■趙壽培 李雪梅 車(chē)大璐 劉愛(ài)瑜 李曉宇 趙俐辰 高玉紅* 孫新勝

（1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，河北保定 071001；2.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)信息科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，河北保定 071001）

綿羊在全球數(shù)百萬(wàn)人的經(jīng)濟(jì)體系中發(fā)揮著重要的作用，尤其是處于熱帶及溫?zé)岬貐^(qū)的發(fā)展中國(guó)家，其肉、奶、皮、毛等是農(nóng)村和貧困地區(qū)人口重要的生計(jì)來(lái)源之一[1]。但在近幾年河北省羊產(chǎn)業(yè)技術(shù)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)對(duì)羊舍環(huán)境調(diào)研中發(fā)現(xiàn)，河北省夏季多數(shù)地區(qū)綿羊處于不同程度的熱應(yīng)激狀態(tài)[2]。處于應(yīng)激環(huán)境中的動(dòng)物會(huì)通過(guò)自主性和行為性等行為進(jìn)行調(diào)節(jié)，如增加呼吸頻率和降低采食量等[3]，嚴(yán)重時(shí)會(huì)造成機(jī)體組織損傷，甚至死亡[4-5]。這些均給畜牧業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，因此緩解熱應(yīng)激對(duì)于羊業(yè)的高效健康發(fā)展意義重大。

中草藥因其安全無(wú)殘留且具抗菌、消炎、抗應(yīng)激和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫等功效，逐漸被畜牧行業(yè)所關(guān)注。中藥不僅可以提高家畜生產(chǎn)性能，改善機(jī)體免疫機(jī)能[6-7]，還具有緩解家畜熱應(yīng)激的效果[8]。中（獸）醫(yī)藥理論指導(dǎo)中認(rèn)為，高溫高濕飼養(yǎng)環(huán)境引起的應(yīng)激反應(yīng)屬濕熱所致，即感受濕熱之邪，濕熱之邪常郁阻中焦脾胃，導(dǎo)致其運(yùn)化功能障礙，因此，中醫(yī)上常采用清熱祛濕、健脾胃的原則來(lái)預(yù)防或緩解熱應(yīng)激?！侗静荼阕x》中記載，板藍(lán)根具有“清熱、解毒、辟疫、殺蟲(chóng)四者而已”的功效，而金銀花與板藍(lán)根是清熱解毒中常見(jiàn)的組合，具較好的抗病毒和抑菌效果[9]?！吨蝎F醫(yī)藥典》也指出，半邊蓮和丹參對(duì)解暑清熱也具較好的功效。半邊蓮可清熱解毒，利水消腫，丹參可涼血消癰。大量研究證明[10-11]，基于中藥處方指導(dǎo)的復(fù)方中藥相較單種中藥其效果可提高50～2 000倍，當(dāng)中藥經(jīng)益生菌發(fā)酵后可大大提高其生物活性，對(duì)動(dòng)物免疫發(fā)揮更好的效果[12]。基于此，本試驗(yàn)選擇8味中藥進(jìn)行組方發(fā)酵，研究夏季熱應(yīng)激條件下中藥對(duì)育肥羔羊生長(zhǎng)性能、血液生理、屠宰性能和腸道發(fā)育的影響，以期為中藥的開(kāi)發(fā)利用及熱應(yīng)激防控提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

依據(jù)中醫(yī)清熱祛濕的原則，選擇8 味具清熱涼血、健脾胃、提高機(jī)體免疫力的中藥進(jìn)行組方。中藥復(fù)方組成為：板藍(lán)根100 g、金銀花100 g、半邊蓮50 g、丹參45 g、神曲30 g、黃芪30 g、當(dāng)歸30 g和甘草20 g，各種中藥先經(jīng)過(guò)清洗、烘干、粉碎、過(guò)篩（40目），然后將所有中藥混合均勻，按中藥∶益生菌發(fā)酵液為1∶1的比例加入乳酸菌和酵母菌（乳酸菌∶酵母菌為1∶1）混合發(fā)酵液，于固態(tài)發(fā)酵罐中發(fā)酵5～7 d，發(fā)酵溫度為30～32 ℃，發(fā)酵完成的終點(diǎn)為酵母菌數(shù)量＞8×106CFU/g，乳酸菌數(shù)量＞8×103CFU/g。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)于2020年7月—2020年10月在河北省石家莊市某規(guī)?；驁?chǎng)進(jìn)行，羊舍為東西朝向的敞棚舍。試驗(yàn)選擇240只4月齡、體重（37.17±0.44）kg的健康雜交斷奶羔羊（杜泊羊×東北細(xì)毛羊），隨機(jī)分為4組，每組60 只，即對(duì)照組和添加飼糧干物質(zhì)基礎(chǔ)的0.5%、1.0%和1.5%發(fā)酵中藥組，飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。試驗(yàn)預(yù)試期7 d，正試期90 d，并將第1～45 天記為試驗(yàn)前期，第46～90天記為試驗(yàn)后期。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3 檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.3.1 羊舍溫?zé)岘h(huán)境參數(shù)

