王木蘭,潘永明,金敏,徐孝平,王德軍,馬全鑫,陳民利*
(1.正大青春寶藥業(yè)有限公司,杭州 310023;2. 浙江中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗研究中心,杭州310053)
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斑馬魚血栓模型的建立與冠心寧片的干預(yù)作用
王木蘭1,潘永明2,金敏1,徐孝平2,王德軍2,馬全鑫2,陳民利2*
(1.正大青春寶藥業(yè)有限公司,杭州 310023;2. 浙江中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗研究中心,杭州310053)
目的采用3種誘導(dǎo)劑分別建立斑馬魚血栓模型,觀察冠心寧片的抗血栓作用。方法分別采用1.5μmol/L苯肼、80μmol/L花生四烯酸和5mg/L普納替尼建立活體斑馬魚血栓模型,并用冠心寧片、氯吡格雷或阿司匹林等藥物干預(yù),觀察尾靜脈血栓形成情況,并用鄰聯(lián)茴香胺染色法對心臟紅細(xì)胞染色強度進行定量分析,計算預(yù)防血栓藥效。結(jié)果苯肼、花生四烯酸和普納替尼誘導(dǎo)后斑馬魚尾靜脈血栓明顯增加和心臟紅細(xì)胞染色強度顯著降低(P<0.001),同時冠心寧片均能顯著對抗這三種模型的血栓形成,其心臟紅細(xì)胞染色強度和預(yù)防血栓藥效均明顯增加(P<0.001),具有一定的劑量效應(yīng)關(guān)系,IC50分別為44.32、138.5和459.5mg/L。結(jié)論苯肼、花生四烯酸和普納替尼均能建立不同形成機理的斑馬魚血栓模型,而冠心寧片具有明顯的抗血栓作用,且其抗血栓機制存在多靶點效應(yīng)。
冠心寧片;血栓模型;斑馬魚;抗栓作用
急性血栓栓塞性疾病仍然是引起死亡或致殘的主要原因。動物模型常被用來了解病理過程包括血栓的形成機制以及抗血栓藥物的有效性和安全性評價。斑馬魚作為一種研究人類疾病理想的新型模式動物,具有許多獨特的優(yōu)勢[1],如斑馬魚與人類一樣具有遺傳保守性,存在70%的人類同源基因[2],以及擁有凝血因子、血小板受體,并對臨床應(yīng)用的抗凝血和抗血栓藥物具有很好的反應(yīng)[3-4],適合于血栓形成機制和治療藥物的評價。故斑馬魚作為新型模式動物逐漸受到國內(nèi)研究者的青睞,被廣泛用于生理毒理、藥理和腫瘤等研究中。近來有學(xué)者用苯肼誘導(dǎo)建立斑馬魚血栓模型[5],但血栓形成機制十分復(fù)雜,涉及氧化應(yīng)激、花生四烯酸代謝途徑、血管內(nèi)皮生長因子受體調(diào)控等,且其發(fā)生發(fā)展受凝血、纖溶系統(tǒng)、前列腺素、血小板等方面的影響,因此,從不同層次、環(huán)節(jié)和研究手段來闡明血栓形成的發(fā)展機理并尋找有效治療藥物成為當(dāng)前研究的熱點。近來認(rèn)為,活血化瘀是中醫(yī)抗血栓的治則。冠心寧片(GXN)是由活血化瘀中藥川芎和丹參經(jīng)改進提取工藝而制成的一個新制劑,用于治療冠心病、心絞痛(胸痹心痛)。本課題組前期發(fā)現(xiàn)冠心寧片能明顯升高急性心肌缺血犬血清一氧化氮(NO)水平,增加冠脈流量;并能降低氣滯血瘀大鼠血小板聚集和改善血液粘聚性,通過改變血小板花生四烯酸代謝途徑,改善血栓素B2(TXB2)/6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)的平衡,保護血管內(nèi)皮的作用[6-7],提示冠心寧片可能有抗血栓形成的作用。為此,本文利用不同誘導(dǎo)劑苯肼(phenylhydrazine,PH)、花生四烯酸(arachidonicacid,AA)、普納替尼(ponatinib)建立活體斑馬魚血栓模型并初步探討其可能的形成機制,同時觀察冠心寧片抗血栓的作用,為冠心寧片用于臨床的應(yīng)用提供實驗依據(jù)。
1.1實驗動物
實驗所用斑馬魚為健康A(chǔ)B系和Albino系野生型斑馬魚,參照Westerfield[8]的養(yǎng)殖方法,飼養(yǎng)于杭州環(huán)特生物科技有限公司斑馬魚實驗室[SYXK(浙)2012-0171]。在28℃條件下用養(yǎng)魚用水孵育胚胎,胚胎可以從自身的卵黃囊中獲取營養(yǎng)物質(zhì),故在受精后9d內(nèi)(9dayspostfertilization,dpf)無需喂食。實驗完成后用三卡因甲磺酸對各個發(fā)育階段的斑馬魚進行過度暴露處理,從而將斑馬魚麻醉處死。麻醉處死的操作步驟符合美國獸醫(yī)協(xié)會(AVMA)對動物麻醉處死的規(guī)范要求。
