張?jiān)￠Z加慶　劉敏　周偉娥　吳文杰　劉佳　李國(guó)輝

中圖分類(lèi)號(hào) R275.9 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2018）02-0283-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.02.33

摘 要 目的：為更好地促進(jìn)超臨界流體色譜（SFC）技術(shù)在藥物分析工作中的應(yīng)用提供參考。方法：以“超臨界流體色譜”“SFC”“合相色譜”“UPC”“中藥”“Supercritical fluid chromatography”“UltraPerformance convergence chromatography”等為關(guān)鍵詞，組合查詢(xún)?cè)谥袊?guó)知網(wǎng)、萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)、維普數(shù)據(jù)庫(kù)、Web of Science等數(shù)據(jù)庫(kù)中收錄的2012年1月-2017年6月發(fā)表的相關(guān)研究文獻(xiàn)，進(jìn)行歸納和總結(jié)。結(jié)果與結(jié)論：共檢索到相關(guān)研究文獻(xiàn)315篇，其中有效文獻(xiàn)38篇。SFC技術(shù)實(shí)現(xiàn)分離主要原理是根據(jù)待測(cè)物在固定相和流動(dòng)相兩相中的分配系數(shù)不同，繼而實(shí)現(xiàn)對(duì)待測(cè)物的先后洗脫。SFC技術(shù)在手性藥物分析領(lǐng)域的應(yīng)用主要涉及化學(xué)藥手性成分拆分和中藥手性成分拆分兩個(gè)方面；在非手性藥物分析領(lǐng)域的應(yīng)用主要涉及天然產(chǎn)物分離及制備、代謝組學(xué)研究、維生素分離及測(cè)定和指紋圖譜研究等方面。具有快速、高效、靈敏、環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)的SFC及其聯(lián)用技術(shù)給藥物成分的定性與定量分析提供了一條新的思路。

關(guān)鍵詞 超臨界流體色譜；藥物分析；手性藥物；非手性藥物；研究進(jìn)展

超臨界流體色譜（Supercritical fluid chromatography，SFC）是指以超臨界流體為流動(dòng)相的一種色譜類(lèi)型?？紤]到超臨界流體兼具液體的高密度和氣體的低黏度，在分析化學(xué)領(lǐng)域，其可作為氣相色譜（Gas chromatography，GC）和高效液相色譜（High performance liquid chromatography，HPLC）的有力補(bǔ)充，應(yīng)用于多種不同種類(lèi)化合物的分離測(cè)定。

SFC最早于20世紀(jì)60年代被分析化學(xué)工作者提出[1]。經(jīng)過(guò)近20年的緩慢發(fā)展，空心毛細(xì)管柱式SFC于20世紀(jì)80年代早期被成功開(kāi)發(fā)[1]，其出現(xiàn)加速了SFC技術(shù)的發(fā)展。隨后，新型填充柱式SFC也應(yīng)運(yùn)而生，進(jìn)一步加速了SFC技術(shù)在應(yīng)用領(lǐng)域的發(fā)展。至21世紀(jì)初期，許多針對(duì)SFC技術(shù)在不同領(lǐng)域應(yīng)用的研究文章相繼發(fā)表[2-3]。2012年3月，美國(guó)Waters公司推出了新型商品化的超臨界流體色譜系統(tǒng)——超高效合相色譜（UltraPerformance convergence chromatography，UPC2）系統(tǒng)，同時(shí)，基于亞2 μm粒徑填料的色譜柱也被開(kāi)發(fā)出來(lái)[4]。自此，SFC技術(shù)的應(yīng)用得到飛速發(fā)展，且在實(shí)踐中成功與蒸發(fā)光散射檢測(cè)器、紅外檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器等多種檢測(cè)器聯(lián)用[5-6]。其中，SFC與質(zhì)譜（MS）聯(lián)用具有靈敏度高、綠色環(huán)保等優(yōu)勢(shì)，在分析化學(xué)領(lǐng)域引起了極大的關(guān)注[7-8]。目前，SFC技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域，如食品安全領(lǐng)域、環(huán)境分析領(lǐng)域、臨床及生物樣本分析領(lǐng)域[9-10]，而在藥品及制劑質(zhì)量控制與分析領(lǐng)域亦得到了廣泛的應(yīng)用，為推動(dòng)該領(lǐng)域的技術(shù)進(jìn)步作出了貢獻(xiàn)[11-12]。本研究中，筆者以“超臨界流體色譜”“SFC”“合相色譜”“UPC”“中藥”“Supercritical fluid chromatography”“UltraPerformance convergence chromatography”等為關(guān)鍵詞，組合查詢(xún)?cè)谥袊?guó)知網(wǎng)、萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)、維普數(shù)據(jù)庫(kù)、Web of Science等數(shù)據(jù)庫(kù)中收錄的2012年1月-2017年6月發(fā)表的相關(guān)研究文獻(xiàn)（共檢索到相關(guān)研究文獻(xiàn)315篇，其中有效文獻(xiàn)38篇），進(jìn)行歸納和總結(jié)，以期為更好地促進(jìn)SFC技術(shù)在藥物分析工作中的應(yīng)用提供參考。

