■ 王 彬 林仙軍 侯 軒 周 煒 周芷錦 陳曉林 蔡文金 陳 潔*

（1.浙江省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，浙江杭州 311199；2.綠城農(nóng)科檢測(cè)技術(shù)有限公司，浙江杭州 310052）

米糠油是從米糠中提取的油脂，富含油酸等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，可為動(dòng)物生長(zhǎng)提供優(yōu)質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，廣泛應(yīng)用于飼料的生產(chǎn)。米糠油的生產(chǎn)方式有壓榨法和浸出法，其中，壓榨法生產(chǎn)的米糠油又被稱為米糠毛油，壓榨堿煉后剩余的邊角料俗稱皂腳或油腳。米糠油中油酸與亞油酸比例接近WHO 推薦的1∶1 比例[1]，為公認(rèn)的食用營(yíng)養(yǎng)健康油，其不飽和脂肪酸高，也是一種被廣泛使用的高熱能飼料原料[2]，因其油料內(nèi)含脂肪酶活性較高，本身酸價(jià)偏高，易發(fā)生油脂腐敗[3-4]。酸價(jià)的定義為中和1 g 動(dòng)植物油脂中游離脂肪酸所消耗的KOH 的毫克數(shù)[5]，其為衡量油脂品質(zhì)的重要衛(wèi)生指標(biāo)，如GB/T 19112—2003 中明確規(guī)定了米糠油的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)及其酸價(jià)指標(biāo)要求。米糠油本身為成分復(fù)雜的深色油脂，因國(guó)內(nèi)還沒(méi)有飼用米糠油的標(biāo)準(zhǔn)，飼用米糠油的精煉品質(zhì)參差不齊，油脂中滲入皂腳或油腳的現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生，在外觀、純度、均勻度等方面與食用米糠油差距較大，酸價(jià)測(cè)定的難度較高。

谷維素是一種由阿魏酸與植物甾醇結(jié)合形成的脂溶性有益成分，用于人體有降血脂、降膽固醇的功效[6]，其主要存在于米糠油、胚芽油等谷物油脂中，其中，米糠毛油含有1.7%～3.0%的谷維素[7]。研究表明，谷維素在酸價(jià)測(cè)定過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)綠黃色和亮黃色，從而干擾滴定終點(diǎn)時(shí)溶液顏色的變化，造成表觀酸價(jià)高于真實(shí)酸價(jià)的現(xiàn)象[8]。為探究谷維素對(duì)飼用米糠油酸價(jià)測(cè)定的影響，研究采用高效液相色譜法測(cè)定了飼用米糠油中谷維素的含量，分別用堿性藍(lán)6B 指示法、百里香酚酞指示法、電位滴定法測(cè)定其酸價(jià)，通過(guò)谷維素添加試驗(yàn)探析谷維素對(duì)飼用米糠油酸價(jià)測(cè)定的影響，為飼用米糠油酸價(jià)測(cè)定提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 原料與試劑

從飼料生產(chǎn)企業(yè)采集飼用米糠油2 批、飼用米糠2 批、食用米糠油1 批、飼用大豆油1 批，樣品信息見表1。

表1 油脂和飼用米糠樣品信息

γ-谷維素標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥99%（上海麥克林生化科技有限公司，批號(hào)：C14217665）；石油醚（30～60 ℃）：分析純（上海凌峰化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20181022）；氫氧化鉀乙醇標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液（0.101 1 mol/L）：本實(shí)驗(yàn)室自配和標(biāo)定；無(wú)水乙醇：色譜級(jí)（永華化學(xué)股份有限公司，批號(hào)：20220415）；乙醇：分析純（上海凌峰化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20181112）；乙醚-異丙醇混合溶液（體積比1∶1），自配；酚酞指示劑（1%酚酞乙醇溶液）；百里香酚酞指示劑（2%百里香酚酞乙醇溶液）；堿性藍(lán)6B 指示劑（稱取堿性藍(lán)1.0 g，加入50 mL煮沸的95%乙醇，在水浴中回流1 h，冷卻后過(guò)濾）。

