高山泉 廖延 姜美花 杜鈺 謝冬梅 祝雙華 彭朝權(quán)

【摘要】目的探討小鼠心臟CD51+細(xì)胞的分離培養(yǎng)及體外定向誘導(dǎo)分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞的可行性，為其治療心臟血管內(nèi)皮損傷提供理論依據(jù)。方法取出日齡為7 d的C57 BL/6乳鼠心臟，用流式分選法分選原代細(xì)胞、懸浮培養(yǎng)法培養(yǎng)及純化心臟CD51+細(xì)胞。用內(nèi)皮生長(zhǎng)培養(yǎng)基（EGM2）對(duì)純化和擴(kuò)增后的CD51+細(xì)胞進(jìn)行體外誘導(dǎo)內(nèi)皮分化20 d。誘導(dǎo)后觀察細(xì)胞形態(tài)變化；實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析內(nèi)皮相關(guān)基因CD31、CD34、vWF、VEGFR2及VECadherin的mRNA表達(dá)；細(xì)胞免疫熒光技術(shù)、流式表型分析術(shù)檢測(cè)內(nèi)皮相關(guān)標(biāo)志CD31、VEGFR2及vWF的表達(dá)；測(cè)定細(xì)胞一氧化氮（NO）含量、行體外血管形成實(shí)驗(yàn)以鑒定其功能。結(jié)果誘導(dǎo)內(nèi)皮分化后細(xì)胞變?yōu)槎趟笮?，呈鋪路石樣排列生長(zhǎng)；熒光定量PCR結(jié)果顯示誘導(dǎo)后細(xì)胞CD31、CD34、vWF、VEGFR2、VECadherin的mRNA相對(duì)表達(dá)量較誘導(dǎo)前增加（t值分別為24529、6383、25872、5256、5255，P均<005）；細(xì)胞免疫熒光染色及流式表型分析結(jié)果均顯示誘導(dǎo)后細(xì)胞表達(dá)CD31、VEGFR2及vWF；誘導(dǎo)后細(xì)胞NO含量較誘導(dǎo)前增加（t=9549， P=0011）并具有體外形成管腔樣結(jié)構(gòu)的能力。結(jié)論心臟CD51+細(xì)胞具有在體外定向誘導(dǎo)分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞的能力。

【關(guān)鍵詞】間充質(zhì)干細(xì)胞；CD51；內(nèi)皮細(xì)胞；誘導(dǎo)分化

In vitro induction of differentiation of cardiac CD51+ cells into vascular endothelial cells in mouse modelsGao Shanquan， Liao Yan， Jiang Meihua， Du Yu， Xie Dongmei， Zhu Shuanghua， Peng Chaoquan Department of Cardiovascular， the Third Affiliated Hospital of Sun Yatsen University， Guangzhou 510630， China

Corresponding author， Peng Chaoquan， Email： pengcq123456@163 com

【Abstract】ObjectiveTo investigate the feasibility of isolation， culture and in vitro induction of the differentiation of cardiac CD51+ cells into vascular endothelial cells， aiming to provide theoretical evidence for the treatment of cardiac vascular endothelial injury MethodsThe heart tissues were collected from 7dayold C57 BL/6 mice Primary cells were isolated by flow cytometry and cell sorting The cardiac CD51+ cells were cultured and purified by suspension cell culture method After cell purification and proliferation， the cardiac CD51+ cells were subjected to in vitro induction of differentiation into endothelial cells in endothelial cell growth medium2 （EGM2） for 20 days After in vitro induction， the changes in cell morphology were observed The expression levels of CD31， CD34， vWF， VEGFR2 and VECadherin mRNA were quantitatively measured by realtime fluorescent quantitative PCR The expression levels of CD31， VEGFR2 and vWF were detected by immunofluorescent staining and flow cytometric immunophenotying The level of nitric oxide （NO） was measured and the function of the induced endothelial cells was evaluated by angiogenesis assay in vitro ResultsThe morphology of cardiac CD51+ cells was changed from the longspindle to shortspindle shape and the induced cells grew in a cobblestonelike pattern The results of fluorescent quantitative PCR demonstrated that the relative expression levels of CD31， CD34， vWF， VEGFR2 and VECadherin mRNA were significantly upregulated after induction （t=24529， 6383， 25872， 5256 and 5255， all P<005） Both immunofluorescent staining and flow cytometric immunophenotying revealed that the cells expressed CD31， VEGFR2， and vWF after induction The quantity of NO was considerably increased after induction （t=9549， P=0011） and had the ability to form lumenlike structures in vitro ConclusionCardiac CD51+ cells can be induced to differentiate into vascular endothelial cells in vitro