試驗(yàn)羊舍內(nèi)距地面1.7 m處均勻懸掛3個(gè)溫濕度記錄儀（KTH-350-1，法國(guó)凱茂公司），每0.5 h自動(dòng)記錄一次，連續(xù)記錄試驗(yàn)期間羊舍環(huán)境溫度（Ta）及相對(duì)濕度（RH），并計(jì)算溫濕指數(shù)（THI）。

溫濕指數(shù)（THI）=0.8×Ta+RH÷100×（Ta-14.4）+46.4[13]

1.3.2 生長(zhǎng)性能

分別于試驗(yàn)初期（第1天）、試驗(yàn)中期（第45天）和試驗(yàn)?zāi)┢冢ǖ?0天）對(duì)各組羔羊逐只進(jìn)行空腹稱(chēng)重，記錄初始體重、中期體重及終末體重，計(jì)算平均日增重（ADG）。同時(shí)每隔15 d測(cè)定飼料飼喂量和剩余料量，連續(xù)測(cè)3 d，記錄干物質(zhì)采食量（DMI），并計(jì)算料重比（F/G）。

料重比=DMI/ADG

1.3.3 血液生理指標(biāo)

試驗(yàn)?zāi)┢诿拷M隨機(jī)選擇6 只育肥羊，禁食12 h后，早晨空腹采血，前頸靜脈采血2 mL 裝入EDTA 管后，立即使用全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀（邁瑞B(yǎng)C-5000，南京貝登醫(yī)療股份有限公司）測(cè)定血液生理指標(biāo)（白細(xì)胞、紅細(xì)胞和血小板數(shù)）。

1.3.4 屠宰性能

待育肥羔羊采血后立即進(jìn)行屠宰。屠宰前記錄宰前活重，屠宰后記錄胴體重和心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟的重量，并計(jì)算屠宰率和器官指數(shù)。

屠宰率（%）=（胴體重/宰前活重）×100

器官指數(shù)（%）=（器官重量/宰前活重）×100

1.3.5 腸道發(fā)育情況

分別對(duì)屠宰的育肥羊的大腸和小腸進(jìn)行稱(chēng)重，并采集空腸樣品制作石蠟切片。具體操作：羊只屠宰后立即將大腸和小腸兩端用棉繩捆綁，分割稱(chēng)重，并取空腸中段2 cm組織，用ABS緩沖液沖洗干凈，編號(hào)后浸入4%多聚甲醛溶液，并于24 h后更換固定液。采用H.E.染色法制作空腸組織切片以觀察其形態(tài)，取組織修塊后經(jīng)水洗、脫水、二甲苯透明、石蠟包埋后切片并染色，于光學(xué)顯微鏡（4×10倍）下拍照，觀察并記錄絨毛高度、絨毛寬度、隱窩深度和肌層厚度，并計(jì)算絨毛表面積（絨毛高度×絨毛寬度）和絨隱比（絨毛高度/隱窩深度）。

1.4 數(shù)據(jù)分析

利用Image J 1.80對(duì)空腸絨毛高度、絨毛寬度、隱窩深度和肌層厚度進(jìn)行測(cè)量；采用SAS 9.4 混合模型（Mixed）對(duì)育肥羔羊生長(zhǎng)性能、空腸發(fā)育和屠宰性能進(jìn)行差異分析，其中P＜0.01 表示差異極顯著，P＜0.05表示差異顯著，0.05≤P＜0.1表示有顯著趨勢(shì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 試驗(yàn)羊舍溫?zé)釁?shù)的檢測(cè)（見(jiàn)圖1）

圖1 試驗(yàn)期間環(huán)境溫濕度的日變化情況

如圖1 所示，整個(gè)試驗(yàn)期日均Ta 和RH 分別為24.17 ℃和71.59%，THI 為72.73，育肥羊處于輕度熱應(yīng)激狀態(tài)。尤其試驗(yàn)前期，日均Ta 和RH 為27.95 ℃和75.85%，THI則高達(dá)79.04，育肥羔羊處于中度熱應(yīng)激狀態(tài)，而試驗(yàn)后期，日均Ta 和RH 為20.07 ℃和66.98%，THI為66.26，羊處于非熱應(yīng)激狀態(tài)。