1.2試驗藥物與儀器試劑
冠心寧片(冠心寧浸膏,GXN),正大青春寶藥業(yè)有限公司;氯吡格雷(clopidogrel),上海晶純實業(yè)有限公司;阿司匹林(aspirin),上海晶純實業(yè)有限公司;苯肼,阿拉??;花生四烯酸,上海船夫生物科技有限公司;普納替尼(ponatinib),MedChemExpress公司。臨用前冠心寧浸膏粉用0.9 %生理鹽水配成20g/L的母液,苯肼用100%乙醇配成1.5mmol/L母液;花生四烯酸、阿司匹林、氯吡格雷和普納替尼用100% 二甲基亞砜(DMSO)助溶分別配成8mmol/L、45g/L、7.5g/L和5g/L母液,備用。SZX7型解剖顯微鏡,日本Olympus公司;TK-C1481EC高清攝像機,日本凱勒電子公司;6孔板,上海NestBiotech公司。
1.3方法
1.3.1苯肼誘發(fā)斑馬魚血栓模型的建立及藥物干預(yù)
AB系斑馬魚胚胎發(fā)育至2d時,在解剖顯微鏡挑選發(fā)育正常的胚胎,將其分到微孔板中,設(shè)置8個實驗組:即正常對照組(NC)、模型組(用1.5μmol/L苯肼處理,PHmodel)、冠心寧片干預(yù)組:分別將終濃度為12.5、25、50、100和200mg/L的冠心寧片預(yù)處理6h后加入誘導(dǎo)劑1.5μmol/L苯肼;氯吡格雷組:終濃度7.5mg/L氯吡格雷預(yù)處理6h后加入誘導(dǎo)劑1.5μmol/L苯肼。每組30尾,之后28℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h。
1.3.2花生四烯酸誘發(fā)斑馬魚血栓模型的建立及藥物干預(yù)
Albino系斑馬魚胚胎發(fā)育至3d時,在解剖顯微鏡挑選發(fā)育正常的胚胎,將其分到微孔板中,設(shè)置8個實驗組:即正常對照組(NC)、模型組(用80μmol/L花生四烯酸處理,AAmodel)、冠心寧片干預(yù)組:分別將終濃度為75、150、300、600和1200mg/L的冠心寧片預(yù)處理6h后加入誘導(dǎo)劑80μmol/L花生四烯酸;阿司匹林組:終濃度22.5mg/L阿司匹林預(yù)處理6h后加入誘導(dǎo)劑80μmol/L花生四烯酸。每組30尾,之后28℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)1.5h。
1.3.3普納替尼誘發(fā)斑馬魚血栓模型的建立及藥物干預(yù)
Albino系斑馬魚胚胎發(fā)育至5d時,在解剖顯微鏡挑選發(fā)育正常的胚胎,將其分到微孔板中,設(shè)置8個實驗組:即正常對照組(NC)、模型組(用5mg/L普納替尼處理,ponatinibmodelgroup)、冠心寧片干預(yù)組:分別將終濃度為150、300、600、1200和1500mg/L的冠心寧片與誘導(dǎo)劑5mg/L普納替尼共處理18h;阿司匹林組:終濃度45mg/L阿司匹林與誘導(dǎo)劑5mg/L普納替尼共處理18h。每組30尾,之后28℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)18h。
1.4觀察指標(biāo)
分別經(jīng)苯肼處理24h、花生四烯酸處理1.5h、普納替尼處理18h后,用1g/L鄰聯(lián)茴香胺染液對斑馬魚染色30min;然后,每組隨機挑選20尾斑馬魚在顯微鏡下觀察尾靜脈血栓情況并拍照,照片拍攝放大倍數(shù)為56倍;用NIS-ElementsDTM圖像處理軟件進行定量分析心臟紅細(xì)胞染色強度(SI),并計算預(yù)防血栓藥效 (%)=[SI(藥物干預(yù)組)-SI(模型組)]/SI(正常對照組)-SI(模型組) × 100%和半數(shù)抑制濃度IC50。
1.5統(tǒng)計學(xué)處理
2.1苯肼誘導(dǎo)斑馬魚血栓模型的建立及藥物干預(yù)
與正常對照組比,PH模型組尾靜脈血栓明顯增加而心臟紅細(xì)胞染色強度(SI)明顯減少(P<0.001),提示建模成功;與PH模型組比,7.5mg/L氯吡格雷干預(yù)后尾靜脈血栓減少明顯,并能顯著增加SI(P<0.001),預(yù)防血栓效率達43.79%;同時,12.5、25、50、100和200mg/L的冠心寧片干預(yù)后SI亦有不同程度的增加,其中25~200mg/L劑量組的作用顯著(P<0.01, P<0.001),各劑量組預(yù)防血栓效率分別為24.32%、37.63%、65.02%、93.90%和95.16%,具有一定的劑量效應(yīng)關(guān)系,IC50為44.32mg/L,同時200mg/L冠心寧片也能顯著減少尾靜脈血栓。見圖1、2。
