■吳 昊 蔣俊劼 楊佳夢(mèng) 陳登文 高 鑫 祝 丹*

（1.通威農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司，四川成都 610014；2.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部水產(chǎn)畜禽營(yíng)養(yǎng)與健康養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川成都 610093）

由于我國(guó)目前黃羽肉雞的飼養(yǎng)模式較為落后，地面平養(yǎng)的方式導(dǎo)致黃羽肉雞受到疾病的挑戰(zhàn)形勢(shì)嚴(yán)峻，同時(shí)由于黃羽肉雞自身抗病能力比較脆弱的生理特點(diǎn)，導(dǎo)致其在無(wú)抗養(yǎng)殖時(shí)代面臨的挑戰(zhàn)更大，尤其在腸道健康方面[1-2]。葡萄糖氧化酶（Glucose oxidase,GOD），作為一種新型需氧脫氫酶制劑，能夠?qū)Ｒ恍缘匮趸咸烟浅蔀閺?qiáng)氧化劑過氧化氫和類酸化劑葡萄糖酸，消化腸道內(nèi)大量氧氣的同時(shí)降低腸道pH。家禽腸道內(nèi)常見有害菌（如產(chǎn)氣莢膜梭菌為堿性需氧菌），所以葡萄糖氧化酶一般視為類抗生素和酸化劑的替代品或增強(qiáng)劑[3-4]。有研究顯示，在畜禽飼糧中添加葡萄糖氧化酶能夠殺滅腸道有害菌，改善腸道健康，從而降低料重比、提高生長(zhǎng)性能[5-6]。由于生產(chǎn)水平不同，葡萄糖氧化酶的提純工藝也不一[7]，目前葡萄糖氧化酶在黃羽肉雞中的應(yīng)用研究報(bào)道還較少，因此，本試驗(yàn)通過觀察不同來(lái)源的葡萄糖氧化酶對(duì)黃羽肉雞生長(zhǎng)性能和養(yǎng)分表觀消化率的影響，探討葡萄糖氧化酶對(duì)黃羽肉雞的有效性及活性的相關(guān)性，為其在黃羽肉雞養(yǎng)殖上的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)原料

試驗(yàn)酶：6種葡萄糖氧化酶均為粉狀固體，均購(gòu)于市場(chǎng)銷量靠前的不同生產(chǎn)廠家。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)采用單因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)，將1 120羽遺傳背景、批次相同和體重接近的健康24日齡快大型黃羽肉公雞[九斤黃黃羽肉雞，（485.5±3.09）g]，隨機(jī)分為7個(gè)試驗(yàn)處理，每個(gè)處理組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)40羽雞。試驗(yàn)分為中雞階段（25～45日齡）和大雞階段（46～75日齡）兩個(gè)階段，每階段結(jié)束前4 d進(jìn)行代謝試驗(yàn)。對(duì)照組（CON）飼喂對(duì)應(yīng)兩階段的基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組飼喂在基礎(chǔ)飼糧上添加6 種飼料用的葡萄糖氧化酶GOD1（2 014 U）、GOD2（2 027 U）、GOD3（2 493 U）、GOD4（2 519 U）、GOD5（4 702 U）和GOD6（5 508 U）的6種試驗(yàn)日糧（中雞階段和大雞階段分別添加200 g/t和100 g/t）?；A(chǔ)飼糧營(yíng)養(yǎng)水平參考美國(guó)NRC（1994）[8]和中國(guó)肉雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（2004）[9]，同時(shí)結(jié)合生產(chǎn)實(shí)踐配制基礎(chǔ)飼糧。基礎(chǔ)飼糧組成和營(yíng)養(yǎng)水平見表1，試驗(yàn)期共計(jì)50 d。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)雞為網(wǎng)上籠養(yǎng)，試驗(yàn)前對(duì)雞舍設(shè)備進(jìn)行消毒。肉公雞育雛后開展試驗(yàn)，雞自由采食和飲水，1次/d自動(dòng)刮糞。飼養(yǎng)期間按照常規(guī)免疫程序進(jìn)行免疫接種和消毒管理。