【Key words】Mesenchymal stem cell；CD51；Endothelial cell；Induced differentiation

AMI仍是當(dāng)今世界范圍內(nèi)的主要健康負(fù)擔(dān)[1]。PCI是目前AMI的主要治療手段，但其存在局限性，主要表現(xiàn)在兩方面：一是其無(wú)法拯救已壞死心肌，難以避免后期心肌病理重構(gòu)及慢性心衰的發(fā)生[2]。二是存在PCI術(shù)后再狹窄的問(wèn)題，雖然PCI的手術(shù)方式不斷改進(jìn)、抗血小板藥物及藥物洗脫支架的普遍運(yùn)用已顯著降低其發(fā)生率，但目前PCI術(shù)后再狹窄的發(fā)生率仍有5%左右[3]。近年來(lái)干細(xì)胞研究為解決AMI上述兩個(gè)臨床問(wèn)題帶來(lái)了新的思路，其中心臟來(lái)源的干細(xì)胞，被認(rèn)為是最有希望治療心血管疾病的干細(xì)胞之一[4]。本課題組前期研究已證明，心臟來(lái)源的CD51+細(xì)胞具有較強(qiáng)的自我更新能力和多向分化能力，具有間充質(zhì)干細(xì)胞特性，CD51可作為心臟干細(xì)胞的標(biāo)志物[5]。移植到AMI小鼠心臟的CD51+細(xì)胞可促進(jìn)心肌梗死后心肌修復(fù)、血管再生及心功能改善[6]。本研究在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步對(duì)心臟CD51+細(xì)胞進(jìn)行研究，通過(guò)體外分離培養(yǎng)小鼠心臟CD51+細(xì)胞，并定向誘導(dǎo)其向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化，探討其分化成內(nèi)皮細(xì)胞的可行性，為其進(jìn)一步修復(fù)血管內(nèi)皮損傷、治療PCI術(shù)后再狹窄提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

材料與方法

一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

無(wú)特定病原體C57 BL/6乳鼠10只，雌雄不限，日齡為7 d，購(gòu)自中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，實(shí)驗(yàn)過(guò)程符合倫理學(xué)規(guī)定。

二、主要試劑及儀器

DMEM/F12培養(yǎng)基（Gibco），IMDM培養(yǎng)基（Thermo），B27、EGF、bFGF、β巰基乙醇、L谷氨酰胺（Sigma），CT1（R&D），青鏈霉素、胎牛血清、DNA酶I、胰蛋白酶（Gibco），Ⅱ型膠原酶（Sigma），EGM2培養(yǎng)基（Lonza）：包含EBM2基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、人表皮生長(zhǎng)因子（hEGF）、R3胰島素樣生長(zhǎng)因子1（R3IGF1）、抗壞血酸、氫化可的松、人成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子β（hFGFβ）、2%胎牛血清、慶大霉素/兩性霉素B，流式抗體PECD51、APCCD31（eBioscience）、APCVEGFR2（Thermo），逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（Thermo），4%多聚甲醛（博士德生物），抗小鼠一抗：CD31一抗、vWF一抗、VEGFR2一抗（Abcam），熒光二抗：594抗大鼠、抗兔、抗綿羊IgG抗體（Thermo），一氧化氮（NO）檢測(cè)試劑盒（碧云天生物），BCA蛋白定量試劑盒（Thermo），基質(zhì)膠（Corning）。

超凈工作臺(tái)（NUAIR），自控式CO2恒溫培養(yǎng)箱（NUAIR），相差倒置顯微鏡（Olymus），倒置熒光顯微鏡（Leica），流式細(xì)胞分選儀（BDInflux），分析型流式細(xì)胞儀（Beckman），實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)（Roche），超微量紫外、可見(jiàn)光分光光度計(jì)（Nanodrop）。

三、實(shí)驗(yàn)方法

1小鼠心臟CD51+細(xì)胞的分選

將7 d大的C57 BL/6小鼠斷頸處死后取心臟并將其剪碎，加入Ⅱ型膠原酶和DNA酶Ⅰ，組織細(xì)胞勻漿儀將其制成細(xì)胞懸液，1 100 r/min離心4 min， HBSS沖洗、離心、過(guò)濾、重懸，將其濃度調(diào)整為1×108/ml，加入抗小鼠PE CD51（1∶20）流式抗體，4℃避光孵育30 min，清洗后1 100 r/min離心4 min、重懸后用流式細(xì)胞分選儀收集CD51+細(xì)胞。

