余琴 許婷婷 張麗潔 趙磊

（武漢血液中心，湖北 武漢 430030）

戊型病毒性肝炎由戊型肝炎病毒（hepatitis E virus,HEV）感染引起，嚴(yán)重危害人類健康[1]。近年來，戊型肝炎發(fā)病率呈上升趨勢，我國制定的《傳染病防治法》已將戊型肝炎列為主要肝炎之一。自然人群中存在大量的HEV 無癥狀感染者，而HEV 可經(jīng)輸血傳播，這對(duì)輸血安全構(gòu)成潛在風(fēng)險(xiǎn)。目前已有部分國家對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行HEV常規(guī)性篩查或選擇性篩查[2-6]。由于我國無償獻(xiàn)血人群HEV的流行病學(xué)數(shù)據(jù)仍不夠完整，HEV 尚未被列入到獻(xiàn)血者血液標(biāo)本的常規(guī)檢測中。多項(xiàng)研究顯示，HEV 感染呈現(xiàn)顯著的地域及人群分布差異[7-8]。因此，調(diào)查不同區(qū)域無償獻(xiàn)血者的HEV 感染情況，對(duì)于反映我國無償獻(xiàn)血人群HEV感染狀況及制定無償獻(xiàn)血者HEV 篩查策略具有重要意義。本研究旨在調(diào)查武漢城市圈不同地區(qū)無償獻(xiàn)血人群的HEV 流行情況，為獻(xiàn)血者HEV篩查策略的制定提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

隨機(jī)收集2021 年1—12 月武漢血液中心實(shí)施集中化檢測的4個(gè)地區(qū)（鄂州、天門、仙桃、潛江）獻(xiàn)血者血液標(biāo)本3 329 份（-40℃保存）。獻(xiàn)血者年齡在18～60 歲，均經(jīng)血液傳染性指標(biāo)HBsAg、抗-HCV、HIV Ag/Ab、梅毒抗體和ALT篩查。其中檢測項(xiàng)目全部合格（ALT正常組）的血樣2 737份，ALT＞50 U/L（ALT升高組）的血樣592份。本研究經(jīng)武漢血液中心倫理委員會(huì)審查批準(zhǔn)（KY2020-06）。

1.2 試劑與儀器

抗-HEV IgM檢測試劑（批號(hào)：EM2021 0904B）、抗-HEV IgG 檢測試劑（批號(hào)：EG20211005B）和HEV Ag 檢測試劑（批號(hào)：EV20210802A）均為北京萬泰生物藥業(yè)有限公司產(chǎn)品。HEV RNA檢測試劑（PCR-熒光法）（蘇州新波生物技術(shù)有限公司，批號(hào)20210702）。所有試劑均在有效期內(nèi)使用。STAR全自動(dòng)加樣儀與FAME 24/20 全自動(dòng)酶免分析儀（HAMILTON公司）；Pre-NAT Ⅱ全自動(dòng)核酸檢測反應(yīng)體系構(gòu)建系統(tǒng)（上海浩源公司）；ABI 7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀（Applied biosystems 公司）。所有儀器設(shè)備的使用均在校驗(yàn)有效期。

1.3 方法

1.3.1 ELISA法檢測抗-HEV IgG、抗-HEV IgM和HEV Ag

每份標(biāo)本取10 μL 或100 μL 血漿，按照抗-HEV IgG、IgM 和HEV Ag 試劑說明書進(jìn)行檢測，雙波長OD 450 nm/620 nm 測定。檢測結(jié)果的判定參照試劑說明書進(jìn)行。

1.3.2 Real-time PCR檢測HEV RNA

對(duì)592份ALT＞50 U/L的標(biāo)本和抗-HEV IgM陽性的合格標(biāo)本進(jìn)行單人份核酸檢測。每份標(biāo)本取1.6 mL，RNA的提取和PCR擴(kuò)增按照試劑說明書進(jìn)行。HEV RAN 試劑單人份的分析靈敏度為3.51 IU/mL[95%LoD(2.34～5.43)IU/mL]，8人份的分析靈敏度為24.33 IU/mL[95% LoD (21.72～38.61)IU/mL），可覆蓋HEV基因1～4型。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

