黎海華，羅爾倫，李 蕓，藍(lán)勇波

（深圳市計(jì)量質(zhì)量檢測(cè)研究院，廣東深圳 518000）

酒中乙醇濃度是評(píng)價(jià)飲料酒質(zhì)量的重要指標(biāo)之一，強(qiáng)制性食品安全標(biāo)準(zhǔn)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 蒸餾酒及其配制酒》（GB 2757—2012）規(guī)定了氰化物和甲醇的限量指標(biāo)，氰化物和甲醇均需要用到產(chǎn)品的乙醇濃度進(jìn)行折算。我國(guó)現(xiàn)行的酒的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)對(duì)乙醇濃度有具體要求。目前酒中乙醇濃度的檢測(cè)方法《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 酒中乙醇濃度的測(cè)定》（GB 5009.225—2016）包括密度瓶法、酒精計(jì)法、氣相色譜法和數(shù)字密度計(jì)法等，但其僅對(duì)以前老舊的方法進(jìn)行了一個(gè)匯總，對(duì)不合理的地方未加以修訂。例如，氣相色譜法測(cè)試過程中未進(jìn)行20 ℃的恒溫；儀器參數(shù)中使用玻璃填充柱，存在分離效能差、易干擾等缺點(diǎn)，且目前的色譜儀大多采用毛細(xì)管柱；內(nèi)標(biāo)物4-甲基-2-戊醇在水中難于溶解。因此，本研究參考有關(guān)資料[1-5]以及美國(guó)分析化學(xué)家協(xié)會(huì)AOAC官方方法AOAC Official Method 983.13 Alcohol in Wines：Gas Chromatographic Method、AOAC Official Method 984.14 Ethanol in Beer：Gas Chromatographic Method，選擇合適的色譜柱、色譜條件和試驗(yàn)溫度，建立了以正丙醇作為內(nèi)標(biāo)測(cè)定葡萄酒、果酒及啤酒的氣相色譜法。

1 材料與方法

1.1 材料

流通市場(chǎng)上購買的葡萄酒（乙醇濃度標(biāo)示值12%vol）、果酒（乙醇濃度標(biāo)示值11%vol）、啤酒（乙醇濃度標(biāo)示值4%vol）典型樣品各1 批。

1.2 試劑

乙醇和正丙醇標(biāo)準(zhǔn)品：乙醇（C2H6O，CAS 號(hào)：64-17-5，純度≥99.0%），Merck，或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)品；正丙醇[CH3（CH2）2OH，CAS 號(hào)：71-23-8，純度≥99.0%]，Merck，或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)品；一級(jí)實(shí)驗(yàn)室用水。

1.3 儀器與設(shè)備

7890B 氣相色譜儀（FID）：美國(guó)Agilent 公司；K20-NR 恒溫循環(huán)水槽：德國(guó)Huber 公司。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 色譜條件

色譜柱：鍵合/交聯(lián)聚乙二醇固定相石英毛細(xì)管色譜柱（60 m×0.25 mm，0.25 μm）；載氣：高純氮；恒流模式；柱流速：1.0 mL·min-1；采用程序升溫：柱初始溫度40 ℃，保持5 min，以3 ℃·min-1速率升溫至55 ℃，再以10 ℃·min-1速率升溫至150 ℃，再以40 ℃·min-1速率升溫至220 ℃，保持5 min；進(jìn)樣口溫度：200 ℃；檢測(cè)器溫度：250 ℃；氫氣流量：30 mL·min-1；空氣流量：350 mL·min-1；進(jìn)樣量：0.5 μL；進(jìn)樣方式：分流進(jìn)樣；分流比：100∶1。

1.4.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

（1）乙醇使用液（10%）。移取恒溫至20 ℃的乙醇10.00 mL 于100 mL 容量瓶中，用20 ℃的水定容至刻度，混勻。臨用現(xiàn)配。

（2）正丙醇內(nèi)標(biāo)使用液（10%）。移取恒溫至20 ℃的正丙醇10.00 mL 于100 mL 容量瓶中，用20 ℃的水定容至刻度，混勻。臨用現(xiàn)配。

