD活力升高，MDA含量降低（P〈0.05或P〈0.01）。（見表3）

表3 各組大鼠海馬組織SOD、CAT活力和MDA含量比較（±s）

表3 各組大鼠海馬組織SOD、CAT活力和MDA含量比較（±s）

注：與正常對(duì)照組比較，aP〈0.01；與模型組比較，bP〈0.05，cP〈0.01；與丙戊酸鈉組比較，dP〈0.05，eP〈0.01

組別 動(dòng)物數(shù)（只）給藥劑量（mg/kg）SOD（U/mg）CAT（U/mg）MDA（nmol/mg）正常對(duì)照組 10 - 2.73±0.35 55.31±6.59 7.24±1.46模型組 10 - 1.38±0.16a 44.87±4.62a 28.05±3.92a丙戊酸鈉組 10 300 1.80±0.22c 50.15±5.40b 16.39±3.07c藏紅花素低劑量組10 5 1.46±0.18 46.79±5.03 24.87±3.83藏紅花素中劑量組10 10 1.91±0.24c 49.86±5.24b 20.16±3.17c藏紅花素高劑量組10 20 2.36±0.30c e 52.37±5.86c 13.45±2.44c d

2.5 各組大鼠海馬組織TNF-α、IL-1β、IL-6含量比較 模型組大鼠海馬組織TNF-α、IL-1β、IL-6含量明顯高于正常對(duì)照組（P〈0.01）；丙戊酸鈉組和藏紅花素中、高劑量組大鼠海馬組織TNF-α、IL-1β、IL-6含量明顯低于模型組（P〈0.01）；藏紅花素低劑量組大鼠海馬組織TNF-α、IL-1β、IL-6含量與模型組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〉0.05）；藏紅花素高劑量組大鼠海馬組織TNF-α、IL-6含量明顯低于丙戊酸鈉組（P〈0.01）。（見表4）

表4 各組大鼠海馬組織TNF-α、IL-1β、IL-6含量比較（±s，pg/mL）

表4 各組大鼠海馬組織TNF-α、IL-1β、IL-6含量比較（±s，pg/mL）

注：與正常對(duì)照組比較，aP〈0.01；與模型組比較，bP〈0.01；與丙戊酸鈉組比較，cP〈0.01

組別 動(dòng)物數(shù)（只）給藥劑量（mg/kg）TNF-α IL-1β IL-6空白對(duì)照組 10 - 502.73±54.16 28.13±3.77 42.96±5.31模型組 10 - 1 142.35±128.40a 50.26±5.94a 99.05±10.72a丙戊酸鈉組 10 300 680.17±83.26b 37.02±4.03b 59.17±5.73b藏紅花素低劑量組10 5 1 039.52±131.08 46.14±5.52 91.42±9.86藏紅花素中劑量組10 10 804.15±98.42b 40.32±4.79b 68.04±7.53b藏紅花素高劑量組10 20 495.22±57.49b c 34.27±4.11b 51.16±4.60b c

2.6 各組大鼠海馬組織GRP78、CHOP蛋白表達(dá)比較 與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠海馬組織GRP78、CHOP蛋白表達(dá)明顯上調(diào)（P〈0.01）；與模型組比較，丙戊酸鈉組和藏紅花素中、高劑量組大鼠海馬組織GRP78、CHOP蛋白表達(dá)明顯下調(diào)（P〈0.01）；藏紅花素低劑量組大鼠海馬組織GRP78、CHOP蛋白表達(dá)與模型組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〉0.05）；與丙戊酸鈉組比較，藏紅花素高劑量組大鼠海馬組織GRP78、CHOP表達(dá)明顯下調(diào)（P〈0.01）。（見圖3、表5）

圖3 各組大鼠海馬組織GRP78、CHOP蛋白表達(dá)電泳圖

表5 各組大鼠海馬組織GRP78、CHOP蛋白表達(dá)比較（±s）

表5 各組大鼠海馬組織GRP78、CHOP蛋白表達(dá)比較（±s）

注：與正常對(duì)照組比較，aP〈0.01；與模型組比較，bP〈0.01；與丙戊酸鈉組比較，cP〈0.01

組別 動(dòng)物數(shù)（只）給藥劑量（mg/kg）GRP78/β-actin CHOP/β-actin白對(duì)照組 10 - 0.09±0.04 0.10±0.03型組 10 - 0.78±0.19a 0.72±0.16a戊酸鈉組 10 300 0.26±0.06b 0.41±0.11b紅花素低劑量組 10 5 0.65±0.14 0.60±0.13紅花素中劑量組 10 10 0.24±0.06b 0.38±0.08b空模丙藏藏藏紅花素高劑量組 10 20 0.11±0.05b c 0.14±0.04b c

