王亞坤　高文杰　安淑華　安會波　葛勝旺　張文超

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·調(diào)查研究·

兒童7種呼吸道病毒鼻咽拭子檢測分析

王亞坤高文杰安淑華安會波葛勝旺張文超

050031石家莊市，河北省兒童醫(yī)院呼吸一科(王亞坤、高文杰、安淑華)，病理科(安會波、葛勝旺)，檢驗(yàn)科(張文超)

【摘要】目的研究石家莊及附近地區(qū)兒童急性呼吸道感染(ARI)的病毒病原特征。方法4 019例急性呼吸道感染患兒進(jìn)行鼻咽脫落細(xì)胞涂片經(jīng)直接免疫熒光檢測7種呼吸道病毒。結(jié)果共有2 168份標(biāo)本為病毒陽性，總陽性率為53.9%，其中<6月年齡組陽性率最高占99.9%(742/743)，6月～占50.2%(572/1 139)，1歲～占20.4%(207/1 004)，2歲～占47.0%(177/377)，3歲～6歲占67.0(389/581)，>6歲占46.3%(81/175)。病毒陽性標(biāo)本中以呼吸道合胞病毒(RSV)為主占65.6%(1427/2 172)，其次為副流感病毒3(PIV-3)占19.1%(414/2 172)。除1歲～組以PIV-3為主66.03%(138/209)，其余各年齡段以RSV為主。RSV陽性標(biāo)本中73.93%來自2014年3～4月、10～12月、2015年1～2月。結(jié)論RSV是石家莊及附近地區(qū)秋冬季兒童急性呼吸道感染首要病毒病原，PIV-3是1歲～2歲兒童急性呼吸道感染的首要病毒病原。直接免疫熒光法檢測7種常見呼吸道病毒快速、簡便、病毒檢出率高，尤以RSV敏感，為臨床診斷和治療提供可靠依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】兒童；急性呼吸道感染；呼吸道病毒；直接免疫熒光

研究表明， 90%以上的急性呼吸道感染是由病毒引起[1]。常見的呼吸道病毒主要包括呼吸道合胞病毒 (respiratory syncytial virus，RSV)、腺病毒(adenovirus,ADV)、流感病毒A(influenza virusA，IVA)、流感病毒B (influenza virusB，IVB)、 及副流感病毒1、2、3(parainfluenza virus，PIV-1、2、3)等。 為了解石家莊及附近地區(qū)兒童急性呼吸道感染病毒病原譜，提供病原學(xué)資料及病原流行情況，筆者對就診于本院的急性呼吸道感染(acute resprratory infection，ARI)患兒鼻咽深部分泌物進(jìn)行呼吸道合胞病毒等 7 種常見呼吸道病毒的抗原檢測，報(bào)道如下。

1對象與方法

1.1調(diào)查對象2014年3月7日至2015年2月28日本院診斷為ARI的石家莊及附近地區(qū)患兒4 019例，其中男童2 588例占64.4%， 女童1 431例占35.6%，年齡29 d～13歲。 ARI診斷標(biāo)準(zhǔn)參考第7版《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》[2]。

1.2儀器與試劑7種呼吸道病毒檢測試劑盒均為美國Diagnostic Hybrid，innc(DHI)產(chǎn)品，含RSV、ADV、IVA、IVB、PIV-1、PIV-2、PIV-3 7種病毒抗原檢測配套試劑，內(nèi)含5塊陰陽性對照板。

1.3研究方法入院用藥前，對所有下呼吸道感染患兒采集鼻咽拭子并及時(shí)送檢。采用直接熒光定性檢測7種呼吸道病毒，熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。結(jié)果判斷依據(jù)：200倍顯微鏡下，每個(gè)視野找到≥2個(gè)綠色熒光細(xì)胞為陽性，陰性細(xì)胞被染成暗紅色。每批標(biāo)本檢測時(shí)，檢測陰陽性對照板?！?種病毒感染則為混合感染。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料比較采用χ2檢驗(yàn)，各組內(nèi)分布情況采用構(gòu)成比，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1不同年齡組病毒檢出率比較送檢標(biāo)本4 019例，病毒檢出陽性2 168例， 總陽性率53.9%，其中16例混合病毒感染，均為兩種病毒混合感染，混合感染率0.4%。不同年齡組病毒檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1136.976，P<0.001)，以嬰兒陽性檢出率最高，尤其是6個(gè)月以下小嬰兒，隨著年齡增長，病毒陽性檢出率仍無明顯減低。見表1。