1.1.2 儀器與設(shè)備

MF10研磨機(jī)，德國(guó)IKA 公司；ME203E電子天平，瑞士Mettler 公司；XP205DU 精密電子天平，瑞士Mettler公司；DKZ-2電熱恒溫振蕩水槽，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；3K15 冷凍離心機(jī)，德國(guó)Sigma 公司；R-210 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，瑞士BUCHI 公司；Agilent 1260 高效液相色譜儀配VWD 檢測(cè)器，美國(guó)Agilent 公司；916 Ti-Touch 電位滴定儀配6.0229.100 非水相復(fù)合酸堿pH電極，瑞士萬(wàn)通有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 有機(jī)溶劑浸出法從飼用米糠中提取米糠油

取1 L 帶密塞的試劑瓶5 個(gè)，向每個(gè)瓶中加入飼用米糠200 g 和石油醚（30～60 ℃）600 mL，用玻璃棒攪拌混勻后密塞，于往返式振蕩器上振搖2 h。取出溶液及樣品，置50 mL離心管中，于10 000 r/min 離心5 min，搜集并合并上清液，取上清液置水浴溫度不高于40 ℃的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀內(nèi)，負(fù)壓條件下，將其中的溶劑旋轉(zhuǎn)蒸干，取殘留的液體油脂作為飼用米糠油。

1.2.2 油脂中谷維素含量的測(cè)定

油脂中谷維素含量的測(cè)定方法采用LS/T 6121.2—2017。

1.2.3 滴定方法對(duì)飼用米糠油酸價(jià)測(cè)定的影響

樣品酸價(jià)測(cè)定方法主要參考GB 5009.229—2016中第一法和第二法，其中，堿性藍(lán)6B 指示劑的配制方法按1.1.1 中方法配制，與GB 5009.229—2016 稍有不同。以食用米糠油和飼用大豆油作為對(duì)照。稱取樣品2 g（飼用大豆油酸價(jià)較低，稱樣量為4 g）于錐形瓶（指示劑滴定法）或滴定杯（電位滴定法）中，加入乙醚-異丙醇混合溶液80 mL，充分振搖使試樣溶解。分別用百里香酚酞指示滴定法、堿性藍(lán)6B 指示滴定法和電位滴定法進(jìn)行酸堿中和滴定試驗(yàn)。指示劑滴定法需加入指示劑4 滴，用氫氧化鉀乙醇標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定至終點(diǎn)，滴定終點(diǎn)時(shí)，當(dāng)顏色變?yōu)樗{(lán)色時(shí)為百里香酚酞的終點(diǎn)，堿性藍(lán)6B 指示劑的滴定終點(diǎn)為由藍(lán)色變紅色，同時(shí)進(jìn)行空白試驗(yàn)。

1.2.4 谷維素標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制

精密稱取γ-谷維素標(biāo)準(zhǔn)品4 g，置于1 000 mL容量瓶中，用異丙醇超聲溶解并定容至刻度（約4 mg/mL）。

1.2.5 空白溶劑中添加谷維素試驗(yàn)

取80 mL 乙醚-異丙醇混合溶液（酸價(jià)測(cè)定方法中的溶劑）于錐形瓶中，分別加入1.00、2.00、3.00、5.00、10.00、10.00、20.00 mL 谷維素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別用百里香酚酞指示法和電位滴定法滴定，百里香酚酞指示法的滴定終點(diǎn)為溶液顏色變?yōu)樗{(lán)色，電位滴定法以最后一次突躍對(duì)應(yīng)的點(diǎn)作為滴定終點(diǎn)。

1.2.6 谷維素對(duì)飼用米糠油酸價(jià)測(cè)定的影響

稱取樣品1 g于錐形瓶（指示劑滴定法）或滴定杯（電位滴定法）中，按表2 分別加入谷維素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，依照1.2.3 中百里香酚酞指示法和電位滴定法測(cè)定油脂樣品酸價(jià)。

