■蔣 騰 吳盈萍 李海英 吳利楠 趙曉鈺 唐碧徽 丁雅文 毛阿龍

（新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊 830052）

隨著畜禽養(yǎng)殖業(yè)的蓬勃發(fā)展，我國飼料資源短缺問題日益凸顯，嚴(yán)重制約了畜牧業(yè)的發(fā)展。蛋白質(zhì)原料成本在飼料生產(chǎn)的總成本中占35%以上，蛋白質(zhì)原料資源短缺及較高的飼料成本是當(dāng)前飼料配制過程中普遍面臨的問題。與傳統(tǒng)蛋白質(zhì)原料相比，昆蟲蛋白是最有前景的替代品之一。黃粉蟲富含粗蛋白（47.0%～60.2%）和粗脂肪（19.1%～36.7%），氨基酸比例均衡，還含有抗菌肽等功能性物質(zhì)，且黃粉蟲可處理日常廚余垃圾和農(nóng)業(yè)垃圾等有機(jī)廢棄物，生產(chǎn)成本較低。黃粉蟲作為蛋白質(zhì)飼料在家禽、水產(chǎn)品和豬等畜禽養(yǎng)殖上應(yīng)用都取得了較好的效果。

Elahi 等（2020）研究表明，日糧中添加4%的黃粉蟲粉能顯著提高白羽肉公雞（Ross 708）的體重和平均日增重，降低料重比，有提高21日齡肉仔雞血液中總抗氧化能力（T-AOC）的趨勢。Islam 等（2017）報(bào)道，在白羽肉公雞（Ross 308）飼糧中添加0.4%發(fā)酵黃粉蟲粉和0.4%發(fā)酵大麥蟲粉，均有提高血清中免疫球蛋白G（IgG）和免疫球蛋白A（IgA）含量的趨勢。譚秀良（2014）研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加3%的黃粉蟲和誘導(dǎo)表達(dá)抗菌肽黃粉蟲均可顯著提高愛拔益加（AA）肉雞十二指腸和空腸絨毛高度及其絨毛高度/隱窩深度（V/C）值，說明添加3%的黃粉蟲和誘導(dǎo)表達(dá)抗菌肽黃粉蟲能夠改善十二指腸和空腸的腸道組織形態(tài)，提高營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用效率，促進(jìn)肉雞健康生長。腸道菌群作為腸道的重要組成部分之一，在吸收營養(yǎng)、防御病原體等方面發(fā)揮著不可替代的作用。宿主和腸道菌群之間的相互作用會(huì)直接影響腸道對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收。此外，微生物菌群還通過競爭排斥過程中產(chǎn)生的抑菌或殺菌物質(zhì)來減少和防止腸道病原體的定植。然而，國內(nèi)目前關(guān)于黃粉蟲對良鳳花肉雞盲腸菌群影響的研究尚未見報(bào)道。試驗(yàn)通過研究黃粉蟲粉對良鳳花肉雞血清抗氧化性能、免疫性能、腸道組織形態(tài)和盲腸菌群的影響，探尋黃粉蟲粉的最適添加量，為其在肉雞飼糧中的應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用黃粉蟲由新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)環(huán)境昆蟲轉(zhuǎn)化有機(jī)廢棄物產(chǎn)業(yè)化研究基地提供，經(jīng)四川威爾檢測技術(shù)股份有限公司檢測，其營養(yǎng)成分含量分別為：粗蛋白52.01%、粗脂肪33.80%、粗灰分3.40%、水分3.00%、鈣0.046 7%、磷0.75%、蛋氨酸0.83%、賴氨酸2.95%。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)選用健康狀況良好的1 日齡的良鳳花肉雞公雞600只，隨機(jī)分組為5組，每組分為5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)24 只。對照組飼喂基礎(chǔ)日糧（TM0 組），試驗(yàn)組分別飼喂含3%（TM3 組）、5%（TM5 組）、7%（TM7 組）和9%（TM9 組）黃粉蟲粉的試驗(yàn)日糧，各組飼糧營養(yǎng)水平基本一致。試驗(yàn)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗(yàn)期70 d。