2小鼠心臟CD51+細(xì)胞的體外培養(yǎng)與擴(kuò)增

用心臟干細(xì)胞培養(yǎng)基，配方：以65∶35將 DMEM/F12培養(yǎng)基和IMDM培養(yǎng)基混合，再加入2% B27、4 ng/ml CT1、10 μg/ml EGF、160 μg/ml bFGF、1%谷氨酰胺、01 mmol/L β巰基乙醇、1%青鏈霉素。置CO2溫箱中培養(yǎng)，2至3 d換液1次，025%胰蛋白酶（含002% EDTA）消化傳代。

3體外誘導(dǎo)小鼠心臟CD51+細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化

取純化后第3代心臟CD51+細(xì)胞，換用EGM2培養(yǎng)基培養(yǎng)，隔日半量換液，誘導(dǎo)培養(yǎng)20 d后備用。

4細(xì)胞RNA提取、逆轉(zhuǎn)錄及實(shí)時(shí)熒光定量PCR

細(xì)胞加入1 ml Trizol吹打后移入新EP管，加入200 μl氯仿，劇烈震蕩15 s后室溫放置2～3 min；4 ℃ 12 000 r/min離心15 min，吸取上層液移進(jìn)新EP管，加入500 μl異丙醇，混勻后室溫放置10 min；4 ℃ 12 000 r/min離心10 min；沉淀加無(wú)水乙醇洗滌、晾干后用DEPC水溶解，測(cè)定RNA濃度。逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA。后行熒光定量PCR。引物序列見(jiàn)表1。循環(huán)程序?yàn)椋?5 ℃ 5 min預(yù)變性，95 ℃ 30 s進(jìn)行40個(gè)循環(huán)，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s并收集熒光信號(hào)。

6細(xì)胞內(nèi)皮相關(guān)標(biāo)志的流式免疫表型分析

細(xì)胞消化后分3組，前2組分別加入APC標(biāo)記的CD31、 VEGFR2流式抗體，4℃避光孵育40 min，PBS洗3次，并做空白對(duì)照。第3組細(xì)胞先用01% tritonX100穿透10 min后，再加入vWF一抗，孵育40 min，PBS洗3次后加入熒光二抗，避光孵育30 min，PBS洗3次，并做陰性對(duì)照。最后用流式細(xì)胞分析儀檢測(cè)。

7細(xì)胞的NO含量測(cè)定

采用Griess法測(cè)定細(xì)胞NO含量，利用亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸作用生成的不穩(wěn)定的化合物再與α萘胺作用生成紅色偶氮化合物，然后測(cè)定其540 nm波長(zhǎng)下的吸光度，最后通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線及蛋白濃度定量，得出細(xì)胞NO含量。采用碧云天NO檢測(cè)試劑盒，按說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行操作。

8細(xì)胞的體外成管實(shí)驗(yàn)

基質(zhì)膠4 ℃溶解并預(yù)冷96孔板、槍頭，第二日冰上操作：96孔板每孔加入50 μl基質(zhì)膠（過(guò)程避免氣泡），置于溫箱30 min，期間消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)，調(diào)整濃度為2×106～3×106個(gè)/ml，隨后每孔加50 μl細(xì)胞懸液（濃度為1×104～15×104個(gè)/ml），置CO2溫箱中培養(yǎng)4～6 h，倒置顯微鏡下觀察并拍照。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 130進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。定量數(shù)據(jù)以±s表示，采用配對(duì)t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。P<005為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

一、小鼠心臟CD51+細(xì)胞的生長(zhǎng)特性

在不含F(xiàn)BS的心臟干細(xì)胞培養(yǎng)基中，小鼠心臟CD51+細(xì)胞為大小不一的圓形，胞體折光性強(qiáng)，呈懸浮生長(zhǎng)，并可見(jiàn)聚集成球現(xiàn)象。加入2% FBS后出現(xiàn)貼壁現(xiàn)象，細(xì)胞體積變大，形態(tài)變?yōu)楸馄綘铋L(zhǎng)梭形，折光性逐漸減弱，并可見(jiàn)渦旋狀生長(zhǎng)，見(jiàn)圖1。

二、小鼠心臟CD51+細(xì)胞誘導(dǎo)內(nèi)皮分化后的細(xì)胞生長(zhǎng)特性

誘導(dǎo)內(nèi)皮分化后，小鼠心臟CD51+細(xì)胞形態(tài)逐漸變化，表現(xiàn)為胞體逐漸收縮變短，由長(zhǎng)梭形變?yōu)槎趟笮位虮馄蕉嘟切?，并排列成鋪路石樣，?xì)胞邊界清楚，表現(xiàn)出典型的內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)，見(jiàn)圖2。

