陳 文 鄧棋衛(wèi) 包奇昌 王 英 徐 云

（江西中醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校藥學(xué)系，江西 撫州 344000）

二虎護(hù)肝方系本課題組負(fù)責(zé)人治療肝炎的臨床經(jīng)驗(yàn)方，該方由虎刺、虎杖、黃芪、白芍、蒲公英、茵陳、女貞子、茯苓、甘草等藥物組成，方中以虎刺和虎杖為主藥。該方經(jīng)臨床實(shí)踐證明對(duì)急、慢性肝炎均有較好療效。本課題旨在通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究驗(yàn)證評(píng)價(jià)該方的保肝作用。為其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠60 只，體質(zhì)量（20± 2）g，雌雄各半。由江西中醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供。

1.2 受試藥物 二虎護(hù)肝方由虎刺10 g，虎杖10 g，黃芪10 g，黨參10 g，白芍10 g，茯苓10 g，蒲公英10 g，茵陳10 g，甘草3 g 組成。方藥以湯劑形式應(yīng)用，用煎煮法煎取湯液，濃縮成1 g/mL（按生藥計(jì)）濃度的藥液，冰箱保存?zhèn)溆?。臨用時(shí)以生理鹽水稀釋后灌胃給藥。對(duì)照藥：聯(lián)苯雙酯滴丸（浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字H33020232）。

1.3 試劑 丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）試劑盒、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）試劑盒、超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒、丙二醛（MDA）試劑盒、過(guò)氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽（GSH）試劑盒均購(gòu)于南京建成生物工程研究所；四氯化碳：天津市恒興化學(xué)試劑制造公司。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法 小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后，隨機(jī)分成正常對(duì)照組、模型組、二虎護(hù)肝方高劑量組、二虎護(hù)肝方中劑量組、二虎護(hù)肝方低劑量組、聯(lián)苯雙酯組，每組10 只。除正常對(duì)照組外，其余各組小鼠灌胃0.2%四氯化碳橄欖油溶液，灌胃劑量為0.1 mL/10 g 鼠體質(zhì)量。于造模后24 h、48 h、71 h，二虎護(hù)肝方高、中、低劑量組分別給予二虎護(hù)肝方煎劑8.0 g/kg、4.0 g/kg、2.0 g/kg（按生藥計(jì)）灌胃；聯(lián)苯雙酯組給予聯(lián)苯雙酯滴丸4 mg/kg 灌胃；正常對(duì)照組和模型組灌胃等體積生理鹽水，共3 次。72 h 后，全部動(dòng)物眼眶取血，4000 r/min 離心10 min（離心半徑12.7 cm），分離血清，測(cè)定ALT、AST。稱(chēng)取肝臟組織0.4 g，加冷生理鹽水9 倍，勻漿，離心后去上清液，按試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定SOD、MDA、CAT、GSH。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠血清ALT、AST 含量的測(cè)定結(jié)果 與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠血清ALT、AST 均明顯升高，說(shuō)明四氯化碳造成了小鼠的肝損傷。與模型組比較，二虎護(hù)肝方各劑量組對(duì)四氯化碳造成的肝損傷小鼠ALT、AST升高均有顯著的降低作用（P＜0.01），說(shuō)明二虎護(hù)肝方對(duì)四氯化碳造成的小鼠肝損傷有保護(hù)作用。見(jiàn)表1。

表1 各組小鼠血清ALT、AST 含量的比較（，U/L）

表1 各組小鼠血清ALT、AST 含量的比較（，U/L）

注：與正常對(duì)照組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.01。

2.2 各組小鼠肝組織MDA、SOD 含量的測(cè)定結(jié)果 與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠肝組織MDA明顯升高、SOD明顯下降。與模型組比較。二虎護(hù)肝方各劑量組均可顯著降低四氯化碳致肝損傷小鼠肝組織MDA水平（P＜0.01），升高肝組織SOD水平（P＜0.01）。見(jiàn)表2。

表2 各組小鼠肝組織MDA、SOD 含量的比較（）

表2 各組小鼠肝組織MDA、SOD 含量的比較（）

注：與正常對(duì)照組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.01。

2.3 各組小鼠肝組織CAT、GSH 含量的測(cè)定結(jié)果 與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠肝組織CAT、GSH均明顯下降。與模型組比較，二虎護(hù)肝方各劑量組均可顯著升高四氯化碳致肝損傷小鼠肝組織CAT水平（P＜0.01）和GSH水平（P＜0.01）。見(jiàn)表3。