注:與正常對照組比,ΔΔΔP<0.001; 與PH模型組比, **P< 0.01, ***P< 0.001. 正常對照組,苯肼模型組,7.5 mg/L氯匹格雷組, 12.5 mg/L、 25 mg/L、 50 mg/L、 100 mg/L和 200 mg/L冠心寧片組。圖1 苯肼誘導(dǎo)斑馬魚血栓模型的建立及藥物干預(yù) (n =20)Note. Compared with the NC group,ΔΔΔP<0.01; Compared with the PH model group, **P< 0.01, ***P< 0.001.NC group, PH model group, 7.5 mg/L Clopidogrel group,12.5 mg/L,25 mg/L,50 mg/L,100 mg/L and200 mg/L GXN group.Fig.1 Establishment of thrombosis model induced by phenyl hydrazine in the zebrafish and drug intervention of the models
注:圖A1-A8分別為正常對照組,苯肼模型組,7.5 mg/L氯吡格雷組,12.5、25、50、100和200 mg/L冠心寧片組;圖B1-B4分別為正常對照組,苯肼模型組,7.5 mg/L氯吡格雷組和200 mg/L冠心寧片組。圖2 各組心臟紅細(xì)胞染色(A)和尾靜脈血栓(B)的變化Note. Figure A1-A8: NC group, phenyl hydrazine model group, 7.5 mg/L Clopidogrel group, GXN groups in a dose of 12.5, 25, 50, 100 mg/L, and 200 mg/L, respectively. Figure B1-B4: NC group, phenyl hydrazine model group, 7.5 mg/L Clopidogrel group and 200 mg/L GXN group, respectively.Fig.2 Changes of cardiac red blood cells stained with O-dianisidine and venous thrombus in the zebrafish
2.2花生四烯酸誘導(dǎo)斑馬魚血栓模型的建立及藥物干預(yù)
與正常對照組比,AA模型組尾靜脈血栓生成明顯增加,同時心臟紅細(xì)胞染色強度(SI)明顯減少(P<0.001),提示建模成功;與模型組比,22.5mg/L阿司匹林干預(yù)后能明顯減少尾靜脈血栓和顯著增加SI(P<0.001),預(yù)防血栓效率達69.17 %;且75、150、300、600和1200mg/L的冠心寧片干預(yù)后SI亦有不同程度增加,其中150~1200mg/L劑量組的作用顯著(P<0.01, P<0.001),各劑量組的預(yù)防血栓效率分別為9.83 %、29.83 %、53.01 %、61.63 %和71.40 %,有一定的劑量效應(yīng)關(guān)系,IC50為138.5mg/L,同時1200mg/L冠心寧片也能顯著減少尾靜脈血栓,見圖3、4。
注:圖A1-A8分別為正常對照組,花生四烯酸模型組,22.5 mg/L阿司匹林組,75、150、300、600和1200 mg/L冠心寧片組;圖B1-B4分別為正常對照組,花生四烯酸模型組,22.5 mg/L阿司匹林組和1200mg/L冠心寧片組。圖4 各組心臟紅細(xì)胞染色(A)和尾靜脈血栓(B)的變化Note. Figure A1-A8: NC group, Arachidonic acid model group, 22.5 mg/L Aspirin group, GXN groups in a dose of 75,150, 300,600 mg/L, and 1200 mg/L, respectively. Figure B1-B4: NC group, Arachidonic acid model group, 22.5 mg/L Aspirin group and 1200 mg/L GXN group, respectively.Fig.4 Changes of the O-dianisidine staining intensity of erythrocytes in the heart and venous thrombus in the zebrafish
2.3普納替尼誘導(dǎo)斑馬魚血栓模型的建立及藥物干預(yù)