表2 谷維素對(duì)飼用米糠油酸價(jià)測(cè)定的影響試驗(yàn)分組編號(hào)

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 2010 軟件進(jìn)行初步整理和計(jì)算相對(duì)偏差或RSD（相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差），繪制空白溶劑谷維素添加量與滴定體積關(guān)系曲線圖，擬合趨勢(shì)方程分析線性關(guān)系（R2≥0.99 表示兩者呈現(xiàn)顯著線性關(guān)系）。采用SPSS 21.0 軟件中“獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)法”分析飼料米糠油中添加谷維素試驗(yàn)中兩種滴定方法酸價(jià)結(jié)果的差異，顯著水平為P＜0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 油脂樣品外觀

由圖1 可知，壓榨法和浸出法生產(chǎn)的飼用米糠油外觀均為深棕色，外觀無(wú)明顯差異。飼用米糠油的色澤與透亮度較食用米糠油及飼用大豆油有明顯差異。

2.2 油脂中谷維素含量測(cè)定

6 組油脂樣品中谷維素含量測(cè)定結(jié)果見表3 所示。結(jié)果表明，4 種飼用米糠油谷維素含量為1.6%～2.2%，均處于較高水平；飼用大豆油中未檢出谷維素。

表3 油脂中谷維素含量（%）

2.3 滴定方法對(duì)飼用米糠油酸價(jià)測(cè)定的影響

滴定方法對(duì)飼用米糠油酸價(jià)測(cè)定的影響見表4和圖2。圖3～圖6為電位滴定法測(cè)定樣品酸價(jià)的電位滴定曲線。由表4和圖2可知，堿性藍(lán)6B指示法滴定飼料米糠油過(guò)程中溶液顏色漸變，即使嚴(yán)重過(guò)量滴定情況下，始終沒(méi)有出現(xiàn)顏色突變的點(diǎn)，因此，堿性藍(lán)6B指示劑不適用于飼用米糠油酸價(jià)的測(cè)定；4種米糠油樣品中，百里香酚酞指示法測(cè)定的酸價(jià)均遠(yuǎn)大于電位滴定法；食用米糠油3種方法測(cè)定的結(jié)果相差較大（RSD=16.0%）；飼用大豆油3種方法測(cè)定的結(jié)果相近（RSD=1.5%）。

圖2 3種油脂堿性藍(lán)6B指示法測(cè)定酸價(jià)滴定終點(diǎn)顏色對(duì)比

圖3 飼用米糠油A電位滴定曲線

表4 不同指示劑和電位滴定方法酸價(jià)測(cè)定結(jié)果（n=5）

由圖2 可知，采用堿性藍(lán)6B 指示法滴定時(shí)，食用米糠油滴定終點(diǎn)顏色為淺紅色，比飼用大豆油滴定終點(diǎn)顏色要淺，而飼用米糠油滴定過(guò)程是顏色慢慢褪去（樣品溶液起始為灰黃色，加入堿性藍(lán)6B 指示劑后變?yōu)樗{(lán)色），漸漸恢復(fù)為本底灰黃色，再漸漸變?yōu)樽攸S色，始終沒(méi)有突變點(diǎn)。以上結(jié)果表明，深色油脂（米糠油）本底顏色對(duì)堿性藍(lán)6B 的變色指示效果具有干擾效應(yīng)，且本底顏色越深干擾越嚴(yán)重。

圖3～圖6 為電位滴定法測(cè)定樣品酸價(jià)的電位滴定曲線，圖中藍(lán)色線為pH-滴定體積V 曲線，紫紅色線為pH 隨滴定體積變化的一階導(dǎo)數(shù)曲線，即ΔE/ΔV-滴定體積V 曲線。由圖3～圖6 可知，飼用大豆油滴定過(guò)程只有一次pH 突躍，為典型的“S”型曲線（與GB 5009.229—2016中附錄E中圖E.1為同一類型），飼用米糠油和食用米糠油的滴定過(guò)程則有兩次pH突躍，為多次不同pH范圍“pH”突躍的“S”型曲線（與GB 5009.229—2016中附錄E中圖E.2為同一類型），應(yīng)以“突躍”起始的pH最接近于7.5～9.5范圍的突躍點(diǎn)作為滴定終點(diǎn)（如圖3中EP1、圖4和圖6中EP2即判定為滴定終點(diǎn)）。