表1 試驗(yàn)日糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.3 飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗(yàn)在新疆瑪納斯縣新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)環(huán)境昆蟲轉(zhuǎn)化有機(jī)廢棄物產(chǎn)業(yè)化研究基地進(jìn)行。試驗(yàn)采用網(wǎng)床平養(yǎng)，試驗(yàn)期間雞只自由采食和飲水，各組飼養(yǎng)管理和環(huán)境條件一致，按常規(guī)免疫程序進(jìn)行免疫接種。

1.4 測定指標(biāo)及方法

1.4.1 血清抗氧化指標(biāo)

飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天，禁食12 h 后，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取2只肉雞進(jìn)行翅下靜脈采血5 mL，3 000 r/min離心15 min 后分離血清，于-20 ℃下保存，用于測定血清抗氧化指標(biāo)：總抗氧化能力（T-AOC）、總超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性以及丙二醛（MDA）的含量。

1.4.2 血清免疫指標(biāo)

飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天，禁食12 h 后，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取2只肉雞進(jìn)行翅下靜脈采血5 mL，3 000 r/min離心15 min后分離血清，于-20 ℃下保存，用于測定血清免疫指標(biāo)：免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）和補(bǔ)體C3、C4含量。

1.4.3 腸道形態(tài)學(xué)觀察

飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天，禁食12 h，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取2 只肉雞，屠宰后依次剝離十二指腸、空腸、回腸，截取中段2～3 cm 的腸道組織，腸道內(nèi)容物用生理鹽水緩慢沖洗干凈，浸入4%甲醛溶液中固定，固定24 h以上，進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋、切片、蘇木精-伊紅（H.E.）染色，中性樹膠封片后，在光學(xué)顯微鏡下觀察，測量絨毛高度（V）、隱窩深度（C）和肌層厚度，計(jì)算絨毛高度/隱窩深度（V/C）值。

1.4.4 盲腸內(nèi)容物16S rDNA測序

飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天，禁食12 h，從TM0 組和TM3組（生長性能最佳組）的每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)選取2 只肉雞，屠宰后迅速采集盲腸內(nèi)容物，收集于2 mL 無菌凍存管中，液氮速凍后-80 ℃保存（TM0 組盲腸內(nèi)容物樣品分別命名為TM0-1、TM0-2、TM0-3、TM0-4、TM0-5、TM0-6、TM0-7、TM0-8、TM0-9 和TM0-10，TM3 組盲腸內(nèi)容物樣品分別命名為TM3-1、TM3-2、TM3-3、TM3-4、TM3-5、TM3-6、TM3-7、TM3-8、TM3-9和TM3-10），送樣至諾禾致源生物技術(shù)有限公司進(jìn)行16S rDNA測序，獲得有效數(shù)據(jù)，分析盲腸菌群豐富度和多樣性。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用SPSS 19.0 軟件對血清抗氧化能力、免疫性能和腸道組織形態(tài)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，對差異顯著的處理進(jìn)行后續(xù)Duncan’s 多重比較，使用多項(xiàng)式擬合回歸分析檢驗(yàn)飼糧中黃粉蟲粉添加水平的線性和二次效應(yīng)。結(jié)果數(shù)據(jù)用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（SEM）”表示，統(tǒng)計(jì)顯著性水平為P＜0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 黃粉蟲粉對良鳳花肉雞抗氧化性能的影響（見表2）

由表2可知，TM3組肉雞血清中T-SOD活性顯著高于TM0 組和TM7 組16.45%（P＜0.05）和15.62%（P＜0.05），TM5 組肉雞血清中T-SOD 活性均顯著高于TM0 組 和TM7 組17.76%（P＜0.05）和16.93%（P＜0.05），且肉雞血清中T-SOD 活性與黃粉蟲粉添加量呈顯著線性和二次曲線相關(guān)（P＜0.05）。飼糧中添加黃粉蟲粉對肉雞血清中T-AOC、GSH-Px 活性以及MDA含量均無顯著影響（P＞0.05）。