統(tǒng)計(jì)分析使用SPSS 20 軟件統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，使用GraphPad Prism 8.0 作圖。采用頻率（n）和百分比（%）來描述分類變量，95%置信區(qū)間（CI）估計(jì)比例。采用χ2檢驗(yàn)或Fisher 精確檢驗(yàn)來評(píng)估不同地區(qū)和不同ALT 水平組抗-HEV IgG 和抗-HEV IgM陽性率的差異，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同地區(qū)獻(xiàn)血者ALT檢測情況

見表1。ALT 升高組中鄂州、天門、仙桃、潛江4 個(gè)地區(qū)獻(xiàn)血者的ALT 值分布情況如圖1，中位數(shù)分別為69.5 IU/mL、71.5 IU/mL、76.5 IU/mL 和71.3 IU/mL。

圖1 ALT升高組不同地區(qū)獻(xiàn)血者ALT值分布情況Figure 1 Distribution of ALT values among blood donors from different regions in the elevated ALT group

表1 不同地區(qū)獻(xiàn)血者ALT檢測情況（n，%）Table 1 ALT results among blood donors in different regions

2.2 不同地區(qū)獻(xiàn)血者抗-HEV IgG、IgM、HEV Ag、HEV RNA檢測結(jié)果

ALT正常組2 737份標(biāo)本均未檢測出HEV Ag，28 份抗-HEV IgM 陽性標(biāo)本未檢測出HEV RNA；ALT 升高組592 份標(biāo)本均未檢測出HEV Ag 和HEV RNA，見表2。獻(xiàn)血者抗-HEV IgG 陽性率最高的是天門29.44%（136/462），其次是潛江22.69%（236/1 040）、仙桃22.66%（230/1 015）、鄂州14.53%（118/812）（χ2=40.076，P＜0.05）；抗-HEV IgM 陽性率最高的也是天門2.38%（11/462），其次是仙桃1.58%（16/1 015）、潛江0.96%（10/1 040）、鄂州0.74%（6/812）（χ2=7.78，P＞0.05）。

表2 不同地區(qū)獻(xiàn)血者抗-HEV IgG/IgM檢測結(jié)果比較Table 2 Comparison of anti-HEV IgG/IgM results among blood donors from different regions

3 討論

HEV 感染引起的戊型肝炎已經(jīng)成為全球公共衛(wèi)生健康問題。近年來，我國戊型肝炎報(bào)告發(fā)病率呈上升趨勢，2004 年為1.27/10 萬，2019 年上升至2.02/10萬[9]。HEV雖是可經(jīng)輸血傳播病原體，但是我國現(xiàn)行的血液篩查策略中并沒有明確對(duì)無償獻(xiàn)血者血液開展HEV常規(guī)性或選擇性篩查。雖然近些年我國多地采供血機(jī)構(gòu)對(duì)無償獻(xiàn)血人群進(jìn)行了HEV 流行情況的調(diào)查研究，但是相關(guān)數(shù)據(jù)還不夠完整，我國獻(xiàn)血者血液HEV 篩查策略的制定還需更多的數(shù)據(jù)支撐。

HEV 流行具有顯著的地域特征。我們前期調(diào)查顯示武漢地區(qū)獻(xiàn)血者HEV IgG 流行率為16.44%，抗-HEV IgM 流行率為1.0%，HEV Ag 流行率為0.08%，HEV RNA流行率為0.058‰[10-11]。2016年的1項(xiàng)多中心Meta分析顯示，我國無償獻(xiàn)血人群抗-HEV IgG 陽性率為29.2%、抗-HEV IgM 陽性率為1.1%、HEV Ag 陽性率為0.1%，不同地區(qū)之間的抗-HEV陽性率差異較大[12]。2023年的多中心Meta分析結(jié)果顯示，我國無償獻(xiàn)血人群抗-HEV IgG 流行率為23.0%，抗-HEV IgM 流行率為1.13%，不同城市和地區(qū)之間存在顯著性差異[13]。本研究調(diào)查的抗-HEV IgG 陽性率低于2016 年而接近于2023年的分析數(shù)據(jù)，抗-HEV IgM 陽性率較穩(wěn)定及一致。與其它國家或國內(nèi)其他地區(qū)的調(diào)查數(shù)據(jù)相比，如中國香港（抗-HEV IgG 15.8%；抗-HEV IgM 0.8%）、法國（抗-HEV IgG 7.7%；抗-HEV IgM 0.6%）、愛爾蘭（抗-HEV IgG 5.3% 、抗-HEV IgM 0.19%）、美國（抗-HEV IgG 12.28%；抗-HEV IgM 0.67%）[14]，本研究獻(xiàn)血人群的抗-HEV 流行率較高。這提示HEV 在武漢城市圈4 地區(qū)獻(xiàn)血人群中存在較高流行。同時(shí)，本研究結(jié)果顯示4個(gè)地區(qū)獻(xiàn)血人群抗-HEV IgG 陽性率有差異（P＜0.05）?？?HEV IgG流行率的地區(qū)差異，推測可能與地區(qū)經(jīng)濟(jì)發(fā)展、人群結(jié)構(gòu)、醫(yī)療衛(wèi)生條件、防控重視程度等綜合因素有關(guān)，不同地區(qū)流行差異具體原因還有待進(jìn)一步研究。