圖4 飼用米糠油C電位滴定曲線

圖5 飼用大豆油電位滴定曲線

圖6 食用米糠油電位滴定曲線

2.4 空白溶劑中添加谷維素試驗(yàn)

兩種方法測(cè)得的空白溶劑中谷維素的量與中和滴定終點(diǎn)體積的對(duì)比曲線圖見圖7，滴定體積數(shù)據(jù)見表5。由圖7 可知，兩種方法中和滴定試驗(yàn)消耗的滴定液體積均與谷維素的添加量呈極顯著的線性關(guān)系（兩組曲線R2分別為0.997 7 和0.999 2），百里香酚酞指示法與電位滴定法測(cè)定的滴定終點(diǎn)體積結(jié)果極為接近。由表5 可知，電位滴定法比百里香酚酞指示法測(cè)定結(jié)果的相對(duì)偏差要小，表明電位滴定法的精密度優(yōu)于百里香酚酞指示法。

圖7 兩種滴定方法空白溶劑添加谷維素試驗(yàn)滴定終點(diǎn)體積對(duì)比

表5 兩種滴定方法空白溶劑添加谷維素試驗(yàn)滴定終點(diǎn)體積（n=5）

圖8～圖10為電位滴定法測(cè)定空白溶劑中添加谷維素試驗(yàn)的電位滴定曲線。由圖8～圖10 可知，添加谷維素后，溶劑的滴定曲線由一次pH 突躍的“S”型變?yōu)閮纱蝡H 突躍的“S”型。第一次pH 突躍的點(diǎn)（對(duì)應(yīng)紫紅色線上第一個(gè)尖峰）對(duì)應(yīng)的pH 在10 左右，符合GB 5009.229—2016 中測(cè)定酸價(jià)的滴定終點(diǎn)判定標(biāo)準(zhǔn)（pH 最接近7.5～9.5 范圍的突躍點(diǎn)），此滴定點(diǎn)即為空白滴定體積，此滴定點(diǎn)位置隨著谷維素添加量的增大未發(fā)生顯著變化。第二次pH 突躍的點(diǎn)(對(duì)應(yīng)紫紅色線上第二個(gè)尖峰)對(duì)應(yīng)的pH 在13左右，該突躍點(diǎn)位置隨谷維素的添加量增大而不斷后移，表明該突躍點(diǎn)是因谷維素而產(chǎn)生。

圖8 電位滴定曲線（空白）

圖9 電位滴定曲線（添加谷維素12 mg）

圖10 電位滴定曲線（添加谷維素20 mg）

以上結(jié)果表明，在中和滴定過(guò)程中，谷維素會(huì)消耗氫氧化鉀乙醇滴定液，致使滴定過(guò)程中產(chǎn)生一次pH 突躍，消耗滴定液的量與谷維素含量呈顯著正相關(guān)關(guān)系。

2.5 谷維素對(duì)飼用米糠油酸價(jià)測(cè)定的影響

2.5.1 谷維素對(duì)飼用米糠油百里香酚酞指示法測(cè)定酸價(jià)結(jié)果的影響

由表6可知，隨著谷維素含量的增加，A組和C組兩種飼用米糠油酸價(jià)結(jié)果均顯著升高，通過(guò)線性回歸分析發(fā)現(xiàn)酸價(jià)和谷維素的添加量均呈顯著的線性關(guān)系（兩組曲線R2分別為0.998 5和0.993 9）。若以含相同量谷維素的溶劑作為空白，則計(jì)算得出的酸價(jià)趨勢(shì)較為穩(wěn)定（RSD分別為2.3%和3.6%），表明扣除掉谷維素消耗的滴定液體積后計(jì)算得出的酸價(jià)，應(yīng)為其真實(shí)酸價(jià)。