表2 黃粉蟲粉對良鳳花肉雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

2.2 黃粉蟲粉對良鳳花肉雞免疫性能的影響（見表3）

由表3可知，飼糧中添加不同水平黃粉蟲粉對肉雞血清免疫指標(biāo)均無顯著影響（P＞0.05）。

表3 黃粉蟲粉對良鳳花肉雞血清免疫指標(biāo)的影響

2.3 黃粉蟲粉對良鳳花肉雞腸道組織形態(tài)的影響（見表4）

表4 黃粉蟲粉對良鳳花肉雞小腸組織形態(tài)的影響

由表4 可知，在絨毛高度方面，TM3 組回腸絨毛高度均顯著或極顯著高于TM0、TM7 組和TM9 組4.38%（P＜0.05）、14.28%（P＜0.01）和13.86%（P＜0.01），TM5 組回腸絨毛高度均極顯著高于TM7 組和TM9 組10.06%（P＜0.01）和9.66%（P＜0.01），TM0 組回腸絨毛高度均極顯著高于TM7 組和TM9 組9.49%（P＜0.01）和9.08%（P＜0.01），且回腸的絨毛高度與黃粉蟲粉添加量呈極顯著線性和二次曲線相關(guān)（P＜0.01）。

在隱窩深度方面，TM7組回腸隱窩深度顯著大于TM0組5.21%（P＜0.05），TM5組空腸隱窩深度顯著大于TM3組5.20%（P＜0.05），TM9組空腸隱窩深度極顯著高于TM3 組8.05%（P＜0.01），且回腸和空腸的隱窩深度與黃粉蟲粉的添加量均呈顯著線性相關(guān)（P＜0.05）。

在肌層厚度方面，TM3組回腸肌層厚度顯著或極顯著高于TM0、TM7 組和TM9 組10.81%（P＜0.01）、8.87%（P＜0.05）和9.89%（P＜0.01），且肉雞回腸的肌層厚度與黃粉蟲粉添加量呈極顯著二次曲線相關(guān)（P＜0.01）；TM3 組和TM5 組空腸肌層厚度均顯著高于TM0 組9.29%（P＜0.05）和8.25%（P＜0.05），且空腸的肌層厚度與黃粉蟲粉添加量呈顯著或極顯著的線性和二次曲線相關(guān)（P＜0.05或P＜0.01）。

在V/C值方面，TM0、TM3組和TM5組回腸V/C值均極顯著高于TM7 組20.11%（P＜0.01）、21.46%（P＜0.01）和16.67%（P＜0.01），TM0、TM3 組和TM5 組回腸V/C值均極顯著高于TM9組17.20%（P＜0.01）、18.50%（P＜0.01）和13.83%（P＜0.01），且回腸V/C 值與黃粉蟲粉添加量呈極顯著線性和二次曲線相關(guān)（P＜0.01）；TM3 組空腸V/C 值極顯著高于TM0、TM5、TM7 組和TM9 組7.02%（P＜0.01）、7.31%（P＜0.01）、10.51%（P＜0.01）和13.41%（P＜0.01），TM0 組和TM5 組空腸V/C值 顯 著 高 于TM7 組3.27%（P＜0.05）和2.98%（P＜0.05），TM0 組和TM5 組空腸V/C 值極顯著高于TM9組5.98%（P＜0.01）和5.69%（P＜0.01），且空腸V/C值與黃粉蟲粉添加量呈極顯著線性和二次曲線相關(guān)（P＜0.01）。隨著飼糧中黃粉蟲粉添加水平的增加，并有影響肉雞十二指腸V/C 值的趨勢（P=0.050）。各試驗(yàn)組與對照組肉雞空腸絨毛高度以及十二指腸絨毛高度、隱窩深度、肌層厚度和V/C值均無顯著差異（P＞0.05）。