1 SFC基本原理及特點(diǎn)

SFC對(duì)待測(cè)物實(shí)現(xiàn)分離主要原理是根據(jù)待測(cè)物在固定相和流動(dòng)相兩相中的分配系數(shù)不同，繼而實(shí)現(xiàn)對(duì)待測(cè)物的先后洗脫。早期SFC系統(tǒng)由于設(shè)備很難控制超臨界流體壓力，常導(dǎo)致色譜分離性能不穩(wěn)定，限制了該技術(shù)的推廣和應(yīng)用[13]。近些年來(lái)，隨著流體傳輸設(shè)計(jì)、溫度和壓力控制等技術(shù)的創(chuàng)新，SFC系統(tǒng)壓力得以精準(zhǔn)控制，加之超臨界流體具有擴(kuò)散和傳質(zhì)速率快、黏度低的特點(diǎn)，可彌補(bǔ)GC和HPLC系統(tǒng)在分析功能上的不足。

不同于傳統(tǒng)的GC和HPLC，SFC流動(dòng)相是一種介于氣體和液體之間的超臨界流體[13]，兼有液體的高密度和氣體的低黏度優(yōu)勢(shì)。很多物質(zhì)均已被證明能夠達(dá)到超臨界流體狀態(tài)，目前，已有超過(guò)1 000種物質(zhì)被確定了超臨界參數(shù)，常見(jiàn)的包括CO2、CCl2F2、N2O等[14]。由于SFC中流動(dòng)相的使用量很小，早期很多物質(zhì)均被采用作為SFC的流動(dòng)相，甚至一些有毒、貴重的流體。但隨著新型設(shè)備被成功開(kāi)發(fā)，絕大多數(shù)流體現(xiàn)已很少采用，而考慮到CO2無(wú)毒無(wú)害、易于獲得且達(dá)到超臨界所需溫度和壓力條件較容易實(shí)現(xiàn)，目前絕大多數(shù)情況下均采用其作為SFC的流動(dòng)相。既往SFC多用于非極性或弱極性物質(zhì)的測(cè)定，主要考慮到超臨界CO2流體的極性較低。近年來(lái)通過(guò)將甲醇等極性試劑加入CO2中，以增加超臨界流動(dòng)相的極性，從而增加了SFC對(duì)極性物質(zhì)的溶解和洗脫能力，使其應(yīng)用范圍大大擴(kuò)展。

同時(shí)，填充柱的出現(xiàn)也很大程度推動(dòng)了SFC的發(fā)展。相比HPLC流動(dòng)相為液體，SFC所用超臨界流體具有高擴(kuò)散性和低黏性的優(yōu)勢(shì)，因此分離速度顯著加快；并且，與液體流動(dòng)相密度受溫度和壓力影響較小不同，超臨界流體密度隨溫度和壓力的變化會(huì)出現(xiàn)較大的變化，導(dǎo)致流動(dòng)相的溶劑化能力出現(xiàn)較大程度的變化。鑒于此，除了可通過(guò)改變流動(dòng)相種類(lèi)以及調(diào)整添加劑的使用量對(duì)待測(cè)化合物的保留情況進(jìn)行調(diào)節(jié)以外，還可以通過(guò)調(diào)整溫度、壓力（通過(guò)控制系統(tǒng)內(nèi)背壓實(shí)現(xiàn)）等影響流動(dòng)相密度的因素較輕松地對(duì)待測(cè)化合物的保留情況進(jìn)行調(diào)節(jié)。

