【摘 要】目的：觀察高齡妊娠女性早孕期母體免疫環(huán)境的變化。方法：收集2024年1月至4月于重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院行早期人工流產(chǎn)的女性外周血及蛻膜組織，分為高齡組和對(duì)照組，其中高齡組蛻膜標(biāo)本16例、外周血12例，對(duì)照組蛻膜標(biāo)本23例、外周血13例。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞亞群：CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、CD19+B細(xì)胞、自然殺傷（natural killer，NK）細(xì)胞以及蛻膜NK（decidual NK，dNK）細(xì)胞亞群：dNK1（CD103-CD18-CD39+）、dNK2（CD103- CD18+ CD39-）、dNK3（CD103+ CD18+ CD39-）。并采用化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)，檢測(cè)外周血血清中的細(xì)胞因子。結(jié)果：相較于對(duì)照組，高齡組外周血中CD3+T細(xì)胞、CD19+B細(xì)胞、NK細(xì)胞數(shù)量和百分比無(wú)明顯差異，但高齡組CD4+T細(xì)胞占比［（40.25±6.40）%］較對(duì)照組［（35.29±3.95）%］增多（P=0.030），高齡組CD8+T細(xì)胞占比［（21.83±6.20）%］較對(duì)照組［（26.69±4.76）%］減少（P=0.041）；2組的dNK占總淋巴細(xì)胞的百分比無(wú)明顯差異，dNK1及dNK2細(xì)胞亞群在蛻膜NK細(xì)胞中占比無(wú)明顯差異，但高齡組的dNK3亞群占比［（45.21±11.40）%］相較于對(duì)照組［（22.93±6.93）%］明顯增多（Plt;0.001）。高齡組血清細(xì)胞因子白細(xì)胞介素4（Interleu?kin-4，IL-4）水平低于對(duì)照組（P=0.017），同時(shí)干擾素γ（Interferon-γ，IFN-γ）水平也低于對(duì)照組（P=0.011），腫瘤壞死因子α（Tu?mor necrosis factor-α TNF-α）水平高于對(duì)照組（P=0.014）。結(jié)論：高齡妊娠女性妊娠早期母體的免疫環(huán)境存在明顯變化，dNK細(xì)胞亞群中dNK3細(xì)胞比例明顯增高；外周血中存在CD4+T細(xì)胞比例增多和CD8+T細(xì)胞比例減少，IL-4和IFN-γ水平明顯降低。

【關(guān)鍵詞】高齡妊娠；母胎界面；免疫調(diào)節(jié)；淋巴細(xì)胞亞群；蛻膜NK細(xì)胞；細(xì)胞因子

【中圖分類(lèi)號(hào)】R714 【 文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A 【 收稿日期】2023-12-22

隨著三孩政策的開(kāi)放，高齡妊娠（≥35歲）日益常見(jiàn)，但高齡女性妊娠失敗率高[1-2]，以往的研究認(rèn)為與卵巢儲(chǔ)備功能下降導(dǎo)致雌孕激素水平下降、子宮內(nèi)膜的容受性差（表現(xiàn)為子宮內(nèi)膜分型較差、內(nèi)膜血供不豐富、胚胎種植窗期孕酮水平低）等有關(guān)[3]。隨著生殖免疫學(xué)的發(fā)展，母胎界面的免疫微環(huán)境作為受精卵著床、妊娠成功的一個(gè)重要影響因素備受關(guān)注。蛻膜作為一種構(gòu)成復(fù)雜的局部免疫器官，在妊娠中發(fā)揮重要作用。研究表明，激素水平可以調(diào)節(jié)母胎界面的免疫應(yīng)答，包括調(diào)節(jié)母胎界面自然殺傷（natural killer，NK）細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、肥大細(xì)胞等從而維持免疫耐受[4]。在這些免疫細(xì)胞中蛻膜NK（decidual NK，dNK）細(xì)胞占據(jù)母胎界面總淋巴細(xì)胞的70%左右，是發(fā)揮主要免疫功能的細(xì)胞，調(diào)控母胎界面免疫狀態(tài)，使胚胎免受母體免疫系統(tǒng)攻擊，從而確保妊娠成功[5]。高齡女性的妊娠期雌孕激素水平較低，可能引起母體對(duì)免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)功能減弱，進(jìn)而影響母胎界面的免疫微環(huán)境中的免疫細(xì)胞，尤其是dNK細(xì)胞，從而影響免疫耐受的維持，導(dǎo)致胚胎受到母體免疫攻擊的風(fēng)險(xiǎn)增加。但目前高齡妊娠女性早孕期母胎界面NK細(xì)胞尤其蛻膜NK細(xì)胞亞群以及全身免疫環(huán)境的變化少報(bào)道。