2.4 黃粉蟲粉對良鳳花肉雞盲腸菌群的影響

2.4.1 序列及OTU統(tǒng)計(jì)（見表5、圖1、圖2）

表5 樣品測序結(jié)果統(tǒng)計(jì)

圖1 OTU韋恩圖

由表5可知，平均每個(gè)樣品測得78 296條原始序列數(shù)（Raw tags），數(shù)據(jù)質(zhì)控后的有效序列數(shù)據(jù)量分布介于52 708～67 137 之間，樣品平均序列長度分布在415～419 bp，平 均 有 效 率 達(dá)76.74%，Q30 均 高 于92.78%，說明所得數(shù)據(jù)質(zhì)量較好，能保證后續(xù)試驗(yàn)分析的可靠性。

基于97%的相似性原則將序列聚類成OTU。由圖1 可知，2 組共測得3 544 個(gè)OTU，共有的OTU 為2 409個(gè)，占總OTU數(shù)目的67.97%。TM0組和TM3組分別有2 855個(gè)和3 098個(gè)OTU，特有的OTU數(shù)目分別為446個(gè)和689個(gè)。同時(shí)，繪制各樣本序列的稀釋曲線得到圖2。在該曲線中，當(dāng)測序量達(dá)到49 636時(shí)，曲線趨于平坦，說明本次測序樣本深度充分，數(shù)據(jù)量合理。

圖2 稀釋曲線

2.4.2 Alpha多樣性分析（見表6）

由表6 可知，各組覆蓋度指數(shù)均超過99.47%，說明兩組數(shù)據(jù)能準(zhǔn)確反映肉雞盲腸微生物菌群的組成。TM3 組肉雞盲腸菌群的豐富度指數(shù)ACE 指數(shù)和Chao1 指數(shù)均顯著高于TM0 組（P＜0.05），TM0 組和TM3 組間多樣性指數(shù)Shannon 指數(shù)和Simpson 指數(shù)均無顯著差異（P＞0.05）。這說明在肉雞飼糧中添加3%黃粉蟲粉有助于提高肉仔雞盲腸菌群的豐富度，對盲腸菌群的多樣性無顯著影響。

表6 Alpha多樣性分析結(jié)果

2.4.3 Beta多樣性分析（見圖3）由圖3 可得，TM3 組的各樣本聚類程度較高，而TM0組的樣本聚類程度較低，TM3組內(nèi)的相似性高于TM0 組，TM0 組和TM3 組部分樣品分散分布、部分樣品有交叉，表明兩組樣本菌群結(jié)構(gòu)既存在相似部分又有部分差異。

圖3 Bray Curtis距離PCoA分析

2.4.4 微生物豐富度和多樣性的分析

2.4.4.1 在門水平上的腸道細(xì)菌組成（見表7、圖4）

表7 黃粉蟲粉對良鳳花肉雞盲腸菌群門水平相對豐度的影響

本試驗(yàn)共鑒定出肉仔雞盲腸微生物中的49個(gè)門、123個(gè)綱、256個(gè)目、365個(gè)科、568個(gè)屬和259個(gè)種。在門水平上以微生物豐度Top10的菌屬作為各組的優(yōu)勢菌群進(jìn)行分析。由表7和圖4可知，兩組肉雞盲腸內(nèi)容物中門水平相對豐度前10的物種為擬桿菌門（Bacteroidota）、厚壁菌門（Firmicutes）、變形菌門（Proteobacteria）、廣古菌門（Euryarchaeota）、放線菌門（Actinobacteriota）、梭桿菌門（Fusobacteriota）、unidentified_Bacteria、脫鐵桿菌門（Deferribacteres）、脫硫桿菌門（Desulfobacterota）和酸桿菌門（Acidobacteriota）。在門水平上，TM3組肉雞盲腸菌群中脫鐵桿菌門的相對豐度顯著高于TM0組（P＜0.05）。