注:與正常對照組比,ΔΔΔP<0.001; 與ponatinib模型組比, **P< 0.01, ***P< 0.001. 正常對照組,普納替尼模型組,45 mg/mL阿司匹林組,150 mg/L、300 mg/L、600 mg/L、1200 mg/L和1500 mg/L冠心寧片組。圖5 普納替尼誘發(fā)活體斑馬魚血栓模型的建立及藥物干預(yù) (n =20)Note. Compared with the NC group,ΔΔΔP<0.01; Compared with the ponatinib model group, **P< 0.01, ***P< 0.001. NC group, Ponatinib model group, 45 mg/mL Aspirin group, 150 mg/L, 300 mg/L, 600 mg/L, 1200 mg/L and1500 mg/L GXN group.Fig.5 Establishment of the thrombosis model induced by ponatinib in the zebrafish and drug intervention
與正常對照組比,Ponatinib模型組尾靜脈血栓生成明顯增加而心臟紅細(xì)胞染色強度(SI)明顯減少(P<0.001),提示建模成功;與模型組比,45mg/L阿司匹林干預(yù)后能減少尾靜脈血栓并能顯著增加SI(P<0.001),預(yù)防血栓效率達66.36%;同時,劑量為150、300、600、1200和1500mg/L的冠心寧片干預(yù)后SI也有不同程度的增加,其中600~1500mg/L劑量組的作用顯著(P<0.001),各劑量組的預(yù)防血栓效率分別為5.33 %、9.91 %、85.84 %、89.93 %和107.73%;IC50為459.5mg/L,同時1500mg/L冠心寧片也能顯著減少尾靜脈血栓,見圖5,6。
注:圖A1-A8分別為正常對照組,普納替尼模型組,45 mg/mL阿司匹林組,150、300、600、1200和1500 mg/L冠心寧片組;圖B1-B4分別為正常對照組,普納替尼模型組,45 mg/mL阿司匹林組和1500mg/L冠心寧片組。圖6 各組心臟紅細(xì)胞染色(A)和尾靜脈血栓(B)的變化Note. Figure A1-A8: NC group, Ponatinib model group, 45 mg/L Aspirin group, GXN groups with 150, 300,600,1200 mg/L, and 1500 mg/L, respectively. Figure B1-B4: NC group, Ponatinib model group, 45 mg/L aspirin group and 1500 mg/L GXN group, respectively.Fig.6 Changes of the O-dianisidine staining intensity of erythrocytes in the heart and venous thrombus in the zebrafish
血栓形成是多因素參與、漸進發(fā)展的復(fù)雜過程,血液在流動狀態(tài)下因血小板的活化和凝血因子被激活而發(fā)生的異常凝固[9]。血栓形成在心腦血管疾病的發(fā)生與發(fā)展中起促進作用,也是引起死亡和致殘的主要原因之一。血栓形成的條件包括血管內(nèi)膜損傷、血流狀態(tài)的改變和血液凝固性增加。因此,抑制血小板功能和防止血液凝固可預(yù)防血栓形成。臨床上應(yīng)用的抗血小板和抗凝血酶藥物較多,如血小板環(huán)氧化酶抑制劑阿司匹林、血小板內(nèi)環(huán)核苷酸抑制劑雙嘧達莫、二磷酸腺苷(ADP)受體拮抗劑氯匹格雷、抗凝血酶Ш(ATШ)的肝素、維生素K拮抗劑華法林等,這些藥物共同的特點是單藥、單靶點、且不可逆的抑制,導(dǎo)致不良反應(yīng)時有發(fā)生,如阿司匹林能引起患者過敏、胃腸道反應(yīng)、瑞氏綜合征、肝損害、凝血障礙等[10];也有發(fā)現(xiàn)部分患者存在阿司匹林和氯吡格雷抵抗或反應(yīng)性低的現(xiàn)象,甚至對這兩藥存在同時抵抗,導(dǎo)致術(shù)后血栓形成的并發(fā)癥明顯增加[11]。因此,尋找多靶點、多通路且療效顯著、安全性高的抗血栓藥物具有重要意義;而建立理想的血栓模型是研究人類疾病機理和藥物防治重要的研究手段之一。