因此，本研究重點(diǎn)關(guān)注高齡妊娠女性早孕期母胎界面蛻膜NK細(xì)胞亞群分布及其功能變化，同時(shí)分析外周血淋巴細(xì)胞亞群的變化及細(xì)胞因子水平，探索高齡孕婦母胎局部免疫微環(huán)境和全身免疫環(huán)境的特征，以分析高齡孕婦妊娠失敗率高的可能原因，同時(shí)為后期尋找可能反映高齡妊娠失敗率的臨床標(biāo)志物提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2024年1月至2024年4月于重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院行早期人工流產(chǎn)的孕婦的蛻膜組織與外周血作為研究標(biāo)本，蛻膜標(biāo)本共收取39例，其中高齡組（年齡≥35歲）16例，平均年齡（38.4±2.2）歲，對(duì)照組23例，平均年齡（24.7±4.1）歲；外周血標(biāo)本共收取25例，其中高齡組12例，對(duì)照組13例。2 組研究對(duì)象均滿足以下條件：①本次妊娠均為自然受孕，且均因無(wú)生育要求，自愿要求行人工流產(chǎn)術(shù)；②孕周≤12周；③本次妊娠期間無(wú)各類(lèi)原因引起的異常子宮出血情況發(fā)生，無(wú)黃體酮等保胎藥物使用；④術(shù)前B超檢查提示胚胎發(fā)育正常，有胚囊、胚芽、心管搏動(dòng)等。本研究經(jīng)重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院倫理委員會(huì)審批（審批號(hào)：2021 年科倫審第（07）號(hào)），已征得所有研究對(duì)象同意。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料收集 收集患者年齡、妊娠天數(shù)、術(shù)前孕囊大小、血常規(guī)白細(xì)胞（white blood cell，WBC）數(shù)目、紅細(xì)胞（red blood cell，RBC）數(shù)目、血紅蛋白（hemoglobin，HGB）、血小板數(shù)目（blood platelet，PLT）、淋巴細(xì)胞數(shù)目（lymphoblas，Lym）、淋巴細(xì)胞百分比（lymphoblas%，Lym%）及凝血功能相關(guān)指標(biāo)如凝血酶原時(shí)間（prothrombin time，PT）、活化部分凝血活酶時(shí)間（activated partial thromboplastin time，APTT）、凝血酶時(shí)間（thrombin time，TT）、D-二聚體等數(shù)據(jù)。

1.2.2 儀器與材料 外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)采用Well?grow公司的EasyCell流式細(xì)胞儀，試劑采用北京同生時(shí)代生物技術(shù)有限公司的六色淋巴細(xì)胞亞群分析試劑盒，包括CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-Percp-Cy5.5/CD4-PC7/CD19-APC/CD8-APC-Cy7。蛻膜組織及外周血NK分群檢測(cè)儀器采用BD FACS canto plus，檢測(cè)試劑組合為：CD103-FITC/CD56-PE/CD16-Pe-Cy7/CD19-Percp/CD18-APC/CD39-APCCy7/CD49a-BV421/CD45-V500/CD3-V605。其中CD103-FITC 為貝克曼庫(kù)爾特流式細(xì)胞測(cè)定試劑，CD19-Percp 及CD49a-BV421購(gòu)自美國(guó)BD公司，CD16-Pe-Cy7購(gòu)自河南凱普瑞生物技術(shù)有限公司，CD45-V500及CD56-PE購(gòu)自北京同生時(shí)代生物技術(shù)有限公司，余通道抗體購(gòu)自美國(guó)BioLegend公司。血清細(xì)胞因子檢測(cè)采用熱景生物技術(shù)有限公司C900全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，試劑盒購(gòu)自熱景生物技術(shù)有限公司。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè) 采集乙二胺四乙酸（eth?ylene diamine tetraacetic acid，EDTA）抗凝外周血1 mL，混勻后取50 μL于流式管中，加入20 μL混合淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)試劑，渦旋混勻后避光孵育15 min，加入450 μL溶血素，渦旋混勻后避光孵育10 min后直接上機(jī)檢測(cè)。