圖4 良鳳花肉雞盲腸菌群在門水平上的組成

2.4.4.2 在屬水平上的腸道細(xì)菌組成（見表8、圖5）

表8 黃粉蟲粉對良鳳花肉雞盲腸菌群屬水平相對豐度的影響

由表8 和圖5 可知，兩組肉雞盲腸內(nèi)容物中屬水平相對豐度前10 的物種為擬桿菌屬（Bacteroides）、理研菌科RC9腸道群（Rikenellaceae_RC9_gut_group）、糞桿菌屬（Faecalibacterium）、普雷沃氏菌科_UCG-001（Prevotellaceae_UCG-001）、螺桿菌屬（Helicobacter）、甲烷短桿菌屬（Methanobrevibacter）、另枝菌屬（Alistipes）、副桿菌屬（Parabacteroides）、胃瘤球菌屬[（Ruminococcus）_torques_group]和梭桿菌屬（Fusobacterium）。在屬水平上，TM3組肉雞盲腸菌群中擬桿菌屬的相對豐度顯著高于TM0組（P＜0.05），普雷沃氏菌科_UCG-001的相對豐度顯著低于TM0組（P＜0.05）。

圖5 良鳳花肉雞盲腸菌群在屬水平上的組成

2.4.5 KEGG功能預(yù)測（見圖6）

利用PICRUSt軟件對16S測序所得到的物種結(jié)果的差異，如圖6 所示。結(jié)果表明，TM3 組與TM0 組相比差異功能通路分別為復(fù)制和修復(fù)（replication and repair）、細(xì)胞群落-原核生物（cellular community-prokaryotes）和新陳代謝（metabolism），TM3 組中的復(fù)制和修復(fù)所占豐度為9.18%，TM0 組中的復(fù)制和修復(fù)所占豐度為9.37%；TM3 組中的細(xì)胞群落-原核生物所占豐度為1.88%，TM0 組中的細(xì)胞群落-原核生物所占豐度為1.83%；TM3 組中的新陳代謝所占豐度為1.63%，TM0組中的新陳代謝所占豐度為1.62%。

圖6 KEGG二級(jí)功能類群分布差異

3 討論

3.1 黃粉蟲粉對良鳳花肉雞抗氧化性能的影響

抗氧化性能指機(jī)體清除體內(nèi)自由基、抵抗自由基對細(xì)胞氧化攻擊的能力。T-AOC 是抗氧化性能的綜合指標(biāo)，可以反映機(jī)體清除活性氧的能力，以及機(jī)體抗氧化系統(tǒng)對外源性刺激的代償能力。SOD和GSHPx是機(jī)體主要的抗氧化酶，可以有效地清除超氧陰離子、過氧化氫（H2O2）及羥自由基（·OH）等活性氧，其值越大代表機(jī)體抗氧化能力越強(qiáng)。MDA 是脂質(zhì)過氧化物產(chǎn)物之一，可以間接反映動(dòng)物機(jī)體細(xì)胞的氧化損傷程度，其值越小代表機(jī)體抗氧化能力越強(qiáng)。

鄭紫薇等（2021）研究表明，飼糧中添加2.0%黃粉蟲粉可顯著提高京紅蛋雞血清中SOD活性，極顯著降低MDA的含量。Liu等（2021）研究發(fā)現(xiàn)，隨飼糧中黑水虻幼蟲粉含量的增加，雪峰烏骨雞血清中T-SOD活性呈二次曲線增加，在3%的添加水平時(shí)達(dá)到最大值，而MDA 的含量隨著黑水虻幼蟲粉水平的增加呈線性下降。Elahi 等（2020）發(fā)現(xiàn)日糧中添加4%的黃粉蟲粉有提高21 日齡白羽肉仔雞（Ross 708）血液中T-AOC 的趨勢（P=0.067），而添加10.48%鮮黃粉蟲提高肉仔雞MDA的含量的趨勢（P=0.075）。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼糧中添加3%和5%的黃粉蟲粉可顯著提高良鳳花肉雞血清T-SOD 活性，與鄭紫薇等（2021）研究結(jié)果相似，原因可能是黃粉蟲富含亞油酸、維生素E和抗菌肽等抗氧化物質(zhì)，能提高機(jī)體有效清除自由基的能力，從而增強(qiáng)肉雞的抗氧化能力，改善雞群健康狀況；但當(dāng)黃粉蟲粉的添加水平提高至7%和9%時(shí)，肉雞血清中T-SOD活性呈降低趨勢，提示了黃粉蟲粉對肉雞血清抗氧化能力的促進(jìn)作用有一定閾值，超過這一閾值促進(jìn)作用呈降低趨勢，引起這個(gè)結(jié)果的原因尚不清楚，需要進(jìn)一步研究來證實(shí)。