表6 谷維素對(duì)飼用米糠油百里香酚酞指示法測(cè)定酸價(jià)結(jié)果的影響（n=4）

2.5.2 谷維素對(duì)飼用米糠油電位滴定法測(cè)定酸價(jià)結(jié)果的影響

谷維素對(duì)飼用米糠油電位滴定法測(cè)定酸價(jià)影響試驗(yàn)的滴定曲線見圖12～圖15。由圖12～圖15 可知，隨著飼用米糠油樣品中谷維素含量的不斷增加，一階導(dǎo)數(shù)曲線（圖中紫紅色曲線）的第二個(gè)尖峰的位置不斷的向后移動(dòng)，而第一個(gè)尖峰的位置未發(fā)生顯著變化。第一個(gè)尖峰起始時(shí)對(duì)應(yīng)的溶液的pH大約為9，符合GB 5009.229—2016 中酸價(jià)終點(diǎn)判定的標(biāo)準(zhǔn)（突躍點(diǎn)起始pH 最接近7.5～9.5 范圍），第二個(gè)尖峰的位置對(duì)應(yīng)的pH 均在12 左右，顯然不符合酸價(jià)終點(diǎn)判定的標(biāo)準(zhǔn)，因此，應(yīng)以第一個(gè)尖峰對(duì)應(yīng)的體積為滴定終點(diǎn)。以上表明，谷維素不影響第一次pH 突躍的滴定體積，即不干擾游離脂肪酸與堿反應(yīng)造成的pH 突躍的曲線，但會(huì)致使滴定終點(diǎn)后在滴定曲線上產(chǎn)生另外一次pH 突躍，此突躍可初判為谷維素與堿發(fā)生反應(yīng)所引起。由于滴定結(jié)束后儀器會(huì)顯示多個(gè)滴定體積，需要試驗(yàn)人員參考GB 5009.229—2016結(jié)合滴定曲線類型和滴定點(diǎn)所處位置及pH 進(jìn)行綜合判斷，最終選出滴定終點(diǎn)。

圖12 A1組試驗(yàn)電位滴定曲線

圖13 A3組試驗(yàn)電位滴定曲線

圖14 A5組試驗(yàn)電位滴定曲線

圖15 A6組試驗(yàn)電位滴定曲線

由表7 可知，B 組和D 組兩種飼用米糠油酸價(jià)均較為穩(wěn)定，其6 組試驗(yàn)的組間RSD值分別為0.8%和1.4%，表明酸價(jià)與谷維素的含量沒(méi)有顯著關(guān)系。

表7 谷維素對(duì)飼用米糠油電位滴定法測(cè)定酸價(jià)結(jié)果的影響（n=4）

2.5.3 飼料米糠油中添加谷維素試驗(yàn)兩種滴定方法酸價(jià)結(jié)果比較

將表6中飼用米糠油真實(shí)酸價(jià)和表7中酸價(jià)數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果分別見表8 和表9。由表8 和表9 可知，兩種方法測(cè)定的酸價(jià)結(jié)果均無(wú)顯著差異（P＞0.05），電位滴定法的精密度高于百里香酚酞指示法（RSD值更?。?。