眾所周知，ALT 水平升高與病毒性肝炎相關(guān)。在一些HEV 感染的受試者中，ALT 水平升高可能伴隨著急性無癥狀或有癥狀的感染，并可持續(xù)長達(dá)6周。因此，無癥狀的ALT水平升高可能是活動(dòng)性和傳播HEV 的非特異性標(biāo)志物。Ren 等[15]對(duì)來自中國5個(gè)地區(qū)747名ALT水平升高獻(xiàn)血者進(jìn)行的一項(xiàng)研究顯示，ALT水平升高獻(xiàn)血者抗-HEV IgG陽性率和抗-HEV IgM 陽性率均高于ALT 正常獻(xiàn)血者（40.02%vs27.42%,P＜0.01；2.76%vs1.02%,P＜0.01）。本研究的結(jié)果與該報(bào)道一致。有研究表明，ALT 水平升高獻(xiàn)血者與ALT 正常獻(xiàn)血者相比，HEV Ag 和HEV RNA 的檢出率更高[16]。抗-HEV IgM 是HEV 近期感染的標(biāo)志物。因此，本研究對(duì)592 份ALT 水平升高獻(xiàn)血者標(biāo)本和28 份抗-HEV IgM 陽性的ALT 水平正常獻(xiàn)血者標(biāo)本進(jìn)行HEV RNA 單人份檢測，但均未檢測出HEV RNA。其原因可能是：1）ALT 水平升高可能不是活動(dòng)性HEV感染的敏感標(biāo)志物；2）HEV RNA的診斷窗口較短，通常僅在感染后持續(xù)4～6 周，所取血樣不在診斷窗口期內(nèi)；3）武漢城市圈4地區(qū)獻(xiàn)血人群現(xiàn)癥感染率較低。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道我國HEV RNA 流行率為0.028%，法國為1∶744（0.13%），德國為1∶1 241（0.08%），荷蘭為1∶1 987（0.05%），西班牙為1∶3 846（0.03%），英國為1∶4 771（0.02%）[2,13]，因此本研究未檢測出HEV RNA可能是由于檢測標(biāo)本數(shù)有限。

本研究也存在不足之處：首先是標(biāo)本量不夠大，后期需要進(jìn)行更大規(guī)模的研究來確認(rèn)HEV RNA 的流行率、基因型以及輸血傳播的風(fēng)險(xiǎn)；其次是本研究僅對(duì)ALT 水平升高獻(xiàn)血者和IgM 陽性的合格獻(xiàn)血者進(jìn)行了HEV RNA 單人份檢測，沒有篩查所有合格獻(xiàn)血者的標(biāo)本，可能導(dǎo)致低估HEV RNA 的流行率。盡管存在這些局限性，但本研究是在前期的調(diào)查基礎(chǔ)上，進(jìn)一步對(duì)武漢周邊地區(qū)獻(xiàn)血人群HEV 流行率調(diào)查，可豐富我國無償獻(xiàn)血人群HEV 感染數(shù)據(jù)，并為獻(xiàn)血人群HEV 篩查策略的制定提供一定的數(shù)據(jù)支撐。綜上所述，本研究調(diào)查了武漢城市圈無償獻(xiàn)血人群HEV 的流行情況，HEV 在武漢城市圈獻(xiàn)血人群中存在流行，但現(xiàn)癥感染率極低，且不同地區(qū)抗-HEV 抗體陽性率存在差異。我國無償獻(xiàn)血人群HEV血液篩查策略有待進(jìn)一步完善。