表1　不同年齡組7種病毒陽性檢出率

2.2不同年齡組各病毒陽性率比較除1～2歲幼兒以PIV-3感染為主，其余各年齡組以RSV感染為主。用Fisher確切概率法檢測χ2=144.312.976，P<0.001，各年齡組不同病毒檢出率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

2.3不同季節(jié)各病毒檢出率比較兒童常見呼吸道病毒感染以秋冬兩季好發(fā)，以呼吸道合胞病毒感染為主，隨著氣溫轉(zhuǎn)暖，病毒感染率逐漸下降，RSV感染率亦下降，而PIV-3增多。見表3。

表2　不同年齡組各病毒陽性率比較　例(%)

表3　不同季節(jié)各病毒檢出率比較　例(%)

2.4不同病毒陽性檢出率比較7種常見呼吸道病毒，以RSV感染陽性率最高，其次為PIV-3，不同病毒檢出率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=623.344，P<0.001)。見表4。

表4　7種病毒陽性檢出率

3討論

呼吸道病毒是兒童急性呼吸道感染的重要病原，目前已證實(shí)急性呼吸道感染中80%以上由病毒引起[3]。本研究對4 019份臨床住院標(biāo)本的檢測結(jié)果顯示ARI病毒總陽性檢出率53.9%，與長沙[5](22.30%)、深圳[6](23.21%)檢出率相比陽性率高；低于廣州[7](69.7%)和上海[8](58.0%)的陽性檢出率，廣州和上海采用熒光定量PCR方法檢測，長沙和深圳采用的和本研究相同。本研究7種病毒中，檢出率最高的是RSV(65.6%)，其次為PIV-3(19.1%)，與深圳[6]報(bào)道的兒童呼吸道感染病毒以RSV、PIV-3為主結(jié)論近似；而與長沙[5]報(bào)道的以RSV主，其次為ADV，廣州[7]以RSV及IV以及上海[8]以RSV 為主，其次為鼻病毒不同，但均已RSV檢出率最高，提示RSV是住院兒童呼吸道感染最常見病毒。此結(jié)果與國內(nèi)報(bào)道[9]一致。

直接免疫熒光法是對病毒抗原直接進(jìn)行檢測，可在熒光顯微鏡下直接觀察上皮細(xì)胞內(nèi)病毒感染情況，被認(rèn)為是臨床診斷病原體的金標(biāo)準(zhǔn)[10]。本研究選用直接免疫熒光法檢測病毒，此方法需時(shí)較短，標(biāo)本在送到實(shí)驗(yàn)室2 h內(nèi)就可得出結(jié)果，在普通實(shí)驗(yàn)室就可開展，與其他方法相比，具有快速、簡便、特異性及敏感性高的特點(diǎn)[11]。多重RT-PCR是一種新型技術(shù)，可使某些不能培養(yǎng)或難以培養(yǎng)的病毒得以檢測，符合目前對檢測技術(shù)高通量快速的要求，其敏感性高于直接免疫熒光法，是今后的發(fā)展趨勢。

本研究結(jié)果顯示小于6月齡嬰兒，病毒檢出陽性率最高達(dá)99.9%，與其他年齡組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，1～2歲年齡組病毒感染陽性率最低(20.4%)，其余各年齡段病毒感染陽性率在46.3%～67.0%，但沒有出現(xiàn)隨年齡增長病毒感染率逐漸下降的趨勢。此結(jié)果與多地區(qū)研究結(jié)果不同[5]。浙江中醫(yī)藥大學(xué)馮輝曾于2014年總結(jié)得出不同年齡組的感染率不同，1歲以內(nèi)病毒感染檢出率最高26.52%(70/264)，1歲以下與1歲以上患兒有顯著差異，隨著年齡增加而下降，這可能是由于機(jī)體免疫力隨年齡增長而不斷完善造成[12]。

不同季節(jié)兒童呼吸道病毒感染的情況也不同，本研究中顯示秋冬兩季(57.7%、70.1%)病毒感染率明顯高于春夏兩季(42.7%、25.1%)，隨著季節(jié)變冷病毒感染率呈上升趨勢。說明秋季和冬季是呼吸道病毒感染的好發(fā)季節(jié)。提醒患兒及家長應(yīng)提前做好預(yù)防保健工作。