2.2 發(fā)酵中藥對(duì)育肥羔羊生長(zhǎng)性能的影響（見(jiàn)表2）

如表2 所示，試驗(yàn)全期相比對(duì)照組，飼糧中添加干物質(zhì)基礎(chǔ)1.0%和1.5%的發(fā)酵中藥組顯著或極顯著提高了羔羊的ADG（P＜0.05 或P＜0.01），分別提高了7.63%和10.35%，1.5%組DMI 也極顯著提高（P＜0.01），但對(duì)F/G并無(wú)顯著影響（P＞0.05）。尤其試驗(yàn)前期添加1.0%和1.5%發(fā)酵中藥可顯著或極顯著提高DMI（P＜0.05 或P＜0.01），1.5%組DMI 較對(duì)照組提高了10.66%，同時(shí)也極顯著提高了ADG，為9.54%（P＜0.01）。同樣1.0%組相較對(duì)照組ADG也極顯著提高了10.42%（P＜0.01），且料重比有下降趨勢(shì)（0.05≤P＜0.1）。但試驗(yàn)后期各組間的生長(zhǎng)性能無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

表2 發(fā)酵中藥對(duì)育肥羔羊生長(zhǎng)性能的影響

2.3 發(fā)酵中藥對(duì)育肥羔羊血液生理指標(biāo)的影響（見(jiàn)表3）

由表3 可知，與對(duì)照組相比，0.5%組和1.0%組的中性粒細(xì)胞數(shù)和嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)出現(xiàn)極顯著（P＜0.01）和顯著（P＜0.05）降低，而1.0%組嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)極顯著增加（P＜0.01）。添加發(fā)酵中藥后0.5%組、1.0%組和1.5%組白細(xì)胞數(shù)比對(duì)照組分別降低了19.43%、18.90%和20.32%（P＞0.05），中性粒細(xì)胞數(shù)目則降低了67.77%、70.12%和30.27%。各組間紅細(xì)胞和血小板類(lèi)指標(biāo)并無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

表3 發(fā)酵中藥對(duì)育肥羔羊血液生理指標(biāo)的影響

2.4 發(fā)酵中藥對(duì)育肥羔羊屠宰性能和器官發(fā)育的影響（見(jiàn)表4）

由表4可知，各組間屠宰率和器官指數(shù)無(wú)顯著差異，其中肝臟器官指數(shù)有提高的趨勢(shì)（0.05≤P＜0.1）。

表4 發(fā)酵中藥對(duì)育肥羔羊屠宰率和器官指數(shù)的影響（%）

2.5 發(fā)酵中藥對(duì)育肥羔羊腸道發(fā)育的影響（見(jiàn)表5、表6、圖2）

表5 所示，添加發(fā)酵中藥對(duì)育肥羔羊胃小腸、大腸的長(zhǎng)度和占活重百分比無(wú)顯著影響（P＞0.05），而小腸占腸道百分比相比對(duì)照組略有升高但差異不顯著（P＞0.05）。圖2 和表6 所示，1.5%組相比對(duì)照組極顯著提高了空腸絨毛寬度（P＜0.01），1.0%組和1.5%組顯著或極顯著提高了絨毛高度和表面積（P＜0.05 或P＜0.01），對(duì)隱窩深度和肌層厚度并無(wú)顯著影響（P＞0.05），但1.5%組可極顯著提高絨隱比（P＜0.01）。