1.3.2 蛻膜組織NK細(xì)胞檢測(cè) 收集患者蛻膜組織去除血凝塊及絨毛組織后裝于盛有生理鹽水的標(biāo)本袋中送至實(shí)驗(yàn)室，將適量蛻膜組織放入洗干凈的研缽中，用干凈的剪刀將組織盡可能剪碎，加入適量磷酸鹽緩沖鹽溶液（phosphatebuffer saline，PBS）用缽杵輕輕研磨后，將研磨液收集于干凈的管子中，37 ℃水浴箱孵育5 min后，1 800 r/min離心5 min，棄去上清液，加入PBS重懸，37 ℃水浴箱再次孵育5 min后，1 800 r/min 離心5 min，棄去上清液，重新加入PBS 重懸后1 800 r/min離心5 min，棄去上清液至2 mL左右，重懸混勻后使用紗網(wǎng)過(guò)濾，取濾液100 μL于干凈的流式管中，將抗體逐一加入，渦旋混勻后避光孵育15 min，向管中加入適量溶血素至液體透明，避光孵育10 min，加入PBS洗滌，離心后棄去上清液至流式管中剩余液體約450～500 μL進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.3 血清細(xì)胞因子檢測(cè) 樣本離心后上機(jī)檢測(cè)白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、白細(xì)胞介素-2（interleukin-2，IL-2）、白細(xì)胞介素-2R（interleukin-2R，IL-2R）、IL-4（in?terleukin-4，IL-4）、白細(xì)胞介素-5（interleukin-5，IL-5）、白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、白細(xì)胞介素-8（interleukin-8，IL-8）、白細(xì)胞介素-10（interleukin-10，IL-10）、白細(xì)胞介素-17A（interleukin-17A，IL-17A）、干擾素γ（interferon-γ，IFN-γ）、腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 27.0 軟件及GraphPad Prism 8.0 進(jìn)行數(shù)據(jù)處理、分析及作圖，流式數(shù)據(jù)采用kaluza軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及分析。正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，2組間比較采用獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)。非正態(tài)分布的計(jì)量資料以中位數(shù)（四分位間距）[Md（P25，P75）]表示，2 組間比較采用Mann-Whitney U 檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié) 果

2.1 高齡組與對(duì)照組一般資料對(duì)比

收集的高齡組與對(duì)照組2組一般資料比較，除年齡外，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05），見(jiàn)表1。

2.2 高齡孕婦血液學(xué)指標(biāo)的變化

高齡組活化部分凝血活酶（APTT）時(shí)間較對(duì)照組短（P=0.038）；2 組其他指標(biāo)（WBC、RBC、HGB、PLT、Lym、Lym%、PT、TT、D-Dimer）比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05），見(jiàn)表2。

2.3 高齡孕婦早孕期外周血淋巴細(xì)胞亞群的變化

高齡組外周血中CD4+T 細(xì)胞數(shù)目高于對(duì)照組（P=0.030），CD8+T細(xì)胞數(shù)目低于對(duì)照組（P=0.041）；2組其他指標(biāo)（CD3+總T淋巴細(xì)胞、CD19+總B淋巴細(xì)胞及NK細(xì)胞等）對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05），見(jiàn)表3。