1.4 樣品采集和指標(biāo)檢測(cè)

1.4.1 GOD酶活和耐溫存留率

6 種葡萄糖氧化酶使用統(tǒng)一的方法重新測(cè)定酶活。酶活定義為在37 ℃、pH 6.0條件下，每分鐘內(nèi)從過量底物中降解釋放1 μmol 產(chǎn)物所需要的酶量定義為1個(gè)酶活單位，即1 U。耐溫存留率為80 ℃水浴加熱5 min 后的存留率，即80 ℃水浴5 min 后酶活占初始酶活的百分比。

1.4.2 生長(zhǎng)性能

分別在試驗(yàn)開始第1、20 天和第50 天早上8：00對(duì)各組雞空腹稱重（禁食12 h，僅供飲水），同時(shí)稱量各重復(fù)剩余飼料重。每日觀察雞只健康狀況，計(jì)算各個(gè)階段的平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）、料重比（F/G）和死亡率。

1.4.3 養(yǎng)分表觀消化率

使用鹽酸不溶灰分（AIA）作為內(nèi)源指示劑，參見標(biāo)準(zhǔn)《飼料中鹽酸不溶灰分的測(cè)定》（GB/T 23742—2009）。飼糧及糞便中的干物質(zhì)、粗蛋白、鈣和磷的檢測(cè)按照張麗英[10]進(jìn)行，計(jì)算各營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)養(yǎng)分表觀消化率，計(jì)算公式參照Short等[11]。

式中：IR——為飼料中酸不溶灰分含量；

IF——糞樣中酸不溶灰分含量；

NF——糞樣中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量；

NR——飼糧中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)首先采用Microsoft Excel 2016 進(jìn)行整理，再采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，差異顯著時(shí)進(jìn)行Duncan’s 多重比較。所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，P＜0.01視為差異極顯著，P＜0.05視為差異顯著，0.05＜P＜0.10視為有趨勢(shì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同葡萄糖氧化酶的酶活和高溫存留率（見表2）

由表2 可知，6 種不同葡萄糖氧化酶按照統(tǒng)一條件（37 ℃、pH 6.0）檢測(cè)初始酶活，酶活差異極顯著（P＜0.01），范圍為2 014～5 508 U；80 ℃水浴5 min后酶活差異極顯著（P＜0.01），范圍為1 055～3 566 U；高溫存留率差異極顯著，范圍為51.6%～70.8%（P＜0.01）。

表2 不同葡萄糖氧化酶的酶活及高溫存留率測(cè)定結(jié)果

2.2 不同葡萄糖氧化酶對(duì)黃羽肉雞生長(zhǎng)性能的影響（見表3）

表3 不同葡萄糖氧化酶對(duì)黃羽肉雞生長(zhǎng)性能的影響

相較于CON 組，GOD3、GOD4 組和GOD6 組顯著提高肉雞45日齡體重和25～45日齡階段ADG和ADFI（P＜0.05）；各組對(duì)肉雞46～75 日齡階段生長(zhǎng)性能差異不顯著（P＞0.05）。

2.3 不同葡萄糖氧化酶對(duì)黃羽肉雞養(yǎng)分表觀消化率的影響（見表4）

表4 不同葡萄糖氧化酶對(duì)黃羽肉雞養(yǎng)分表觀消化率的影響（%）

由表4 可知，與CON 組相比，GOD1 組和GOD6組25～45 日齡肉雞粗蛋白表觀消化率有降低的趨勢(shì)（0.05＜P＜0.10）；GOD1 組25～45 日齡鈣表觀消化率極顯著降低（P＜0.01），而GOD2 組顯著提高了鈣養(yǎng)分表觀消化率（P＜0.05）；GOD3 組和GOD4 組磷表觀消化率有提高趨勢(shì)（0.05＜P＜0.10）。肉雞46～70 日齡各組間差異均不顯著（P＞0.05）。