（3）乙醇標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。分別移取恒溫至20 ℃的乙醇使用液0.10 mL、0.20 mL、0.50 mL、1.00 mL 和2.00 mL 于10 mL 容量瓶中，用20 ℃的水定容至刻度，再加入20 ℃的正丙醇內(nèi)標(biāo)使用液0.50 mL，混勻，得到濃度為0.10%、0.20%、0.50%、1.00%和2.00%的乙醇標(biāo)準(zhǔn)系列曲線。臨用現(xiàn)配。

1.4.3 試樣制備

移取1.00 mL 蒸餾后的試樣（液溫20 ℃）于10 mL 容量瓶中，用20 ℃的水定容至刻度線，加入0.50 mL 恒溫至20 ℃的正丙醇內(nèi)標(biāo)使用液，混勻。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

以各標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的乙醇含量為橫坐標(biāo)，以乙醇和正丙醇內(nèi)標(biāo)峰面積的比值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。由圖1可知，在乙醇濃度在0.10%～2.00%，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=0.801 70x-0.000 42，相關(guān)系數(shù)（r）大于0.999 9。

圖1 乙醇標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 精密度試驗(yàn)

本文選擇種類為葡萄酒、果酒、啤酒的樣品進(jìn)行精密度試驗(yàn)，其RSD 在0.196%～0.648%，符合《合格評(píng)定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》（GB/T 27417—2017）中對(duì)方法精密度的要求，結(jié)果見表1。

表1 精密度試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果（n=6）

2.3 加標(biāo)回收率試驗(yàn)

本文采用加標(biāo)回收考察方法的正確性。酒中乙醇為主含量物質(zhì)，不適合直接進(jìn)行加標(biāo)測(cè)試，需先以蒸餾加熱方式除去乙醇，剩下的樣品基質(zhì)再用100 mL容量瓶定容，作為空白樣品。在空白樣品基質(zhì)中分別加入低、中、高（啤酒：0.10 %vol、4.00 %vol、8.00 %vol；葡萄酒：0.10 %vol、12.0 %vol、18.0 %vol；果酒：0.10 %vol、10.0 %vol、18.0 %vol）3 種濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液覆蓋對(duì)應(yīng)酒類的常用酒精度范圍，每個(gè)濃度進(jìn)行3 平行測(cè)定，計(jì)算回收率。由表2可知，方法的平均加標(biāo)回收率在98.2%～100.0%，符合《合格評(píng)定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》（GB/T 27417—2017）中對(duì)方法回收率的要求。

表2 加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

2.4 方法比對(duì)（t-檢驗(yàn)法）

依照《合格評(píng)定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》（GB/T 27417—2017）準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)依據(jù)，可根據(jù)已知國(guó)家認(rèn)可的參考方法來評(píng)價(jià)另一種方法的偏倚，并使用t-檢驗(yàn)法對(duì)分析方法間的顯著性差異進(jìn)行評(píng)估。因此，選取可同時(shí)適用GB 5009.225—2016 第一法密度瓶法和本方法檢測(cè)的樣品，進(jìn)行方法對(duì)照實(shí)驗(yàn)，以此來對(duì)本方法準(zhǔn)確度進(jìn)行考察。選取啤酒、葡萄酒、果酒樣品，使用兩種方法同時(shí)測(cè)定其乙醇濃度。由表3可知，經(jīng)兩兩配對(duì)進(jìn)行t檢驗(yàn)，t值在0.60～1.52，均小于2.23[t（0.05,10）=2.23，P=0.95]，說明在95%的置信區(qū)間內(nèi)，兩種檢測(cè)方法檢測(cè)結(jié)果不存在顯著性差異，說明本方法準(zhǔn)確可靠，符合要求。

表3 方法比對(duì)試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

3 結(jié)論

本研究建立了測(cè)定葡萄酒、果酒及啤酒乙醇濃度的氣相色譜法，對(duì)方法中的線性、精密度、加標(biāo)回收以及t-檢驗(yàn)等指標(biāo)進(jìn)行全方位的方法學(xué)驗(yàn)證，結(jié)果表明該方法精密度好、準(zhǔn)確性高，適合于政府監(jiān)督抽查、企業(yè)質(zhì)量控制等，能夠滿足葡萄酒、果酒和啤酒中乙醇濃度的測(cè)定要求。