2.4 高齡孕婦早孕期蛻膜組織NK細(xì)胞及NK細(xì)胞亞群的變化

2018年Roser Vento-Tormo[6]等通過(guò)單細(xì)胞RNA測(cè)序確定了dNK細(xì)胞的3個(gè)主要亞群（dNK1、dNK2和dNK3），它們共同表達(dá)CD49a，此外，dNK1群特異的表達(dá)CD39，dNK3特異的表達(dá)CD103，而dNK2和dNK3共同表達(dá)CD18。本研究據(jù)此通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)將蛻膜組織NK細(xì)胞分群，見(jiàn)圖1。比較高齡組和對(duì)照組蛻膜NK細(xì)胞之間的差異，發(fā)現(xiàn)2組蛻膜NK細(xì)胞總體數(shù)量和百分比無(wú)明顯差異（Pgt;0.05）。2組蛻膜組織中dNK1及dNK2亞群含量也無(wú)明顯差異（Pgt;0.05）；高齡組蛻膜組織中dNK3亞群含量明顯高于對(duì)照組（Plt;0.001），見(jiàn)圖2。

2.5 高齡孕婦早孕期外周血中細(xì)胞因子的變化

高齡組IL-4（P=0.017）、IFN-γ（P=0.011）水平低于對(duì)照組，TNF-α水平高于對(duì)照組（P=0.014）。而IL-1β、IL-2、IL-2R、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17A等因子水平在2組中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表4。

3 討 論

隨著孕婦年齡的增長(zhǎng)，妊娠失敗成為不容忽視的問(wèn)題[7]。近年來(lái)，妊娠免疫學(xué)受到越來(lái)越多的關(guān)注。妊娠是一個(gè)獨(dú)特的免疫過(guò)程，涉及胚胎植入、蛻膜化、胎盤(pán)形成和分娩等環(huán)節(jié)，這些過(guò)程與炎癥和抗炎反應(yīng)密切相關(guān)[8]。母胎界面是母體組織與胎兒成分直接接觸的部位，是免疫應(yīng)答的重要部位，正常妊娠期間，蛻膜內(nèi)富含免疫細(xì)胞，包括巨噬細(xì)胞、NK 細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞（regulatory T cells，Treg），其中NK 細(xì)胞占70%[9]。研究表明，缺乏NK細(xì)胞會(huì)導(dǎo)致妊娠終止，其在早期妊娠維持中的重要性[10]。

有研究通過(guò)單細(xì)胞測(cè)序識(shí)別出dNK細(xì)胞的3個(gè)亞群（dNK1、dNK2、dNK3）；dNK1（CD103-CD18-CD39+）在殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體（killer cell immunoglobulin-lib receptor，KIR）和白細(xì)胞免疫球蛋白樣受體B1（leukocyte immunoglobulin like receptors-B1，LILRB1）表達(dá)上較高，參與滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵襲和免疫耐受；dNK2（CD103- CD18+CD39-）和dNK3（CD103+CD18+CD39-）則表達(dá)高水平的X-C 基序趨化因子配體1（X-C motif chemokine ligand-1，XCL1），并且dNK3高度表達(dá)趨化因子配體5（C-C motif che?mokine ligand，CCL5），顯示其在母胎界面中的功能性相互作用[6，8，11，12]。本研究采用其分群方法檢測(cè)妊娠女性的蛻膜NK 亞群，并觀察其與高齡的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，dNK1和dNK2在高齡妊娠組中與對(duì)照組中的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而dNK3的表達(dá)明顯增加，提示其可能在母胎界面的免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。dNK3的高水平XCL1可能促進(jìn)免疫細(xì)胞的遷移，并參與胎盤(pán)發(fā)育和免疫平衡的調(diào)控。而CCL5的高表達(dá)則提示其在炎癥調(diào)節(jié)和細(xì)胞間通訊中的關(guān)鍵角色；CCL5與其受體CCR1的相互作用可能調(diào)節(jié)絨毛外滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵襲和血管生成，從而影響胎盤(pán)功能和母體-胎兒免疫適應(yīng)性。dNK3在高齡妊娠女性早期妊娠中的明顯增加，提示其在母胎界面免疫調(diào)節(jié)、血管重構(gòu)和胚胎發(fā)育中的重要功能?；诟啐g孕婦蛻膜dNK3 亞群增高的檢測(cè)結(jié)果，以及考慮到臨床蛻膜組織檢測(cè)的有創(chuàng)性，本研究希望能夠在外周血中嘗試可用于臨床應(yīng)用的檢測(cè)指標(biāo)，以期作為可能的生物標(biāo)志物觀察評(píng)估母胎界面免疫調(diào)節(jié)、血管重構(gòu)及胚胎發(fā)育之間的關(guān)系。因此本研究嘗試了外周血dNK3亞群檢測(cè)，但未能檢出，這可能由于外周血NK亞群具有與蛻膜NK不同的分子表達(dá)，這一結(jié)果也表明，蛻膜NK細(xì)胞在局部微環(huán)境中的特異性可能與外周血中的NK細(xì)胞特征存在明顯差異。