表8 飼料米糠油A中添加谷維素試驗(yàn)兩種方法酸價(jià)結(jié)果比較

3 討論

3.1 滴定方法對(duì)飼用米糠油酸價(jià)測(cè)定的影響

目前，油脂酸價(jià)測(cè)定的方法多采用GB 5009.229—2016 或ISO 660—2020，兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)中適用于米糠油的測(cè)定方法均列出了冷溶劑指示劑滴定法和冷溶劑電位滴定法兩種，其中GB 5009.229—2016 指明米糠油酸價(jià)指示劑滴定應(yīng)采用堿性藍(lán)6B 作為指示劑。有試驗(yàn)表明，指示劑滴定法測(cè)定酸價(jià)過(guò)程中，樣品稱樣量、溶劑量、指示劑等均對(duì)酸價(jià)測(cè)定結(jié)果有一定影響[9]。為避免樣品溶劑使用量、滴定液等對(duì)指示劑顯色產(chǎn)生干擾，本試驗(yàn)中溶劑使用量均為80 mL，考慮到滴定液中水分可能致使皂化反應(yīng)后生成的脂肪酸鹽形成乳濁液或出現(xiàn)油水分層的現(xiàn)象，試驗(yàn)采用氫氧化鉀乙醇標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液。此外，為提高堿性藍(lán)6B 指示劑的靈敏度，試驗(yàn)中使用的堿性藍(lán)6B 指示劑未采用GB 5009.229—2016 中的乙醇直接溶解配制方法，而是參照GB/T264—1983采用熱乙醇溶解并經(jīng)熱回流處理。

由圖1 所示，飼用米糠油較食用米糠油色澤更深透亮度更差，因此，選擇食用米糠油（顏色淺于樣品的深色油脂，含有谷維素）和飼用大豆油（淺色油脂，不含谷維素）作為對(duì)照。如圖2 所示，在滴定過(guò)程中溶液本底顏色對(duì)堿性藍(lán)6B 指示劑指示劑的靈敏度具有不同程度的干擾，飼用米糠油本底顏色太深，該方法完全無(wú)法適用。由表4 可知，樣品組中百里香酚酞方法測(cè)定的酸價(jià)結(jié)果顯著大于電位滴定法測(cè)定的結(jié)果。從圖3、圖4、圖6 可知，3 種米糠油酸價(jià)測(cè)定滴定終點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的pH 均在9.5 左右，前人試驗(yàn)確認(rèn)，百里香酚酞指示劑在有機(jī)溶劑中變色范圍為9.3～10.5[10]，堿性藍(lán)6B 指示劑在95%乙醇中變色范圍為9.5～11.2[11],因此，3 種方法滴定終點(diǎn)時(shí)溶液的pH 接近，所測(cè)定的酸價(jià)結(jié)果理論上應(yīng)無(wú)顯著差異，表4 中飼用大豆油的結(jié)果也從側(cè)面證實(shí)了該理論的科學(xué)性。李英軍等[12]試驗(yàn)采用指示劑滴定法和電位滴定法測(cè)定花生油、大豆油、植物調(diào)和油等7 種植物油脂的酸價(jià)，結(jié)果沒(méi)有顯著差異，但電位滴定法準(zhǔn)確度和精密度更高；劉婷婷等[13]采用人工滴定法和自動(dòng)電位滴定法測(cè)定番茄紅素保健品的酸價(jià)，試驗(yàn)認(rèn)為兩種方法也沒(méi)有顯著差異；薛斌等[14]試驗(yàn)研究也認(rèn)為除了米糠油外，電位滴定法對(duì)各類食用植物油酸值的測(cè)定結(jié)果與傳統(tǒng)的人工指示劑滴定法的測(cè)定結(jié)果十分接近?？梢姡倮锵惴犹甘痉ê碗娢坏味ǚㄖ幸欢ㄓ幸环N方法測(cè)得的酸價(jià)結(jié)果失真。食用米糠油中百里香酚酞方法測(cè)定的酸價(jià)顯著大于堿性藍(lán)6B 和電位滴定法測(cè)得的酸價(jià)，而后兩者的結(jié)果較為一致，則可從側(cè)面證實(shí)是百里香酚酞指示劑測(cè)定的酸價(jià)結(jié)果失真，即表觀酸價(jià)大于真實(shí)酸價(jià)。程歲寒等[15]研究認(rèn)為深色油脂酸價(jià)測(cè)定時(shí)，指示劑滴定法檢測(cè)結(jié)果存在偏差，電位滴定法測(cè)定的結(jié)果不受油脂本身顏色的干擾，以上試驗(yàn)也印證了前人的研究結(jié)果。