2 SFC技術(shù)在手性藥物分析領(lǐng)域的應(yīng)用

手性物質(zhì)在自然界中廣泛存在[15]，目前臨床使用的藥物中約有50%為手性藥物。關(guān)于手性對(duì)藥物藥效的影響目前已有較多研究，手性藥物中一對(duì)對(duì)映異構(gòu)體不僅在臨床療效方面有較大差異，而且會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重程度不一的不良反應(yīng)，部分手性異構(gòu)體不良反應(yīng)甚至完全不同[16]。與此同時(shí)，在進(jìn)行藥動(dòng)學(xué)研究時(shí)，手性藥物在體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)可呈現(xiàn)完全不同的特點(diǎn)。鑒于此，對(duì)手性藥物進(jìn)行拆分測(cè)定，不僅對(duì)藥物的質(zhì)量評(píng)定、治療效果和不良反應(yīng)預(yù)測(cè)有重要意義，而且對(duì)于新藥開(kāi)發(fā)也能發(fā)揮重要的作用[17]。

目前，SFC技術(shù)在手性藥物拆分方面已取得了較大進(jìn)展，在化學(xué)藥對(duì)映異構(gòu)體拆分、天然產(chǎn)物手性分析以及藥物代謝組學(xué)研究和藥物指紋圖譜研究等方面，均獲得了較廣泛的應(yīng)用。在手性藥物拆分時(shí)，SFC流動(dòng)相主要采用CO2，而固定相則種類(lèi)較多，早期其手性固定相填料主要參考GC和HPLC手性固定相，此后一些新型的手性固定相則相繼問(wèn)世。據(jù)報(bào)道，目前使用的SFC手性固定相已逾1 000種，常見(jiàn)的有多聚糖衍生物類(lèi)手性固定相、環(huán)糊精類(lèi)手性固定相、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素類(lèi)手性固定相、Pirkle型手性固定相等[12]。

2.1 SFC技術(shù)在化學(xué)藥手性成分拆分中的應(yīng)用

既往在進(jìn)行化學(xué)藥手性成分拆分的時(shí)候較多考慮傳統(tǒng)HPLC方法，但隨著SFC技術(shù)發(fā)展，研究者發(fā)現(xiàn)相較傳統(tǒng)HPLC方法，SFC方法在分離手性藥物的時(shí)候具有很大優(yōu)勢(shì)：對(duì)于部分手性藥物SFC不僅分離效能比HPLC更高，而且能顯著縮短分離時(shí)間。因此，目前很多研究者在進(jìn)行手性藥物拆分時(shí)均會(huì)首先考慮進(jìn)行SFC方法的嘗試。