表3 各組小鼠肝組織CAT、GSH 含量的比較（）

表3 各組小鼠肝組織CAT、GSH 含量的比較（）

注：與正常對(duì)照組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.01。

3 討論

二虎護(hù)肝方由虎刺、虎杖、黃芪、黨參、白芍、茯苓、蒲公英、茵陳、甘草等藥組成。方中以虎刺、虎杖為主藥，是治療肝炎起主要作用的藥物。配以清熱利濕退黃的茵陳蒿、蒲公英；益氣健脾扶正的黃芪、黨參；解毒保肝的甘草、白芍等藥，對(duì)肝炎起到較好的綜合性治療作用。

虎杖具有利膽退黃、清熱解毒、散癖止痛、止咳化痰之功效。現(xiàn)代研究[1，2]顯示，虎杖中主要含有蒽醌類(lèi)、黃酮類(lèi)、茂類(lèi)、酚類(lèi)以及一些單糖類(lèi)的化合物，有多種藥理作用，包括抗炎、抗病毒、抗菌、調(diào)血脂、抗血栓、改變血流變、擴(kuò)張血管、保護(hù)心肌、抗氧化、抗腫瘤等[3，4]?；⒄扰R床廣泛用于治療急、慢性肝炎。研究[4]證實(shí)，虎杖對(duì)乙肝病毒有一定抑制作用，所以對(duì)對(duì)乙型肝炎及乙肝病毒攜帶者，臨床醫(yī)師也都多用虎杖，可用于治療急性黃疸肝炎和慢性肝炎?；⒄忍崛∥锛盎钚猿煞帜芡ㄟ^(guò)抑制炎癥因子、炎癥相關(guān)基因表達(dá)、信號(hào)通路轉(zhuǎn)導(dǎo)等途徑實(shí)現(xiàn)抗炎作用。廣泛的臨床研究[5]也證實(shí)虎杖具有抗炎作用，可用于肝炎、關(guān)節(jié)炎或急性肺損傷等炎性疾病。

虎刺又名繡花針、小黃連，分布于長(zhǎng)江流域及以南地區(qū)，中醫(yī)主要用于治療肝炎、風(fēng)濕痹痛、黃疸、水腫等病證[6，7]，虎刺為江西民間治療急、慢性肝炎的常用草藥。急性肝炎可用虎刺1 兩，配合茵陳蒿1 兩、車(chē)前草1 兩，水煎服。慢性肝炎可用虎刺根水煎濃縮成浸膏，酌量?jī)?nèi)服，對(duì)肝功能的恢復(fù)有很好效果[8]，該藥化學(xué)成分中報(bào)道較多的是以大黃素為代表的蒽醌類(lèi)化合物。有研究[9]表明，虎刺的水提取部位具有良好的保肝作用，同時(shí)發(fā)現(xiàn)，75%乙醇提取物、乙酸乙酯部位和剩余水部位的保肝活性與所含的總蒽醌呈正相關(guān)。

四氯化碳引起肝損傷模型是肝損傷的經(jīng)典模型。其特點(diǎn)是能準(zhǔn)確反映肝細(xì)胞的功能、代謝及形態(tài)學(xué)變化，重復(fù)性好[10，11]。四氯化碳在肝氧化代謝中可產(chǎn)生三氯甲基自由基，繼而攻擊脂質(zhì)細(xì)胞膜，造成肝細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化性損傷[10]。ALT是存在于肝細(xì)胞漿內(nèi)的可溶性酶，肝細(xì)胞損傷后被釋放入血，血清ALT是反映肝損傷的靈敏指標(biāo)[12]，其水平高低可以反映肝細(xì)胞損傷程度。脂質(zhì)過(guò)氧化物及其代謝產(chǎn)物MDA可以破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，其含量可反映機(jī)體過(guò)氧化損傷程度和細(xì)胞受損程度[13]。SOD、GSH、CAT均參與機(jī)體的抗氧化過(guò)程。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，二虎護(hù)肝方對(duì)四氯化碳肝損傷模型小鼠的ALT升高有明顯的降低作用，并能降低小鼠肝組織MDA水平，提高SOD、GSH、CAT水平。表明二虎護(hù)肝方具有明顯的保肝作用，其機(jī)制與抗脂質(zhì)過(guò)氧化性損傷有關(guān)。