3.2 黃粉蟲粉對良鳳花肉雞免疫性能的影響

補(bǔ)體C3、C4是機(jī)體免疫反應(yīng)中重要的蛋白因子，被激活后可產(chǎn)生細(xì)胞溶解、黏附、免疫調(diào)節(jié)、中和毒素和清除病原等生物學(xué)效應(yīng)。免疫球蛋白是機(jī)體免疫系統(tǒng)中的重要組成部分，是直觀體現(xiàn)機(jī)體免疫功能強(qiáng)弱的指標(biāo)，禽類血清中免疫球蛋白的水平由IgG、IgM和IgA的含量評定。

Islam 等（2017）試驗(yàn)結(jié)果表明，在白羽肉雞（Ross 308）飼糧中添加0.4%發(fā)酵黃粉蟲粉和0.4%發(fā)酵大麥蟲粉，均有提高血清中IgG 和IgA 含量的趨勢。張婷（2010）研究發(fā)現(xiàn)，添加0.5%家蠅幼蟲肽能夠顯著提高4 周齡黃羽肉仔雞血清中的IgG、補(bǔ)體C3和C4含量，顯著提高2周齡時(shí)IgA含量，表明在肉仔雞飼糧中添加家蠅幼蟲肽能夠誘導(dǎo)機(jī)體內(nèi)某些免疫功能的活化，起到免疫增強(qiáng)劑的功效。Benzertiha 等（2020）研究表明，在白羽肉雞（Ross 308）飼糧中分別添加0.2%和0.3%的黃粉蟲粉，0.2%和0.3%的大麥蟲粉，各添加組相比對照組均極顯著降低了血清IgM 水平，添加0.2%大麥蟲粉組顯著降低血清免疫球蛋白Y（IgY）水平，添加不同水平黃粉蟲粉組有降低肉雞血清IgY 的趨勢，但與對照組相比差異均不顯著。

本研究發(fā)現(xiàn)，在肉雞飼糧中添加不同水平黃粉蟲粉有提高肉雞血清IgA、IgM、IgG、補(bǔ)體C3 和C4 含量的趨勢，本試驗(yàn)結(jié)果與Islam等（2017）研究結(jié)果相似，可能是由于黃粉蟲外骨骼中含有大量的幾丁質(zhì)，能夠促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖，刺激抗體分泌，起到免疫刺激和抗炎作用，從而調(diào)節(jié)機(jī)體特異性免疫應(yīng)答，改善肉雞的免疫功能。

3.3 黃粉蟲粉對良鳳花肉雞腸道組織形態(tài)的影響

腸道是肉雞營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的關(guān)鍵場所，腸道絨毛高度和隱窩深度是衡量腸道健康的重要指標(biāo)。腸道蠕動(dòng)和細(xì)胞擠壓是小腸對大分子營養(yǎng)物質(zhì)的吸收方式，腸道腸壁肌層厚度的增加，有利于腸道的蠕動(dòng)，可提高營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，促進(jìn)肉雞生長發(fā)育。絨毛高度可以反映腸道與食糜的接觸面積，接觸面積越大養(yǎng)分?jǐn)z入就越充分，而隱窩深度下降，腸上皮細(xì)胞成熟率上升，營養(yǎng)物質(zhì)利用率升高。V/C 是腸道功能的綜合體現(xiàn)，V/C增大說明腸道消化吸收能力增強(qiáng)。