經(jīng)過本研究明確了RSV和PIV-3是2014年至2015年初石家莊及附近地區(qū)秋冬季住院兒童急性呼吸道感染的主要病原。與北京地區(qū)的最近研究結(jié)果以RSV及IV為主有差異[13]。RSV感染有明顯的流行特征，秋季(86.3%)和冬季(73.5%)為感染高峰季，夏季最少(18.6%)，且感染以小于6月的小嬰兒為主，年齡越小感染率越高，與既往國內(nèi)外報(bào)道一致。2014年春夏以PIV-3為主(44.4%、67.7%)，隨著天氣轉(zhuǎn)涼，RSV逐漸增多，并超過PIV-3，成為2014年冬的主要呼吸道感染病原。吳迪等[5]做的報(bào)道結(jié)果近似。PIV-3是僅次于RSV的引起嬰幼兒毛細(xì)支氣管炎的病原[14]。本研究中雖然PIV-3感染率僅次于RSV，但其差異性仍較大。

趙顯虹等[15]曾研究得出PIV-3是2013年蘇州地區(qū)嬰幼兒呼吸道感染的重要病原, 其季節(jié)流行特點(diǎn)及地區(qū)差異較大,蘇州地區(qū)一年均可檢出,其中春夏季為發(fā)病高峰期。且趙顯虹等[16]認(rèn)為HPIV3感染主要引起支氣管肺炎和毛細(xì)支氣管炎。Manuel等[16]的文獻(xiàn)報(bào)道PIV3 感染主要出現(xiàn)在秋季中期,并且研究發(fā)現(xiàn),合胞病毒及流感病毒感染與雨季雨量有關(guān),而PIV3 感染和雨季雨量呈負(fù)相關(guān),即天氣越干燥越容易感染。本研究中顯示1～2歲年齡組幼兒PIV-3陽性檢出率最高(66.4%)，與文獻(xiàn)報(bào)道嬰幼兒易感染HPIV3[17]相一致，分析與嬰幼兒呼吸道黏膜屏障功能及免疫功能發(fā)育不完善有關(guān)。

副流感病毒是一種副黏病毒，為單鏈RNA病毒，其中主要的四種類型同人類密切相關(guān)，嬰幼兒在3周歲前，容易感染1、2、3類，其中6個(gè)月以下的嬰兒最容易感染副流感病毒3，1、2類病毒以作用上呼吸道為主，出現(xiàn)一定的季節(jié)性特征，特別容易出現(xiàn)在夏季和秋季[18]。本研究選自住院患者，以下呼吸道感染為主，結(jié)合以上研究報(bào)道，可以推出副流感1、2引起下呼吸道感染較少，且未呈現(xiàn)明顯季節(jié)性和年齡分布特點(diǎn)。

本研究結(jié)果顯示總流感病毒陽性檢出率9.4%(包括IVA和IVB)，是繼RSV和PIV-3之后居第三位的陽性檢出病毒。隨著天氣轉(zhuǎn)暖，陽性檢出率明顯下降，以夏季最低(0.9%)，天氣轉(zhuǎn)涼陽性檢出率升高，冬季達(dá)最高(15.1%)。冬季單純IVA陽性檢出率(13.9%)明顯高于單純IVB(1.2%)，而春季單純IVB陽性檢出率(6.1%)明顯高于單純IVA(1.1%)。有報(bào)道提出通常<5歲兒童感染IV后感染重癥風(fēng)險(xiǎn)較高[19,20]。提示流感病毒是急性呼吸道感染住院患兒中的重要病原，且存在危重癥病例，故應(yīng)加強(qiáng)IV的流行檢測，并在流行季節(jié)加強(qiáng)防控。

ADV也是對嬰幼兒威脅非常大的呼吸道病毒之一，急性期可引起重癥肺炎、呼吸衰竭、心力衰竭、休克、胸腔積液等，甚至是死亡，極大的威脅著患兒的健康，而度過急性期后仍有可能持續(xù)性喘息形成閉塞性細(xì)支氣管炎等慢性肺損傷影響患兒一生。我們進(jìn)行監(jiān)測的這一年中ADV陽性檢出率為3.7%，春季最高9.8%，1～2歲年齡組患兒感染率最高。朱汝南等[13]曾提出當(dāng)RSV和IV流行規(guī)模較大時(shí)，ADV和PIV的檢出率相當(dāng)?shù)汀?/p>

綜上所述，我院ARI患兒咽拭子病毒檢出以RSV、PIV-3為主；特別在秋冬季，是RSV感染高發(fā)季節(jié)。ADV雖臨床癥狀重，但幸好發(fā)病率不高，了解急性呼吸道感染兒童的病毒檢出情況，對臨床醫(yī)生診斷和治療疾病具有重要的參考作用，且提醒天氣轉(zhuǎn)涼季節(jié)加強(qiáng)對患兒的保護(hù)非常必要。

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doi:10.3969/j.issn.1002-7386.2016.14.046

【中圖分類號】R 373.1

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

【文章編號】1002-7386(2016)14-2229-03

(收稿日期：2016-01-05)