戴濤等[18]采用SFC技術(shù)實(shí)現(xiàn)了對(duì)齊留通對(duì)映異構(gòu)體的有效分離，試驗(yàn)中對(duì)比了5款不同類(lèi)型色譜柱，最終選定Chiral-pak? AD H色譜柱作為分離柱；同時(shí)在該柱上考察了改性劑的種類(lèi)、濃度、溫度及背壓等不同因素對(duì)分離效果的影響，最終選定改性劑為18%異丙醇，背壓為140 bar（1 bar=100 kPa），溫度為303 K。在該條件下，可實(shí)現(xiàn)對(duì)齊留通對(duì)映異構(gòu)體最佳分離，分離度高達(dá)11.5。金薇等[19]建立了拆分左乙拉西坦及其右旋異構(gòu)體的SFC方法，分別考察了改性劑、背壓、柱溫和流速等因素對(duì)分離效果的影響，采用Chiralcel OD色譜柱，12%無(wú)水乙醇的CO2為改性劑，流速為2.0 mL/min，背壓為15 MPa，柱溫為40 ℃，使待測(cè)化合物得到最好的分離。金薇等[20]還建立了對(duì)依折麥布及其R-對(duì)映體的SFC手性拆分方法，同樣采用Chiralcel OD色譜柱，以超臨界CO2 -含0.1%三氟乙酸的0.1%三乙胺的甲醇（90 ∶ 10，V/V）為流動(dòng)相，背壓為15 MPa，柱溫為35 ℃，流速為3.0 mL/min分離依折麥布及其R-對(duì)映體，取得了較好的拆分效果。羅英豪[21]采用SFC方法對(duì)萘普生對(duì)映體進(jìn)行拆分，以萘普生對(duì)映體的分離時(shí)間、容量因子、分離度為考察指標(biāo)，優(yōu)選手性色譜柱、流動(dòng)相中極性添加劑種類(lèi)及占比、背壓和柱溫等條件，最終選用Chiralpak? AD-H手性色譜柱，20%異丙醇為改性劑，背壓170 bar，柱溫20 ℃。在此條件下萘普生對(duì)映體分離度高達(dá)4.31，分離因子為1.90，且精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性等相關(guān)指標(biāo)均滿(mǎn)足檢測(cè)需求。楊杰鋒等[22]采用SFC方法分離和測(cè)定了碘帕醇的對(duì)映異構(gòu)體的含量，選用Chiralpak? OD-H手性色譜柱，以CO2-甲醇（89 ∶ 11，V/V）為流動(dòng)相，結(jié)果R-碘帕醇與S-碘帕醇分離度良好，該法對(duì)R-碘帕醇質(zhì)量濃度在0.2～1.2 mg/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，精密度、回收率等方法學(xué)參數(shù)均滿(mǎn)足檢測(cè)需求。研究者還對(duì)比了現(xiàn)行R-碘帕醇含量限制的標(biāo)準(zhǔn)，提出可考慮將直接定量方法引入對(duì)R-碘帕醇含量的控制。

SFC方法相比HPLC方法在拆分手性異構(gòu)體時(shí)具有較多優(yōu)勢(shì)，不僅對(duì)單對(duì)手性化合物分離效能高、分析時(shí)間短，對(duì)于多對(duì)手性化合物的同時(shí)分離也能取得較為滿(mǎn)意的效果。庾莉菊等[23]建立了同時(shí)測(cè)定鹽酸蘭地洛爾中立體異構(gòu)體含量的SFC方法。鹽酸蘭地洛爾具有2個(gè)手性中心，除臨床常用的S，S-異構(gòu)體外，還有3個(gè)立體異構(gòu)體。該法選用Chiralpak? IF手性色譜柱，以CO2為流動(dòng)相，甲醇-正丁醇-乙腈（1 ∶ 1 ∶ 1，V/V/V）+0.5%氨水為助溶劑，梯度洗脫。在該色譜條件下，鹽酸蘭地洛爾的R，R-異構(gòu)體、R，S-異構(gòu)體和S，R-異構(gòu)體可以達(dá)到基線(xiàn)分離，方法檢測(cè)限分別為0.3、0.4和0.3 mg/L，能滿(mǎn)足鹽酸蘭地洛爾樣品中3個(gè)立體異構(gòu)體檢測(cè)的相關(guān)要求。李冬艷等[24]采用6種多糖類(lèi)手性固定相實(shí)現(xiàn)了對(duì)11種手性化合物的分離，試驗(yàn)以鍵合型多糖系列柱i-chiral 6：ChiralpakIA、IB、IC、ID、IE、IF分別為手性固定相，在SFC模式下對(duì)11種手性化合物進(jìn)行手性分離，同時(shí)探討了改性劑種類(lèi)、濃度、堿性添加劑以及特殊改性劑對(duì)手性分離的影響。結(jié)果，6種手性柱對(duì)11種化合物的識(shí)別能力如下：IA可以識(shí)別其中的10個(gè)，IB可以識(shí)別5個(gè)，IC可以識(shí)別7個(gè)，ID可以識(shí)別9個(gè)，IE可以識(shí)別8個(gè)，IF可以識(shí)別8個(gè)。試驗(yàn)結(jié)果表明i-chiral 6系列手性柱手性識(shí)別能力具有一定的互補(bǔ)性，對(duì)不同手性化合物的分離提供了更多的選擇。Huang J等[25]應(yīng)用多糖手性固定相成功分離了6對(duì)苯基哌嗪衍生物對(duì)映異構(gòu)體，色譜柱選用Chiralpak? IA CSP柱，改性劑選用異丙醇，優(yōu)化了柱溫、背壓等條件后，6對(duì)化合物均能在10 min內(nèi)達(dá)到基線(xiàn)分離。