陶淑霞等（2014）在AA 肉雞飼糧中分別添加2%的黃粉蟲和2%抗菌肽高表達(dá)量黃粉蟲粉等量替代基礎(chǔ)日糧中的魚粉，發(fā)現(xiàn)均能顯著提高十二指腸、空腸和回腸的絨毛高度和絨隱比，提高肉雞對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收。Biasato 等（2016、2018）研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加7.5%的黃粉蟲粉，對白羽肉雞小腸組織形態(tài)無不良影響，而添加10%黃粉蟲粉顯著降低了白羽肉雞小腸的V/C 值，添加15%黃粉蟲粉顯著降低肉雞小腸的絨毛高度和V/C值，增大小腸的隱窩深度。

本試驗(yàn)中，飼糧中添加3%的黃粉蟲粉可顯著提高肉雞回腸絨毛高度、肌層厚度以及空腸的肌層厚度和V/C 值，這與陶淑霞等（2014）研究結(jié)果相似，說明飼糧中添加低水平的黃粉蟲粉能夠改善肉雞的回腸和空腸組織形態(tài)，提高其對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力，與本實(shí)驗(yàn)室（禽蛋孵化室和禽蛋品質(zhì)分析室）前期生產(chǎn)性能試驗(yàn)結(jié)果相一致。值得注意的是，本試驗(yàn)中，添加7%和9%的黃粉蟲粉提高了肉雞回腸隱窩深度，顯著降低了空腸和回腸的V/C 值，提示過高的黃粉蟲粉添加水平可能會(huì)損傷腸道組織形態(tài)，這與Biasato等（2018）的研究結(jié)果一致，原因可能是飼糧中黃粉蟲粉添加水平過高，使甲殼素的含量過多，而肉雞無法完全利用，導(dǎo)致腸道受到應(yīng)激，損傷腸道組織結(jié)構(gòu)。

3.4 黃粉蟲粉對良鳳花肉雞盲腸菌群的影響

家禽腸道中復(fù)雜多樣、動(dòng)態(tài)的微生物群落，對宿主機(jī)體的健康和生長起著重要作用。在營養(yǎng)、代謝和免疫過程中，微生物群落可以促進(jìn)機(jī)體對營養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收，刺激宿主的免疫反應(yīng)。然而，腸道中有害菌群對降低消化率、增加細(xì)胞更新率和毒性代謝物的產(chǎn)生也有直接和間接的負(fù)面作用，可能導(dǎo)致肉雞的生長性能下降。因此，有必要進(jìn)一步了解黃粉蟲粉對肉雞腸道微生物組成和多樣性的影響。Alpha多樣性分析反映微生物群落的豐度和多樣性，Goods coverage指數(shù)反映了測序結(jié)果是否具有代表性，數(shù)值越高，說明樣本中物種檢測率越高。Chaol指數(shù)和ACE指數(shù)越大則腸道菌群的豐度越高，Shannon 多樣性指數(shù)越大、Simpson 指數(shù)越小則說明腸道微生物群落多樣性越高。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，TM3組肉雞盲腸菌群的豐富度指數(shù)ACE指數(shù)和Chao1指數(shù)顯著升高，提示添加黃粉蟲粉能夠提高肉仔雞盲腸微生物群落的豐富度。

擬桿菌門和厚壁菌門是雞盲腸中常見的定植菌，被認(rèn)為是潛在的、有益的固有細(xì)菌，Cui等（2021）發(fā)現(xiàn)腸道菌群中的這兩種優(yōu)勢門，在改善腸道疾病、抑制有害腸道細(xì)菌增殖、產(chǎn)生短鏈脂肪酸和降低腸道pH等方面發(fā)揮了重要作用。脫鐵桿菌門是一類能通過專性或兼性厭氧代謝獲得能量的細(xì)菌，腸道菌群中脫鐵桿菌門的相對豐度增加對免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)是有益的。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，TM0組及TM3組肉雞盲腸菌群的優(yōu)勢門水平均含有擬桿菌門和厚壁菌門，占各組所有檢測到的微生物群落的70%以上。He 等（2021）在雪峰烏骨雞飼糧中添加黑水虻幼蟲粉，發(fā)現(xiàn)雪峰烏骨雞盲腸中優(yōu)勢門水平均含有擬桿菌門和厚壁菌門，占所有檢測到的微生物菌群的80%以上，這與本試驗(yàn)研究結(jié)果相似。本試驗(yàn)中TM3組肉雞盲腸門水平上脫鐵桿菌門的相對豐度顯著增加，說明飼糧中添加適量的黃粉蟲粉能夠改善肉雞盲腸菌群結(jié)構(gòu)，增加有益菌的豐度，提高肉雞的免疫性能，從而提高其生長性能。