表5 發(fā)酵中藥對(duì)育肥羔羊腸道發(fā)育的影響

表6 發(fā)酵中藥對(duì)育肥羔羊空腸形態(tài)的影響

圖2 發(fā)酵中藥對(duì)育肥羔羊空腸組織結(jié)構(gòu)的影響（40×）

3 討論

3.1 發(fā)酵中藥對(duì)育肥羔羊生長(zhǎng)性能和屠宰性能的影響

綿羊的生長(zhǎng)最適溫度為-3～23 ℃，而本試驗(yàn)期間日均Ta為24.17 ℃，最高Ta達(dá)30.31 ℃，并且試驗(yàn)前期日均Ta 高達(dá)27.95 ℃，已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)其適宜生長(zhǎng)范圍，試驗(yàn)前期THI為79.04，根據(jù)THI熱應(yīng)激分區(qū)劃分，羊只處于中度熱應(yīng)激狀態(tài)[13]。隨著環(huán)境溫度逐漸升高，會(huì)通過(guò)減少采食量來(lái)減少體增熱，來(lái)維持體熱平衡[14]。而在本試驗(yàn)中，熱季飼料中添加發(fā)酵中藥可以顯著提高采食量，緩解熱應(yīng)激引起的負(fù)面效應(yīng)。尤其在熱應(yīng)激較為嚴(yán)重的試驗(yàn)前期，添加1.0%和1.5%的發(fā)酵中藥相對(duì)未添加中藥組DMI 分別提高了4.10%（P＜0.05）和10.66%（P＜0.01），這與這與張新雨等[15]研究結(jié)果一致，肉牛熱應(yīng)激條件下飼喂中藥復(fù)方（含干草）可以提高13.53%的DMI。Chen 等[16]研究也表明，添加復(fù)方中藥可以提高熱應(yīng)激奶牛10.6%的DMI，而這與中藥的清熱效果有關(guān)。同時(shí)，試驗(yàn)前期添加發(fā)酵中藥可以降低育肥羔羊的F/G，這已經(jīng)在單胃動(dòng)物養(yǎng)殖中被證實(shí)，而這與機(jī)體整體機(jī)能的改善相關(guān)[17]。說(shuō)明清熱類(lèi)中藥對(duì)家畜熱應(yīng)激有一定的緩解作用，明顯改善了育肥羔羊生長(zhǎng)性能。本試驗(yàn)中藥組方中板藍(lán)根和金銀花為主要組成成分，板藍(lán)根性寒，清熱解毒、涼血、利咽消腫，而金銀花與板藍(lán)根協(xié)同入藥可達(dá)到更佳清熱效果，且組方輔以同樣具有涼血、利水消腫等功效的半邊蓮和丹參，增強(qiáng)清熱解毒之功，而神曲、黃芪和當(dāng)歸具有利脾胃、補(bǔ)氣功效，在中醫(yī)學(xué)的脾胃是以消化系統(tǒng)為主的多系統(tǒng)、多功能綜合單位，防治熱應(yīng)激可從健脾和胃入手。該組方緩解熱應(yīng)激的功效有可能是多種藥物的協(xié)同作用。也有研究認(rèn)為，中藥治療或預(yù)防疾病主要源于其生物活性成分，本研究組方中的板藍(lán)根主要生物活性成分為生物堿類(lèi)、有機(jī)酸類(lèi)、黃酮類(lèi)、木脂素類(lèi)、核苷酸類(lèi)、氨基酸類(lèi)、甾體類(lèi)、告依春類(lèi)等[18]。Akbarian等[19]研究，植物提取物黃酮和萜類(lèi)可以通過(guò)清除體內(nèi)多余自由基以緩解應(yīng)激。另外，金銀花提取物中的環(huán)烯醚萜類(lèi)、黃酮類(lèi)也可發(fā)揮其生物活性作用[20]。因此，該發(fā)酵中藥可緩解熱應(yīng)激對(duì)育肥羔羊的影響，提高其生長(zhǎng)性能。

本試驗(yàn)中添加發(fā)酵中藥對(duì)育肥羔羊的屠宰率并無(wú)顯著影響，相較家禽類(lèi)，體型較大的家畜更難具有差距。這與李抒柏等[21]研究結(jié)果一致，添加復(fù)方發(fā)酵中藥（含神曲）雖然可以改善生長(zhǎng)性能，但對(duì)屠宰率并無(wú)顯著影響。另外，內(nèi)臟器官的重量和器官指數(shù)在一定程度上反映出動(dòng)物機(jī)體的機(jī)能狀況。本試驗(yàn)中，羔羊器官重量及器官指數(shù)均處于正常值范圍內(nèi)。而添加發(fā)酵中藥后肝臟指數(shù)增加，有研究表明，肝臟是動(dòng)物體內(nèi)新陳代謝的重要器官，同時(shí)也是動(dòng)物消化系統(tǒng)最大的消化腺，其發(fā)育與動(dòng)物所攝取的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和動(dòng)物體重的增加存在正相關(guān)[22]。因此發(fā)酵中藥不僅可以提高生長(zhǎng)性能還可以促進(jìn)器官發(fā)育。