2.2 SFC技術(shù)在中藥手性成分拆分中的應(yīng)用

臨床常用的中藥中很多成分都存在手性異構(gòu)體，但既往中藥中手性成分拆分及相關(guān)研究并未得到足夠重視?？紤]原因可能與中藥本身成分復(fù)雜，在進(jìn)行藥物分離時(shí)已然面對(duì)著較大困難，若進(jìn)一步進(jìn)行手性成分拆分難度更大；與此同時(shí)，手性藥物拆分技術(shù)的不足也桎梏著中藥手性成分分離的發(fā)展。伴隨著對(duì)中藥手性成分認(rèn)識(shí)的提高和手性成分拆分技術(shù)的進(jìn)步，目前中藥手性成分拆分研究方面已取得了較大發(fā)展。

劉佩等[26]建立了一種新型丹參素異丙酯和冰片酯的合成途徑并采用SFC方法對(duì)兩者的對(duì)映異構(gòu)體進(jìn)行了拆分研究。所得混旋丹參素異丙酯的手性拆分SFC分離條件為：Chiralpak? AD-H手性柱，乙醇-水（40 ∶ 60，V/V）為改性劑，溫度為35 ℃，流速為125 mL/min。在該條件下混旋丹參素異丙酯拆分后收率高達(dá)93%，10 g混旋物約可得到4.8 g S-丹參素異丙酯（光學(xué)純度為99.6%）和4.5 g R-丹參素異丙酯（光學(xué)純度為99.5%）。所得混旋丹參素冰片酯的手性拆分SFC分離條件為：Chiralpak? AD-H手性柱，乙醇-水（20 ∶ 80，V/V）為改性劑，溫度為35 ℃，流速為130 mL/min。在該條件下混旋丹參素冰片酯拆分后收率達(dá)90%，15 g混旋物分別得到6.9 g S-丹參素冰片酯（光學(xué)純度為99.5%）和6.6 g R-丹參素冰片酯（光學(xué)純度為99.5%）。陳海等[27]采用新型SFC成功拆分了反式-二苯乙烯氧化物（TSO）、安息香手性物質(zhì)，兩種手性異構(gòu)體分離度均達(dá)到3以上，實(shí)現(xiàn)了較好的分離。試驗(yàn)中考察了不同因素對(duì)化合物分離效果的影響，結(jié)果表明，有機(jī)改性劑種類(lèi)及濃度對(duì)分離效果均有影響，洗脫能力隨著改性劑濃度的增大而增大，分離度隨著改性劑濃度的增大而增大。

3 SFC技術(shù)在非手性藥物分析領(lǐng)域的應(yīng)用

對(duì)于少數(shù)非手性藥物的分離和定量，目前傳統(tǒng)的GC或者HPLC方法還存在較多困難，如分離效能偏低、靈敏度不高、有機(jī)試劑消耗量大等，而采用SFC方法可有效提高分離效能和靈敏度，減小有機(jī)試劑消耗量。而對(duì)于大多數(shù)非手性藥物而言采用GC或者HPLC方法即可進(jìn)行分離和分析，但相比較采用SFC方法可大大縮短分離時(shí)間；同時(shí)SFC方法所用改性劑為CO2，更為綠色環(huán)保，符合分析科學(xué)發(fā)展的理念。

3.1 SFC技術(shù)在天然產(chǎn)物分離及制備中的應(yīng)用

近年來(lái)，伴隨著天然產(chǎn)物功能性成分的市場(chǎng)需求量逐年提升，對(duì)于天然產(chǎn)物中活性成分和有效成分的研究越來(lái)越多[28]。因此天然產(chǎn)物中相關(guān)成分分離及制備技術(shù)取得了較大進(jìn)展，尤其是隨著SFC技術(shù)的飛速發(fā)展，制備型和半制備型SFC技術(shù)也應(yīng)運(yùn)而生，并在天然產(chǎn)物相關(guān)成分分離及制備中得到了較廣泛的應(yīng)用[29]。