苯肼是一種強氧化劑,能作用于機體后引起自由基產(chǎn)生,促進紅細(xì)胞膜骨架和珠蛋白的氧化,使得紅細(xì)胞內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)失衡,加速膜脂質(zhì)過氧化,最終紅細(xì)胞變形能力降低并使其易于黏附到細(xì)胞外基質(zhì)中,進而損傷血管內(nèi)膜,促進血小板黏附、聚集和血管活性物質(zhì)的大量釋放,導(dǎo)致血栓形成[5,12]。本研究顯示,苯肼誘導(dǎo)后斑馬魚的心臟紅細(xì)胞染色強度明顯減少和尾靜脈血栓明顯增加,這與張勇等[5]研究結(jié)果一致,并發(fā)現(xiàn)斑馬魚紅細(xì)胞染色強度與尾靜脈血栓長度呈明顯負(fù)相關(guān),故可用紅細(xì)胞染色強度評估血栓生成情況。用氯吡格雷干預(yù)后能明顯減輕其血栓率,證實苯肼能誘導(dǎo)活體斑馬魚血栓形成,其形成機制與苯肼引起紅細(xì)胞抗氧化系統(tǒng)失衡,自由基生成過多和脂質(zhì)過氧化反應(yīng)增加,促進血管內(nèi)皮損傷和血小板聚集,導(dǎo)致血栓形成有關(guān)。冠心寧片是由丹參和川芎兩味中藥組成,且這兩味藥均有活血化瘀的療效,在臨床上被廣泛用于治療冠心病心絞痛。前期已證實冠心寧片具有抗自由基作用[13]。同樣,冠心寧片能顯著對抗苯肼誘導(dǎo)斑馬魚的血栓形成,具有一定的劑量效應(yīng)關(guān)系,表明冠心寧片有抗血栓形成作用,其效應(yīng)與對抗自由基生成,抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)和血小板聚集有關(guān)[7,13]。
花生四烯酸可誘導(dǎo)血小板釋放內(nèi)源性ADP,激活血小板聚集,這是血小板聚集的主要途徑之一;并且花生四烯酸通過環(huán)氧合酶和脂氧酶的作用,產(chǎn)生血栓素、前列腺素和白三烯等,其代謝產(chǎn)物血栓素TXA2具有收縮血管、促進血小板聚集,增加血液粘滯性的作用,同時前列腺素具有擴張血管和抑制血小板聚集的作用,兩者共同調(diào)節(jié)血小板的聚集和血管收縮程度,維持血管的正常張力和血液循環(huán)通暢[14]。本研究結(jié)果表明花生四烯酸能引起斑馬魚心臟紅細(xì)胞染色強度降低和尾靜脈血栓明顯增加,用環(huán)氧化酶抑制劑阿司匹林干預(yù)后血栓形成減少明顯,故花生四烯酸也可誘導(dǎo)活體斑馬魚血栓形成,其機制與花生四烯酸代謝途徑有關(guān)。而給予冠心寧片干預(yù)后也能明顯對抗花生四烯酸誘導(dǎo)斑馬魚血栓形成,提示冠心寧片抗血栓作用也可能影響花生四烯酸代謝途徑有關(guān)。
普納替尼是一種多靶點小分子酪氨酸激酶抑制劑,用于治療急慢性淋巴細(xì)胞白血病,但在臨床應(yīng)用后發(fā)現(xiàn)患者出現(xiàn)嚴(yán)重的血栓和血管狹窄等副作用而受監(jiān)控。近來發(fā)現(xiàn)普納替尼導(dǎo)致血栓形成與抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和血管形成,影響NO合成,導(dǎo)致血管內(nèi)皮損傷,誘發(fā)血栓形成有關(guān)[15],并有學(xué)者發(fā)現(xiàn)普納替尼內(nèi)有血管內(nèi)皮生長因子受體(VEGFR)[16],可阻斷PI3K/AKT/eNOS通路的傳遞。令狐克剛等[17]發(fā)現(xiàn)阿司匹林對氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷有保護作用,與其調(diào)控激活p-Akt/eNOS信號通路密切相關(guān)。本研究也發(fā)現(xiàn)普納替尼誘導(dǎo)后斑馬魚能形成明顯的血栓,并用阿司匹林干預(yù)后能抑制血栓的形成,提示普納替尼所致斑馬魚血栓形成可能與PI3K/AKT/eNOS通路表達調(diào)控異常有關(guān)。另外,冠心寧片干預(yù)后同樣能明顯對抗普納替尼誘導(dǎo)斑馬魚血栓的形成,該效應(yīng)可能與其能提高NO水平和保護血管內(nèi)皮損傷有關(guān),但是否與PI3K/AKT/eNOS通路表達調(diào)控有關(guān),還有待于進一步研究。
由此可見,苯肼、花生四烯酸和普納替尼均能建立活體斑馬魚血栓模型,并能快速、簡便、直觀的觀察血栓形成和溶栓情況,但血栓形成機制可能有所差異,如苯肼誘導(dǎo)可能與自由基生成有關(guān),花生四烯酸誘導(dǎo)可能與花生四烯酸代謝途徑有關(guān),而普納替尼誘導(dǎo)可能與PI3K/AKT/eNOS通路表達調(diào)控異常有關(guān),故這些斑馬魚血栓模型對加快篩選抗栓藥物并了解其作用特點具有支撐作用。此外,通過對冠心寧片、氯吡格雷和阿司匹林藥物的干預(yù)也進一步證實了斑馬魚模型的敏感性和有效性;進而也證實冠心寧片具有抗血栓作用,且其抗血栓機制存在多靶點效應(yīng)。