在外周血淋巴細(xì)胞亞群的流式檢測(cè)中，本研究發(fā)現(xiàn)高齡妊娠女性的外周血中CD4+ T細(xì)胞含量明顯高于正常年齡妊娠女性，而CD8+ T細(xì)胞的含量則較低。該發(fā)現(xiàn)與1項(xiàng)關(guān)于復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者外周血淋巴細(xì)胞的研究結(jié)果相似[13]。根據(jù)表面標(biāo)志物及功能的差異，T細(xì)胞中將CD4+T細(xì)胞稱作輔助型T細(xì)胞，CD8+T細(xì)胞稱作抑制型（細(xì)胞毒性）T細(xì)胞，相關(guān)研究已證實(shí)，在維持免疫耐受中，輔助型T細(xì)胞發(fā)揮至關(guān)重要的作用[14]。在母胎界面，妊娠早期蛻膜CD4+T（decidual CD4+T，dCD4+T）細(xì)胞及CD8+效應(yīng)T細(xì)胞呈活躍狀態(tài)，提供保護(hù)性免疫，誘導(dǎo)和維持母胎免疫耐受[15-19]?，F(xiàn)有研究表明，正常妊娠外周血CD4+T 細(xì)胞及CD8+T 細(xì)胞均高于蛻膜組織，蛻膜CD4+/CD8+的值小于外周血CD4+/CD8+的比值，結(jié)果對(duì)于母胎界面維持免疫耐受有益[18]。本研究的發(fā)現(xiàn)可能反映了高齡妊娠對(duì)免疫系統(tǒng)適應(yīng)性造成的改變。CD4+ T細(xì)胞數(shù)量的增加可能是為了滿足妊娠期對(duì)免疫系統(tǒng)的需求，從而保護(hù)胎兒免受免疫攻擊；而CD8+ T細(xì)胞數(shù)量的減少則可能是為了避免過(guò)度免疫反應(yīng)，以確保胎兒不受到負(fù)面影響；兩者共同作用以維持母體與胎兒之間適當(dāng)?shù)拿庖咂胶?，以確保妊娠成功。