莫緒飛等[30]將SFC技術(shù)用于Z-藁本內(nèi)酯的制備純化，采用ZorBax SB-C18色譜柱，分別優(yōu)化了改性劑、流速、壓力、溫度等，從而確定了最適宜的色譜提純條件：CO2流速為10 g/min，柱溫為313.15 K，背壓為14 MPa。在此工藝條件下提純制備Z-藁本內(nèi)酯單體，得到的產(chǎn)品純度為98.5%。朱玲玲等[31]對(duì)SFC技術(shù)在天然產(chǎn)物分離分析中的應(yīng)用進(jìn)展進(jìn)行了綜述，指出該技術(shù)在維生素類(lèi)、脂肪酸和甘油酯類(lèi)、生物堿類(lèi)、黃酮類(lèi)、苯丙素類(lèi)、萜類(lèi)化合物等天然產(chǎn)物分離方面均具有很大的優(yōu)勢(shì)，同時(shí)還能低成本、高效率地獲得高純度的單一化合物，大大提高了工作效率。徐永威等[32]綜述了UPC2技術(shù)在中藥研究和質(zhì)量控制中的應(yīng)用，指出UPC2技術(shù)在分析揮發(fā)性成分、熱敏性成分和天然動(dòng)植物油等方面可作為GC技術(shù)的有效互補(bǔ)技術(shù)，在分析天然產(chǎn)物中大極性產(chǎn)物、小極性產(chǎn)物及手性異構(gòu)體方面可以與HPLC技術(shù)有效互補(bǔ)；且此技術(shù)利用選擇性的差異改善了現(xiàn)有HPLC分析方法。同時(shí)該綜述還指出，UPC2技術(shù)可以與HPLC技術(shù)結(jié)合，構(gòu)建2D或3D分析分離平臺(tái)，從而使分離效能進(jìn)一步提高。

不僅制備型SFC技術(shù)在天然產(chǎn)物分析中取得了較大的應(yīng)用進(jìn)展，分析型SFC技術(shù)在天然產(chǎn)物分離中的應(yīng)用也得到了較廣泛的關(guān)注。鄧亮等[33]建立了同時(shí)測(cè)定厚樸中厚樸酚及和厚樸酚成分的SFC方法，厚樸樣品經(jīng)微波提取后直接上機(jī)檢測(cè)，選用Kramasil色譜柱，甲醇為改性劑，背壓為200 bar，柱溫為50 ℃。在此條件下，該法的檢測(cè)限達(dá)到3～4 μg/mL，且對(duì)目標(biāo)化合物分離良好，滿(mǎn)足測(cè)定需求。李振宇等[34]建立了一種對(duì)吳茱萸中吲哚類(lèi)生物堿的SFC快速分析方法，并比較了不同色譜柱、進(jìn)樣體積、改性劑、添加劑、溫度和背壓對(duì)保留行為的影響，指出了進(jìn)樣體積對(duì)峰形影響顯著，降低溫度和升高背壓會(huì)使保留時(shí)間減??；優(yōu)化后采用UPC2 BEH色譜柱，甲醇為改性劑，柱溫為35 ℃，背壓為2.07×107 Pa。在該條件下，全部化合物在15 min內(nèi)完成分離，滿(mǎn)足快速檢測(cè)的需求。王波等[35]基于SFC方法快速測(cè)定了黃芪中5種黃酮類(lèi)化合物，選用UPC2 CSH 柱，甲醇溶液（含0.2% H3PO4）為改性劑，柱溫為40 ℃，僅需15 min即可實(shí)現(xiàn)5種黃酮類(lèi)化合物的基線(xiàn)分離，相比傳統(tǒng)的HPLC方法，分析速度提高3倍以上。王波等[36]還采用UPC2系統(tǒng)快速測(cè)定了中成藥及原料藥中的香豆素，樣品經(jīng)溶劑誘導(dǎo)相變萃取后上機(jī)檢測(cè)，在選定色譜條件下，分析時(shí)間僅為常規(guī)超高效液相色譜（UPLC）系統(tǒng)所需分析時(shí)間的1/4，同時(shí)檢出限、定量限均滿(mǎn)足檢測(cè)需求。