研究發(fā)現(xiàn)，擬桿菌屬是雞盲腸中的主要菌屬，同時(shí)較高的擬桿菌屬相對豐度能夠促進(jìn)多糖的分解，提高營養(yǎng)物質(zhì)的利用率，進(jìn)而提高機(jī)體生長性能。普雷沃氏菌科能夠降解低聚糖、淀粉、蛋白質(zhì)、非纖維素多糖和果膠等物質(zhì)作為能量源，是一種有益菌。He 等（2021）研究表明，飼糧中添加1%～3%的黑水虻幼蟲粉可顯著增加雪峰烏骨雞腸道菌群中未分類的擬桿菌目（unclassified_Bacteroidales）和羅姆布茨菌屬（Romboutsia）等有益菌的相對豐度，而添加5%的黑水虻幼蟲粉會(huì)增加了葡萄球菌（Staphylococcus）等病原菌屬的數(shù)量。本試驗(yàn)中，TM3組肉雞盲腸菌群屬水平上擬桿菌屬的相對豐度顯著增加，可能是黃粉蟲含有高水平的營養(yǎng)物質(zhì)、蛋白質(zhì)和調(diào)節(jié)胃腸道微生物活性的多肽，因而具有調(diào)節(jié)微生物群落的組成平衡和改善腸道功能的作用。此外，本試驗(yàn)中TM3組普雷沃氏菌科_UCG-001 的相對豐度顯著降低，可能是由于肉雞盲腸在難降解的結(jié)構(gòu)性碳水化合物消化中起重要作用，而黃粉蟲中所含有的甲殼素與植物纖維素化學(xué)結(jié)構(gòu)相似，底物的選擇可能使得普雷沃氏菌科_UCG-001 的相對豐度降低，但對TM3 組肉雞的血清抗氧化、免疫性能和腸道健康并未造成負(fù)面影響。

綜上所述，飼糧中添加3%的黃粉蟲粉可顯著提高良鳳花肉雞血清T-SOD 活性，提高肉雞回腸絨毛高度、肌層厚度和V/C 值以及空腸的肌層厚度和V/C值，增大盲腸有益菌群（脫鐵桿菌門、擬桿菌屬）的相對豐度，從而提高其對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力，調(diào)節(jié)肉雞盲腸菌群結(jié)構(gòu)，促進(jìn)腸道健康。但當(dāng)黃粉蟲粉的添加水平提高至7%和9%時(shí)，有降低肉雞血清中TSOD 活性的趨勢，同時(shí)顯著提高肉雞回腸隱窩深度，降低了空腸和回腸的V/C值，提示較低的黃粉蟲粉添加水平更有利于維持肉雞的腸道健康。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)條件下，肉雞飼糧黃粉蟲粉添加水平可顯著影響良鳳花肉雞的抗氧化能力、腸道組織形態(tài)及盲腸菌群，其中3%黃粉蟲粉添加水平可提高肉雞抗氧化能力，改善腸道組織形態(tài)，增大盲腸有益菌群（脫鐵桿菌門、擬桿菌屬）的相對豐度，調(diào)節(jié)肉雞盲腸菌群結(jié)構(gòu)，促進(jìn)腸道健康。綜合試驗(yàn)線性與回歸分析，建議1～70 日齡良鳳花肉雞飼糧中黃粉蟲粉的最適添加量為3%。