2.7 各組大鼠海馬組織Cleved Caspase-12、Bcl-2、Bax、NF-κB蛋白表達(dá)比較 與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠海馬組織Cleved Caspase-12、Bax、NF-κB蛋白表達(dá)明顯上調(diào)，Bcl-2表達(dá)明顯下調(diào)（P〈0.01），Bcl-2/Bax比值明顯降低（P〈0.01）；與模型組比較，丙戊酸鈉組和藏紅花素中、高劑量組大鼠海馬組織Cleved Caspase-12、Bax、NF-κB蛋白表達(dá)明顯下調(diào)，Bcl-2表達(dá)明顯上調(diào)（P〈0.01），Bcl-2/Bax比值明顯升高（P〈0.01）；藏紅花素低劑量組大鼠海馬組織Cleved Caspase-12、Bcl-2、Bax、NF-κB蛋白表達(dá)與模型組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〉0.05），藏紅花素低劑量組大鼠海馬組織Bcl-2/Bax比值明顯高于模型組（P〈0.01）；與丙戊酸鈉組比較，藏紅花素高劑量組大鼠海馬組織Cleved Caspase-12、NF-κB表達(dá)明顯下調(diào)而Bcl-2表達(dá)明顯上調(diào)（P〈0.05或P〈0.01），Bcl-2/Bax比值明顯升高（P〈0.01）。（見表6、圖4）

圖4 各組大鼠海馬組織Cleved Caspase-12、Bcl-2、Bax、NF-κB蛋白表達(dá)電泳圖

表6 各組大鼠海馬組織Cleved Caspase-12、bcl-2、Bax、NF-κB蛋白表達(dá)及Bcl-2/Bax比值比較（±s）

注：與正常對(duì)照組比較，aP〈0.01；與模型組比較，bP〈0.01；與丙戊酸鈉組比較，cP〈0.05，dP〈0.01

組別 動(dòng)物數(shù)（只）給藥劑量（mg/kg）Cleved Caspase-12/β-actin Bcl-2/β-actin Bax/β-actin NF-κB/β-actin Bcl-2/Bax空白對(duì)照組 10 - 0.13±0.03 0.95±0.16 0.04±0.02 0.03±0.02 23.75±4.86模型組 10 - 1.08±0.19a 0.07±0.04a 0.45±0.09a 0.98±0.20a 0.15±0.05a丙戊酸鈉組 10 300 0.19±0.05b 0.73±0.14b 0.14±0.04b 0.35±0.08b 5.21±1.17b藏紅花素低劑量組10 5 0.96±0.17 0.11±0.05 0.39±0.08 0.82±0.18 0.28±0.08b藏紅花素中劑量組10 10 0.52±0.11b 0.32±0.07b 0.16±0.04b 0.50±0.12b 2.06±0.43b藏紅花素高劑量組10 20 0.12±0.04b d 0.88±0.15b c 0.06±0.03b d 0.08±0.03b d 14.67±2.37b d

3 討 論

EP是一種常見的慢性神經(jīng)系統(tǒng)疾病，以感覺、意識(shí)、精神、行為等功能性障礙為主要臨床表現(xiàn)，具有反復(fù)、急性自發(fā)的特點(diǎn)。EP發(fā)作是大腦神經(jīng)元過度興奮和同步異常放電所致，該過程導(dǎo)致神經(jīng)元損傷或丟失使EP病情進(jìn)行性加重，而海馬體是最敏感的腦區(qū)。EP發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，其中氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)是EP發(fā)作和神經(jīng)退行性變的重要機(jī)制。

藏紅花（又名番紅花）是一種鳶尾科番紅花屬多年生植物，為我國傳統(tǒng)中藥品種，味甘、性平，具有活血化瘀、散郁開結(jié)之功效。藏紅花素是藏紅花的主要活性成分，具有良好的抗氧化、抗凋亡活性，較易通過血腦屏障，溫彬等[7]研究發(fā)現(xiàn)藏紅花素能夠通過抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)和神經(jīng)元凋亡減輕大鼠缺血性腦損傷。丙戊酸鈉是一種廣泛應(yīng)用于臨床的廣譜抗EP藥，也是EP相關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究的常用陽性對(duì)照藥物。EP動(dòng)物模型的制備方法主要有電點(diǎn)燃和化學(xué)點(diǎn)燃兩大類，其中Li-Pc化學(xué)點(diǎn)燃法制備的EP大鼠模型病理特征與人類高度相似，并且操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性高，是目前公認(rèn)的EP大鼠模型制作方法。本實(shí)驗(yàn)采用Li-Pc法制備EP大鼠模型，并以丙戊酸鈉作為陽性對(duì)照藥物，研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)藏紅花素干預(yù)能夠有效降低EP發(fā)作等級(jí)，抑制大腦海馬組織病變和海馬神經(jīng)元凋亡，并且藏紅花素高劑量組效果優(yōu)于丙戊酸鈉組，提示藏紅花素對(duì)Li-Pc所致EP大鼠腦組織具有保護(hù)作用。