3 討論

3.1 不同葡萄糖氧化酶的酶活和高溫存留率

不同葡萄糖氧化酶由于菌株來(lái)源、固定化、基因工程改造不同，導(dǎo)致GOD穩(wěn)定性、酶活結(jié)構(gòu)、最適溫度和最適pH均可能有差異，最終體現(xiàn)到使用效果上。由于酶活定義不同，不同來(lái)源的GOD酶活并不在一致水平上。本次采用統(tǒng)一的酶活定義：在37 ℃、pH 6.0條件下，每分鐘內(nèi)從過量底物中降解釋放1 μmol產(chǎn)物所需要的酶量定義為1個(gè)酶活單位，即1 U[3，7]。高溫存留率主要反映酶活在高溫下的穩(wěn)定性，溫度參數(shù)主要模擬顆粒飼料調(diào)質(zhì)、制粒參數(shù)，GOD3、GOD5組和GOD6組在80 ℃水浴5 min高溫下存留率較高，表明對(duì)應(yīng)的日糧經(jīng)過生產(chǎn)后有效酶活更高。

3.2 不同葡萄糖氧化酶對(duì)黃羽肉雞生長(zhǎng)性能的影響

湯海鷗等[12]在白羽肉雞上添加不同劑量的GOD（酶活定義條件：37 ℃、pH 6.0條件下，酶活為1 000 U/g）100 g/t和200 g/t，肉雞全期平均日增重和飼料報(bào)酬得到明顯改善，且200 g/t 組優(yōu)于100 g/t；本試驗(yàn)在黃羽肉雞中雞階段、大雞階段分別添加200 g/t 和100 g/t GOD 可顯著改善平均日采食量，且中雞階段添加200 g/t 效果優(yōu)于100 g/t，結(jié)果與龐家滿等[13]研究結(jié)果相似，添加不同水平GOD（80～250 g/t）對(duì)黃羽肉雞36～70 日齡平均日日增重和料重比有顯著改善（P＜0.05），添加量380 g/t 最優(yōu)，同種GOD 在100～380 g/t范圍內(nèi)，效果與劑量呈現(xiàn)正相關(guān)。不同來(lái)源的GOD使用效果不同，侯振平等[14]在對(duì)不同水平GOD對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的研究中，GOD2組對(duì)斷奶仔豬末重、平均日增重分別顯著高于對(duì)照組和GOD1組。本試驗(yàn)中不同來(lái)源GOD對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能改善程度與酶活值、耐溫性不存在明顯的相關(guān)性，可能與GOD基因修飾性及在生物體內(nèi)穩(wěn)定性、最適溫度、最適pH有關(guān)[15-17]。

3.3 不同葡萄糖氧化酶對(duì)黃羽肉雞養(yǎng)分消化率的影響

崔細(xì)鵬等[18]在白羽肉雞上研究發(fā)現(xiàn)添加GOD 后可顯著提高蛋白質(zhì)表觀消化率、鈣表觀消化率、磷表觀消化率（P＜0.05），降低了腸道pH，腸道絨毛、隱窩結(jié)構(gòu)無(wú)顯著差異（P＞0.05），與郭玉光等[19]結(jié)果相似，進(jìn)一步證實(shí)GOD 可通過降低肉雞腸道pH，優(yōu)化腸道菌群，提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)利用率、改善肉雞生長(zhǎng)性能。本研究在肉雞中雞階段添加GOD提高了粗蛋白表觀消化率，與其他學(xué)者研究結(jié)果相似，但發(fā)現(xiàn)在中期階段對(duì)飼料中鈣表觀消化率有顯著的抑制作用，具體原因還需要進(jìn)一步驗(yàn)證。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，黃羽肉雞中雞階段飼糧添加常溫下實(shí)測(cè)酶活為2 493、2 519 U 和5 508 U 的葡萄糖氧化酶200 g/t 能改善肉雞平均日采食量從而提高平均日增重和階段末重。不同來(lái)源的GOD對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能改善有一定的差異，差異來(lái)源是因?yàn)榕c標(biāo)準(zhǔn)條件下的酶活絕對(duì)值、耐溫性相關(guān)性較小，更多與GOD在動(dòng)物消化道中實(shí)際發(fā)揮能力相關(guān)。