3.2 谷維素對(duì)飼用酸價(jià)測(cè)定的影響

谷維素本身為白色結(jié)晶，在有機(jī)溶劑中溶解后為無(wú)色溶液，溶液本底不會(huì)對(duì)指示劑的顯色產(chǎn)生干擾。有研究認(rèn)為谷維素導(dǎo)致油脂酸價(jià)測(cè)定值升高的原因可能有兩點(diǎn)：①谷維素與堿溶液反應(yīng)生產(chǎn)淺黃色或亮黃色物質(zhì)；②谷維素分子結(jié)構(gòu)中酚羥基一定條件下可與堿基發(fā)生反應(yīng) ，從而消耗堿性滴定液的用量[16]。因此，能確認(rèn)是在滴定過(guò)程中谷維素與堿反應(yīng)產(chǎn)生了有色物質(zhì)干擾了滴定過(guò)程中溶液顏色的變化，這種物質(zhì)的干擾致使堿性藍(lán)6B 完全失去了指示作用，并使百里香酚酞指示劑測(cè)定值偏大?？瞻兹軇┲刑砑庸染S素試驗(yàn)表明，溶劑在堿滴定中消耗的體積與谷維素含量呈顯著正相關(guān)，且百里香酚酞指示法與電位滴定法測(cè)定的滴定體積結(jié)果并無(wú)顯著差異。依照?qǐng)D7 中谷維素含量與滴定液消耗體積標(biāo)準(zhǔn)曲線，按照天然米糠油中谷維素含量1.7%～3.0%計(jì)算，百里香酚酞指示法所測(cè)表觀酸價(jià)將比真實(shí)酸價(jià)偏高3.5～6.1 mg/g。

對(duì)于電位滴定方法，谷維素的存在可使油脂樣品滴定過(guò)程中除游離脂肪酸與堿反應(yīng)產(chǎn)生的第一次電位突躍后再出現(xiàn)一次電位突躍，由于谷維素產(chǎn)生的電位突躍點(diǎn)對(duì)應(yīng)的pH 已在12 左右，并不干擾游離脂肪酸導(dǎo)致的電位突躍，對(duì)酸價(jià)的測(cè)定無(wú)顯著影響。因百里香酚酞指示劑在有機(jī)溶劑中變色范圍為9.3～10.5，也表明由于谷維素的存在致使米糠油酸價(jià)測(cè)定中百里香酚酞的變色范圍從下限9.5 左右變成了12 左右。

由表8 和表9 可知，電位滴定法的精密度高于指示劑滴定法，表6 和表7 中電位滴定法測(cè)定的酸價(jià)的相對(duì)偏差也顯著低于百里香酚酞指示法，許多研究結(jié)果均表明，電位滴定法的精密度和準(zhǔn)確度均高于指示劑滴定法[12，14-15]，尤其在深色油脂的酸價(jià)測(cè)定時(shí)，指示法受到本底顏色的干擾作用更強(qiáng)，結(jié)果偏差更大，因此，飼用米糠油的酸價(jià)測(cè)定應(yīng)首選電位滴定法，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。對(duì)于沒(méi)有條件使用電位滴定法的實(shí)驗(yàn)室，可使用百里香酚酞作為指示劑測(cè)定酸價(jià)，但需要測(cè)定樣品中的谷維素含量，在酸價(jià)測(cè)定時(shí)向溶劑中添加相同量的谷維素作為空白對(duì)照。金俊等[17]研究也認(rèn)為可以通過(guò)大豆油添加相同濃度谷維素計(jì)算表觀酸價(jià)與真實(shí)酸價(jià)的差值，然后測(cè)定米糠油的表觀酸值,再減去差值得到真實(shí)酸值。

4 結(jié)論

飼用米糠油酸價(jià)的測(cè)定應(yīng)首選電位滴定法，采用電位滴定法測(cè)定的酸價(jià)不受谷維素的影響，其第一次pH 突躍點(diǎn)對(duì)應(yīng)的體積即滴定終點(diǎn)體積。電位滴定法精密度高于指示劑滴定法。指示劑滴定法中，需選用百里香酚酞作為指示劑，以含相同量谷維素的溶劑溶液代替空白溶液。