本研究還發(fā)現(xiàn)，高齡妊娠中外周血細(xì)胞因子IL-4和IFN-γ的水平明顯低于對(duì)照組，而TNF-α的水平則明顯高于對(duì)照組。母胎免疫耐受的形成與輔助性T細(xì)胞1（T Helper 1 Cell，Th1）/輔助性T細(xì)胞2（T Helper 2 Cell，Th2）平衡有關(guān)，主要涉及Th1和Th2 型細(xì)胞因子的分泌[17，20]。正常妊娠表現(xiàn)為T(mén)h2優(yōu)勢(shì)表達(dá)，Th1處于抑制狀態(tài)，當(dāng)Th1型細(xì)胞因子過(guò)度表達(dá)而缺乏抑制時(shí)，可能導(dǎo)致不良妊娠如流產(chǎn)、胎兒發(fā)育遲緩、死胎等[19]。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，TNF-α作為T(mén)h1細(xì)胞因子，可以促進(jìn)T細(xì)胞的免疫應(yīng)答，釋放引起炎癥的細(xì)胞因子，表現(xiàn)為免疫殺傷，對(duì)著床、滋養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)、胚胎發(fā)育和胎兒生存是有害的[21]。在本研究中高齡組TNF-α水平明顯高于低齡組，提示高齡組患者外周血中Th-1處于優(yōu)勢(shì)表達(dá)，與妊娠失敗相關(guān)；同樣的IFN-γ作為T(mén)h1細(xì)胞因子，普遍認(rèn)為起到免疫殺傷作用，但在本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果中高齡組IFN-γ降低，有研究認(rèn)為妊娠早期IFN-γ的增加有利于胚胎的貼壁和黏附[22]，因此早期妊娠中IFN-γ降低可能導(dǎo)致胚胎的貼壁和黏附成功率降低，這也可能作為高齡孕婦的妊娠成功率低的解釋原因之一；IL-4作為T(mén)h2細(xì)胞因子，主要與B細(xì)胞增殖、成熟及抗體生成有關(guān)，主要功能是介導(dǎo)同種排斥反應(yīng)的免疫耐受，抑制Th1反應(yīng)，表現(xiàn)為免疫保護(hù)，防止對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞和胎兒的繼發(fā)性損傷，使妊娠得以成功[23]，這與本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果中高齡組IL-4水平降低一致，提示高齡孕婦的Th2免疫降低，妊娠失敗率高。進(jìn)行根據(jù)已有文獻(xiàn)，TNF-α水平隨著妊娠的進(jìn)展而增加，IL-8在妊娠中期下降，IL-4水平無(wú)明顯變化，而較低的妊娠中期IL-10濃度可能是先兆子癇的早期預(yù)測(cè)因子，促炎因子（如TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-8和IL-6）在子癇前期等病理妊娠過(guò)程中明顯升高[20，22]。本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在高齡妊娠女性中，免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)可能更加復(fù)雜：盡管某些促炎因子（如TNF-α）處于較高水平，但其他促炎因子（如IFN-γ）卻呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，這可能反映了高齡妊娠女性在免疫耐受與炎癥反應(yīng)之間的微妙平衡。

此外，本研究在對(duì) 2 組血液學(xué)指標(biāo)的統(tǒng)計(jì)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，高齡妊娠女性凝血功能指標(biāo)APTT盡管數(shù)值在正常范圍，但較正常妊娠女性有縮短。既往研究表明，與未懷孕的女性相比，懷孕的女性患靜脈血栓栓塞癥（venous thromboembolism，VTE）的風(fēng)險(xiǎn)高出4～5倍，原因與血漿促凝血因子升高、抗凝活性降低、纖溶系統(tǒng)活性降低及血流動(dòng)力學(xué)改變相關(guān)[1，24]。而在臨床VTE 風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估量表中，年齡因素（≥35歲）作為一項(xiàng)獨(dú)立因素存在。此外，一項(xiàng)關(guān)于凝血指標(biāo)對(duì)于妊娠期易栓癥患者的診斷價(jià)值的研究中表明，APTT縮短、PT縮短、TT延長(zhǎng)、D-二聚體水平增加為妊娠期女性發(fā)生易栓癥的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[25]。那么，高齡妊娠女性妊娠早期外周血APTT較正常對(duì)照組短，也提醒我們對(duì)于這一特定人群在VTE風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)注，同時(shí)提示血液高齡狀態(tài)也與高齡孕婦妊娠失敗率高相關(guān)，但僅APTT單一的實(shí)驗(yàn)指標(biāo)檢測(cè)具有其局限性，需要進(jìn)一步研究證實(shí)高齡妊娠女性APTT縮短的潛在意義和機(jī)制。

綜上，本研究發(fā)現(xiàn)，高齡妊娠女性早孕期母體的免疫環(huán)境存在明顯變化，蛻膜NK 細(xì)胞亞群中dNK3細(xì)胞明顯增多；高齡妊娠女性外周血中存在CD4+T 細(xì)胞增多和CD8+T 細(xì)胞減少，IL-4 和IFN-γ水平明顯降低，以及TNF-α明顯升高。提示高齡孕婦蛻膜局部免疫微環(huán)境和外周血免疫環(huán)境存在變化，外周血中檢出的免疫細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子的變化可能作為高齡女性的臨床檢驗(yàn)標(biāo)志物，但其參與妊娠維持的重要性以及與妊娠結(jié)局的關(guān)系尚待進(jìn)一步研究證實(shí)。

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