活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）過剩是發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)的物質(zhì)基礎(chǔ)，EP發(fā)作時(shí)大腦神經(jīng)元過度興奮和異常放電導(dǎo)致ROS大量生成，抗氧化酶（SOD、CAT）被過度消耗，導(dǎo)致ROS代謝失衡而蓄積；過剩的ROS破壞核酸、蛋白質(zhì)及生物膜脂質(zhì)等分子結(jié)構(gòu)，生成具有生物毒性的MDA，因此MDA含量和SOD、CAT活性能夠反映機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)程度[12]。EP發(fā)病過程中大腦神經(jīng)元過度興奮將刺激炎癥細(xì)胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）大量釋放，引發(fā)系列炎癥反應(yīng)進(jìn)而導(dǎo)致海馬神經(jīng)元損傷；并且TNF-α、IL-1β作為炎性趨化因子能夠刺激粒細(xì)胞而進(jìn)一步釋放炎癥因子，形成炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)而加重炎癥損傷[13]；IL-6則能夠刺激細(xì)胞大量產(chǎn)生活性氧（ROS）而加重氧化應(yīng)激損傷[14]。本研究發(fā)現(xiàn)，藏紅花素干預(yù)能夠明顯提高EP大鼠大腦海馬組織SOD、CAT活力并降低MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6含量，并且藏紅花素高劑量組對(duì)CAT活力和MDA、TNF-α、IL-6含量的調(diào)控作用優(yōu)于丙戊酸鈉組，提示藏紅花素對(duì)Li-Pc所致EP大鼠海馬組織氧化應(yīng)激損傷和炎癥反應(yīng)具有抑制作用。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是一種膜性亞細(xì)胞器，GRP78是一種鈣離子伴侶蛋白，對(duì)維持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要，既往研究發(fā)現(xiàn)病理性刺激細(xì)胞導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)過度應(yīng)激時(shí)，導(dǎo)致大量錯(cuò)誤折疊和未折疊的蛋白蓄積，進(jìn)而誘導(dǎo)GRP78大量合成[15]。因此，GRP78升高可作為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志檢測(cè)物質(zhì)。CHOP是重要的促凋亡信號(hào)分子，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激將誘導(dǎo)CHOP表達(dá)上調(diào)，刺激Cleved Caspase-12表達(dá)，進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[16]。Bcl-2和Bax同屬于Bcl-2蛋白家族，Bax能夠誘導(dǎo)線粒體膜通透性異常升高，導(dǎo)致細(xì)胞色素C（Cyt C）釋放而啟動(dòng)線粒體凋亡途徑[17]；Bcl-2則對(duì)線粒體膜通透性具有保護(hù)作用，并且Bcl-2能夠與Bax形成二聚體而抑制其活性，所以Bax/Bcl-2表達(dá)比值能夠反映二者對(duì)細(xì)胞線粒體凋亡途徑的調(diào)控作用[18]。NF-κB能夠刺激炎癥因子（TNF-α、IL-1β）釋放，抑制NF-κB表達(dá)則能夠抑制炎癥反應(yīng)[19]。本研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)藏紅花素干預(yù)能夠明顯下調(diào)EP大鼠大腦海馬組織GRP78、CHOP、Cleved Caspase-12、Bax、NF-κB蛋白表達(dá)并上調(diào)Bcl-2表達(dá)，提高Bcl-2/Bax比值，并且藏紅花素高劑量組對(duì)GRP78、CHOP、Cleved Caspase-12、Bcl-2、NF-κB表達(dá)及Bcl-2/Bax比值的調(diào)控作用優(yōu)于丙戊酸鈉組，提示藏紅花素對(duì)Li-Pc所致EP大鼠腦組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激具有抑制作用，這可能是藏紅花素抑制氧化應(yīng)激損傷和炎癥反應(yīng)的重要分子機(jī)制。

綜上所述，藏紅花素對(duì)Li-Pc所致EP大鼠腦組織具有保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能與藏紅花素抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路介導(dǎo)的氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)有關(guān)。