3.2 SFC技術(shù)在代謝組學(xué)研究中的應(yīng)用

代謝組學(xué)是以組群指標(biāo)分析為基礎(chǔ)，以高通量檢測(cè)和數(shù)據(jù)處理為手段，以信息建模與系統(tǒng)整合為目標(biāo)的系統(tǒng)生物學(xué)的一個(gè)分支，在臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域具有較廣闊的應(yīng)用前景。既往在進(jìn)行代謝組學(xué)研究時(shí)，較多采用HPLC或HPLC-MS技術(shù)，但隨著SFC技術(shù)的發(fā)展，其應(yīng)用于代謝組學(xué)的研究也逐漸被報(bào)道，且其譜圖一定程度上能與HPLC譜圖形成互補(bǔ)，共同促進(jìn)一些新生物標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)。

張淑麗等[37]利用UPC2-Q/TOF-MS技術(shù)對(duì)果糖誘導(dǎo)高尿酸血癥大鼠血清脂質(zhì)代謝組學(xué)進(jìn)行了研究，分別通過(guò)該技術(shù)分析高尿酸血癥大鼠和正常大鼠血清代謝譜圖，采用多元統(tǒng)計(jì)分析方法比較兩組的代謝譜圖差異，從而篩選出差異性代謝物。結(jié)果顯示，兩組大鼠代謝譜圖存在明顯差異，并篩選出11個(gè)差異代謝物，利用精確質(zhì)量數(shù)結(jié)合二級(jí)質(zhì)譜圖初步確定了花生四烯酸、棕櫚酸、油酸、亞油酸等8種潛在生物標(biāo)記物。朱健等[38]利用UPC2方法研究了異甜菊醇鈉在大鼠小腸各腸段的吸收特征，試驗(yàn)建立的方法所用分析時(shí)間為7 min，可顯著節(jié)省時(shí)間成本，同時(shí)專(zhuān)屬性較高，靈敏度滿(mǎn)足檢測(cè)需求。

3.3 SFC技術(shù)在維生素分離及測(cè)定中的應(yīng)用

近年來(lái)，采用SFC技術(shù)對(duì)維生素類(lèi)化合物進(jìn)行測(cè)定的方法報(bào)道較多，SFC方法相較于傳統(tǒng)HPLC方法具有分離時(shí)間短、分離效能高等優(yōu)勢(shì)。竹弘等[39]建立了同時(shí)測(cè)定復(fù)合維生素片中4種不同水溶性維生素的SFC方法，樣品經(jīng)碾碎、超聲提取后上機(jī)檢測(cè)，并對(duì)4種不同色譜柱、不同提取溶劑及改性劑的種類(lèi)和濃度等影響因素進(jìn)行了考察，最終選擇Kromasil 60-5 CN色譜柱，0.1%甲醇為改性劑，實(shí)現(xiàn)了對(duì)4種水溶性維生素的良好分離及測(cè)定。該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏度高，較好地滿(mǎn)足了檢測(cè)需求。張春蘭等[40]則建立了測(cè)定維生素復(fù)方制劑中3種水溶性維生素的SFC方法，選用Cyano填充柱，以含有少量二乙胺的甲醇為改性劑。優(yōu)化后的SFC方法不僅分離效能高，而且分析速度快，樣品分析在5 min內(nèi)即可完成，專(zhuān)屬性、重復(fù)性和線(xiàn)性關(guān)系較好，檢測(cè)靈敏度滿(mǎn)足需求。周?chē)萚41]亦建立了同時(shí)測(cè)定11種脂溶性維生素及衍生物的UPC2方法，最終選擇Waters Acquity UPC2 HSS C18 SB為色譜柱，乙腈作為助溶劑，動(dòng)態(tài)背壓為1 900 psi（1 psi=6.895 kPa），柱溫為50 ℃。所建立方法的檢測(cè)限在1.5～2.0 mg/L之間，線(xiàn)性范圍分別為3～300 mg/L，加樣回收率范圍為97.31%～98.76%，可以滿(mǎn)足復(fù)雜基質(zhì)中11種脂溶性維生素及其衍生物的檢測(cè)要求。劉倩倩等[42]采用SFC方法直接測(cè)定橘子、鮮棗、干棗及飲料中的維生素C含量，分別對(duì)色譜柱等因素進(jìn)行考察優(yōu)化，最終選定Waters CSH Fluoro-Phenyl（3.0 mm×100 mm，1.7 μm）為色譜柱，含有0.05% H3PO4的甲醇為改性劑，方法檢測(cè)限達(dá)到1.5 mg/kg。該法具有高效、檢測(cè)速度快、靈敏度高、重復(fù)性好、試驗(yàn)成本低等優(yōu)點(diǎn)。