3.2 發(fā)酵中藥對(duì)育肥羔羊血液生理指標(biāo)和腸道發(fā)育的影響

血常規(guī)指標(biāo)檢測(cè)是通過(guò)觀察白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板等數(shù)量變化和形態(tài)分布來(lái)判斷動(dòng)物個(gè)體的生理機(jī)能是否正常。本試驗(yàn)中，育肥羔羊白細(xì)胞、紅細(xì)胞和血小板數(shù)量均處于正常范圍，但發(fā)酵中藥降低了白細(xì)胞數(shù)量，這與黃占欣等[23]研究一致。白細(xì)胞作為機(jī)體細(xì)胞免疫的重要組成部分，說(shuō)明該中藥組方影響了機(jī)體的免疫性能，這可能與板藍(lán)根、金銀花和其他重要成分中所含活性成分（如黃酮類(lèi)和多糖類(lèi)等）的抗炎、抑菌藥效有關(guān)[18，20]。同時(shí)研究表明，清熱類(lèi)中藥也對(duì)抑制細(xì)菌恢復(fù)其抗菌藥物的敏感性有重要作用，對(duì)細(xì)菌耐藥性有一定的消除作用。因此，本試驗(yàn)中的發(fā)酵中藥有助于機(jī)體抑菌消炎，從而提高育肥羔羊的細(xì)胞免疫水平。

發(fā)酵中藥可以改善育肥羔羊的生長(zhǎng)性能和機(jī)體免疫，這與腸道的健康發(fā)育具有密切的聯(lián)系。已有研究[24]指出，熱應(yīng)激會(huì)影響胃腸道黏膜的通透性，改變黏膜免疫系統(tǒng)，進(jìn)而影響機(jī)體免疫。據(jù)研究，人體內(nèi)腸道黏膜約有400 m2與外界抗原直接接觸，黏膜組織中的免疫細(xì)胞占所有免疫細(xì)胞的80%[25]，因此機(jī)體和腸道健康發(fā)育具有重要的聯(lián)系。本試驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)腸道發(fā)育（長(zhǎng)度、重量）、組織形態(tài)（腸絨毛高度、隱窩深度）等指標(biāo)，分析了發(fā)酵中藥對(duì)育肥羔羊腸道生長(zhǎng)發(fā)育的影響。動(dòng)物的小腸是營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的主要場(chǎng)所，其可將小分子物質(zhì)通過(guò)上皮細(xì)胞吸收并運(yùn)輸至全身供機(jī)體新陳代謝，而大腸則是將未被完全消化的物質(zhì)繼續(xù)分解吸收，因此小腸是重要的消化器官[26]。根據(jù)以往研究，腸道的長(zhǎng)度和重量與飼糧營(yíng)養(yǎng)水平或精粗比存在較強(qiáng)的關(guān)聯(lián)，腸道重量的升高可以促進(jìn)機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育[27-28]。但在本試驗(yàn)中各組營(yíng)養(yǎng)水平保持一致，因此各組育肥羔羊腸道的長(zhǎng)度及其占活體重百分比并無(wú)顯著差異，但添加發(fā)酵中藥組略有升高。在小腸中，空腸相對(duì)于十二指腸和回腸，其絨毛高度，黏膜層厚度均最大，同樣Geiger 等[29]研究也證明空腸是重要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收最高的腸段之一，因此空腸的生長(zhǎng)發(fā)育尤其關(guān)鍵。而腸道組織結(jié)構(gòu)中的絨毛高度、隱窩深度等都與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收功能存在密切的聯(lián)系，絨毛高度的增加、隱窩深度的降低都可增加小腸和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的接觸面積，進(jìn)而增加腸道內(nèi)多種消化酶對(duì)營(yíng)養(yǎng)的利用。本試驗(yàn)中“添加1.5%的發(fā)酵中藥極顯著提高了絨毛寬度，1.0%和1.5%組顯著或極顯著提高了絨毛高度和表面積，這可以提高羊?qū)I(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用”，從而改善腸道吸收功能。Chen等[30]研究同樣表明中藥中的蒽醌類(lèi)（廣泛存在于中藥的粗提取物中）提取物同樣可以通過(guò)調(diào)節(jié)JAK1/STAT3信號(hào)通路進(jìn)而降低細(xì)胞凋亡，保護(hù)空腸的上皮細(xì)胞。類(lèi)似研究同樣表明[31]，添加復(fù)方中藥（含黃芪）可促進(jìn)小腸的發(fā)育，進(jìn)而提高動(dòng)物的生長(zhǎng)性能，當(dāng)然這更可能是復(fù)方中多種中藥共同作用的效果。

4 結(jié)論

飼糧添加該發(fā)酵中藥不僅可以改善育肥羔羊的生長(zhǎng)性能，促進(jìn)器官發(fā)育，還可改善腸道發(fā)育并提高機(jī)體免疫。因此添加發(fā)酵中藥有助于緩解熱應(yīng)激對(duì)育肥羔羊的不利影響，在本試驗(yàn)條件下，以1.5%添加劑量為宜。