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Establishment of a zebrafish model of thrombosis and theinterventioneffectofGuanxinningtablet
WANGMu-lan1,PANYong-ming2,JINMin1,XUXiao-ping2,WANGDe-jun2,MAQuan-xin2,CHENMin-li2*
(1.ZhengdaQingchunbaoPharmaceuticalCo.,Ltd.Hangzhou310023;2.LaboratoryAnimalResearchCenter,ZhejiangChineseMedicalUniversity,Hangzhou310053,China)
ObjectiveToestablishazebrafishmodelofthrombosisinducedbythreekindsofinducersandobservetheanti-thromboticeffectofaChinesetraditionalmedicine,Guanxinningtablet(GXN).MethodsThezebrafishmodelsofthrombosiswasinducedbyusing1.5μmol/Lphenylhydrazine, 80μmol/Larachidonicacidand5mg/Lponatinib,respectively,andweretreatedwithvariousconcentrationofGXN,clopidogrelorasprin.Thethrombusinthetailveinwasobservedundermicroscope,Erythrocytesinthezebrafishheartwerestainedwitho-dianisidineandtheerythrocytestainingintensitywasassessedwithaNIS-ElementsDTMimageanalyzer,andtheanti-thromboliceffectofGXNwascalculated.ResultsVenousthrombuswassignificantlyincreasedandthestainingintensitiesoferythrocytesintheheartweresignificantlydecreasedafterinductionbyphenylhydrazine,arachidonicacidorPonatinib(P<0.001),respectively.Atthesametime,GXNshowedanincresinganti-thromboliceffectinthezebrafishmodels(P<0.001)inadose-effectmanner,withaIC50ofGXNof44.32mg/L,138.5mg/Land459.5mg/L,respectively.ConclusionsThezebrafishmodelsofthrombosisaresuccessfullyestablishedbyphenylhydrazine,arachidonicacidorPonatinib,respectively,bydifferentformationmechanisms.GXNhasbeenshowntohaveananti-thrombosiseffect,probably,bymultipletargeteffects.
Guanxinningtablet;Thrombosismodel;Zebrafish;Anti-thromboticeffect;Phenylhydrazine;Arachidonicacid;Ponatinib
CHENMin-li.E-mail:cmli991@aliyun.com
浙江中醫(yī)藥大學(xué)比較醫(yī)學(xué)創(chuàng)新團隊(XTD201301)。
王木蘭(1983-),女,工程師,研究方向為中藥藥理。E-mail:qcbwml@163.com
陳民利(1963-),女,教授,研究方向為實驗動物與比較醫(yī)學(xué)。E-mail:cmli991@aliyun.com
研究報告
Q95-33
A
1005-4847(2016)04-0432-07
10.3969/j.issn.1005-4847.2016.04.018
2016-05-10