3.4 SFC技術(shù)在指紋圖譜研究中的應(yīng)用

SFC技術(shù)因其不同于GC和HPLC技術(shù)分離機(jī)制的原因，亦可應(yīng)用于藥物指紋圖譜研究領(lǐng)域，并與GC和HPLC圖譜形成互補(bǔ)，對(duì)更多有效成分進(jìn)行發(fā)掘。朱瑞娟等[43]采用SFC方法建立了補(bǔ)腎健腦顆粒及其組成藥材的指紋圖譜，歸屬分析了補(bǔ)腎健腦顆粒指紋圖譜中的主要色譜峰，并建立β-蛻皮甾酮和松果菊苷的含量測(cè)定方法。該方法能將β-蛻皮甾酮和松果菊苷有效分離，與HPLC和UPLC方法相比，更簡(jiǎn)便、快速，且分離度高、重復(fù)性好。

4 結(jié)語(yǔ)

通過(guò)對(duì)SFC技術(shù)在手性和非手性藥物分析中的應(yīng)用進(jìn)行歸納和總結(jié)，可以發(fā)現(xiàn)SFC因其獨(dú)有的以下優(yōu)勢(shì)在藥物分析中將會(huì)占據(jù)越來(lái)越重要的地位：（1）SFC技術(shù)對(duì)于手性成分的分析相較于HPLC-MS技術(shù)等具有較大優(yōu)勢(shì)，故在進(jìn)行手性化合物拆分時(shí)可考慮作為首選；（2）SFC技術(shù)環(huán)保、綠色，且分離效能高，對(duì)于部分藥物分離時(shí)間顯著縮短，可作為GC和HPLC技術(shù)的有效補(bǔ)充應(yīng)用于更多藥物的常規(guī)分離分析；（3）伴隨著UPC2系統(tǒng)的開(kāi)發(fā)成功，SFC技術(shù)在藥物分析領(lǐng)域的應(yīng)用范圍顯著拓展，且隨著SFC技術(shù)和質(zhì)譜技術(shù)的飛速發(fā)展，今后SFC-MS聯(lián)用技術(shù)在藥物分析領(lǐng)域必將取得更大的研究進(jìn)展。然而，SFC技術(shù)在藥物分析中仍有不足，如對(duì)于強(qiáng)極性化合物的洗脫仍不理想，相關(guān)色譜方法開(kāi)發(fā)仍較少，不能完全滿(mǎn)足各種檢測(cè)需求。

綜上所述，隨著SFC技術(shù)的發(fā)展，越來(lái)越多的學(xué)者專(zhuān)家已認(rèn)可SFC技術(shù)在手性藥物拆分和高通量藥物分離分析中的價(jià)值，快速、高效、靈敏、環(huán)保的SFC及其聯(lián)用技術(shù)給藥物成分的定性與定量分析提供了一條新的思路。相信隨著SFC技術(shù)難題一個(gè)個(gè)的被攻克，將會(huì)有越來(lái)越多的關(guān)于利用SFC技術(shù)進(jìn)行藥物分離分析的研究被發(fā)表。

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（收稿日期：2017-07-17 修回日期：2017-12-11）

（編輯：周 箐）