張文靜，林云勇，陳 銳，邱少東，陳 菲

（廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院超聲科，廣東 廣州 510260）

乳腺癌（breast cancer）是女性常見的惡性腫瘤，早期篩查對于降低其死亡率至關(guān)重要[1]。雌激素受體（estrogen receptor，ER）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）和人表皮生長因子受體-2（HER-2）等雖已應(yīng)用于臨床診斷，但無法直接用于預(yù)測預(yù)后[2]。目前，關(guān)于乳腺癌侵潤、轉(zhuǎn)移的詳細(xì)機(jī)制研究較少[3，4]。MLPH與乳腺癌患者的化療反應(yīng)和預(yù)后相關(guān)，但其表達(dá)與預(yù)后的具體關(guān)系有待進(jìn)一步研究。本研究擬通過多個在線數(shù)據(jù)庫進(jìn)行綜合生物信息學(xué)分析，分析MLPH基因表達(dá)與乳腺癌預(yù)后之間的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

基于Oncomine數(shù)據(jù)庫分析乳腺癌及癌旁組織中MLPH的mRNA表達(dá)水平差異；基于Breast Cancer Gene-Expression Miner數(shù)據(jù)庫分析不同亞型乳腺癌患者中MLPH的mRNA表達(dá)差異；基于UALCAN數(shù)據(jù)庫分析及評估乳腺癌患者中MLPH的蛋白表達(dá)情況?；赑rognoScan數(shù)據(jù)庫分析MLPH基因的表達(dá)與乳腺癌患者生存率的關(guān)系；通過Kaplan-Meier數(shù)據(jù)庫計算總生存期（OS）、無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移生存期（DMFS）、無復(fù)發(fā)生存期（RFS）和進(jìn)展后生存期（PPS），并評估MLPH表達(dá)與乳腺癌患者預(yù)后的關(guān)系。使用Kaplan-Meier數(shù)據(jù)庫評估MLHP蛋白表達(dá)與預(yù)后之間的關(guān)系，使用R語言進(jìn)行基因集富集分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 MLPH在乳腺癌中的表達(dá)情況 MLPH在導(dǎo)管內(nèi)篩狀腺癌、乳腺小葉和導(dǎo)管混合癌、乳腺浸潤性小葉癌中呈高表達(dá)，見圖1A、1 B、1 C；MLPH蛋白在乳腺癌組織中呈高表達(dá)，見圖1D。

圖1 MLPH mRNA和蛋白在乳腺癌患者和癌旁組織中的表達(dá)比較

2.2 MLPH基因表達(dá)與臨床指標(biāo)的關(guān)系 通過Breast Cancer Gene-Expression Miner數(shù)據(jù)庫分析MLPH表達(dá)與年齡、SBR、ER、PR、HER-2、淋巴結(jié)狀態(tài)、基底樣狀態(tài)及三陰性狀態(tài)間的關(guān)系發(fā)現(xiàn)：與＞51歲組相比，≤51歲組的MLPH表達(dá)顯著降低；Scarff-Bloom-Richardson（SBR）是一種評估腎小管形成、細(xì)胞核多形性特征和有絲分裂指數(shù)的組織學(xué)分級，SBR分級更高的乳腺癌患者的MLPH基因有著更高的表達(dá)；雌激素受體（ER）和孕酮受體（PR）狀態(tài)與MLPH表達(dá)呈負(fù)相關(guān)；淋巴結(jié)陰性（N）的乳腺癌患者的MLPH水平高于淋巴結(jié)陽性患者。此外，非基底樣亞型的乳腺癌患者及三陰性乳腺癌（TNBC）患者的MLPH表達(dá)顯著升高。

2.3 MLPH高表達(dá)與乳腺癌預(yù)后的關(guān)系 MLPH高表達(dá)的乳腺癌患者有著較高的OS、DMFS、RFS和PPS，見圖2A、2 B、2 C、2 D；MLPH蛋白的高表達(dá)與患者5年總生存期密切相關(guān)，見圖2E。通過GSEA進(jìn)行KEGG通路富集分析，顯示MLPH與G蛋白偶聯(lián)受體（G Protein-Coupled Receptors，GPCR）信號通路密切相關(guān)，見圖2F。

圖2 MLPH高表達(dá)與乳腺癌預(yù)后的關(guān)系

3 討論

乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程與癌基因的異常表達(dá)密切相關(guān)，新的生物標(biāo)志物的識別對其診斷、治療及預(yù)后至關(guān)重要[5，6]。MLPH編碼人體內(nèi)的一種載體蛋白-親黑素，是一種Rab效應(yīng)蛋白，可以與Ras相關(guān)的GTP酶、Rab27A、Rab27B和運動蛋白肌球蛋白相互作用[7，8]。直接揭示MLPH在乳腺癌中的特定生物學(xué)功能的研究較少，但一些研究表明[9，10]，MLPH與乳腺癌較好的化療反應(yīng)和良好的生存預(yù)后顯著相關(guān)，且MLPH還被認(rèn)為是與預(yù)后相關(guān)的生物標(biāo)志物。另一項研究表明[11]，MLPH在前列腺癌中的表達(dá)受AR的調(diào)控，并且MLPH的基因序列含有一個AR結(jié)合位點。然而，MLPH表達(dá)在乳腺癌預(yù)后中的意義尚不清楚，本研究通過多數(shù)據(jù)聯(lián)合進(jìn)行生物信息學(xué)分析，揭示了MLPH是一種與乳腺癌預(yù)后相關(guān)的潛在預(yù)測生物標(biāo)志物。

本研究通過Oncomine數(shù)據(jù)庫分析了MLPH在乳腺癌數(shù)據(jù)庫中的表達(dá)。MLPH在導(dǎo)管內(nèi)篩狀乳腺癌，乳腺小葉和導(dǎo)管混合癌，乳腺浸潤性小葉癌中的表達(dá)明顯高于癌旁組織。Breast Cancer Gene-Expression Miner數(shù)據(jù)庫分析顯示，ER、PR和SBR分級、基底樣狀態(tài)和三陰性狀態(tài)與MLPH表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。然而，與正常組織相比，年齡和淋巴結(jié)狀態(tài)與乳腺癌樣本中的MLPH水平呈正相關(guān)。這些結(jié)果表明了MLPH的表達(dá)可以預(yù)測乳腺癌的預(yù)后。本研究使用Kaplan-Meier Plotter、PrognoScan和Breast Cancer Gene-Expression Miner數(shù)據(jù)庫進(jìn)一步研究了MLPH在乳腺癌中的預(yù)后價值。MLPH表達(dá)增加的患者表現(xiàn)出更高的OS、RFS、DMFS和DFS。上述結(jié)果均表明了MLPH的表達(dá)可能是與乳腺癌預(yù)后相關(guān)的預(yù)測生物標(biāo)志物。GSEA分析揭示了乳腺癌中富含GPCR信號通路的MLPH的功能。

綜上所述，MLPH可作為乳腺癌預(yù)后的重要生物標(biāo)志物，其在乳腺癌治療中具有重要潛在臨床價值，作用機(jī)制可能與GPCR信號通路密切相關(guān)。