三、細(xì)胞誘導(dǎo)內(nèi)皮分化后內(nèi)皮相關(guān)基因的mRNA相對(duì)表達(dá)量增加

熒光定量PCR結(jié)果顯示，細(xì)胞誘導(dǎo)內(nèi)皮分化后與誘導(dǎo)前相比，CD31（t=24529， P=0002）、CD34（t=6383， P=0024）、vWF（t=25872， P=0001）、VEGRR2（t=5256， P=0034）、VECadherin（t=5255， P=0034）的mRNA相對(duì)表達(dá)量均增加，見(jiàn)圖3。

五、流式鑒定顯示誘導(dǎo)內(nèi)皮分化后細(xì)胞表型發(fā)生內(nèi)皮化改變

流式檢測(cè)結(jié)果顯示，誘導(dǎo)內(nèi)皮分化后細(xì)胞表型發(fā)生變化，與誘導(dǎo)前相比，表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志CD31、VEGFR2、vWF的細(xì)胞比例明顯增加，見(jiàn)圖5。

六、誘導(dǎo)內(nèi)皮分化后細(xì)胞的NO含量增加

結(jié)果顯示，誘導(dǎo)內(nèi)皮分化后細(xì)胞的NO含量增加（t=9549，P=0011），是誘導(dǎo)前的近3倍，見(jiàn)圖6。

七、誘導(dǎo)內(nèi)皮分化后細(xì)胞具有體外血管形成能力

誘導(dǎo)內(nèi)皮分化后的細(xì)胞接種于基質(zhì)膠后，細(xì)胞逐漸貼壁黏附，向四周發(fā)散生長(zhǎng)并逐漸形成分散的網(wǎng)狀，4～6 h后可形成閉合的多邊形管腔樣結(jié)構(gòu)；誘導(dǎo)前細(xì)胞無(wú)形成官腔樣結(jié)構(gòu)的能力，見(jiàn)圖7。

圖4小鼠心臟CD51+細(xì)胞誘導(dǎo)內(nèi)皮分化后的內(nèi)皮相關(guān)標(biāo)志的免疫熒光染色（×200）

A：CD31；B：VEGFR2；C：vWF

圖5流式檢測(cè)分析小鼠心臟CD51+細(xì)胞誘導(dǎo)內(nèi)皮分化前后的內(nèi)皮相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá)

A：CD31；B：VEGFR2；C：vWF；紅色：誘導(dǎo)前；綠色：誘導(dǎo)后

圖6小鼠心臟CD51+細(xì)胞誘導(dǎo)內(nèi)皮分化

前后的NO相對(duì)含量比較

*P<005

討論

目前，PCI術(shù)后再狹窄仍是無(wú)法避免且影響遠(yuǎn)期療效的重要并發(fā)癥，可導(dǎo)致心絞痛復(fù)發(fā)甚至急性冠脈綜合征，需要再次血運(yùn)重建。作為一項(xiàng)微創(chuàng)操作，PCI術(shù)中導(dǎo)絲、球囊、支架等都可能會(huì)不可避免地對(duì)血管造成牽拉、擠壓甚至撕裂等損傷，從而導(dǎo)致血管內(nèi)皮層受到損傷[7]。研究表明，內(nèi)皮損傷后，如果不能盡快恢復(fù)內(nèi)皮的完整性，中膜平滑肌則會(huì)開(kāi)始增殖，形成細(xì)胞外基質(zhì)并向內(nèi)膜遷移覆蓋，加上機(jī)械性損傷、異物支架的植入會(huì)激活炎癥反應(yīng)及血管活性物質(zhì)從而導(dǎo)致血小板聚集、血栓形成，最終共同導(dǎo)致PCI術(shù)后再狹窄的發(fā)生[814]?？梢?jiàn)，再狹窄發(fā)生的核心環(huán)節(jié)是血管內(nèi)皮層的損傷。因此，支架植入后加速受損內(nèi)膜的再內(nèi)皮化修復(fù)是從根本上降低術(shù)后再狹窄發(fā)生率的有效手段。

近年來(lái)干細(xì)胞治療為解決上述臨床問(wèn)題帶來(lái)了新的思路，目前關(guān)于再狹窄的細(xì)胞治療，研究較多的是內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPCs）和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）。雖然有報(bào)道稱(chēng)它們對(duì)促進(jìn)內(nèi)膜修復(fù)有積極作用，但目前仍有許多不確定因素和爭(zhēng)議，如EPCs缺乏表面特異性標(biāo)志物，其動(dòng)員、分化、歸巢的信號(hào)通路及參與其中的細(xì)胞因子尚不明確；非選擇性骨髓MSCs不僅會(huì)促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖，還可促進(jìn)平滑肌增殖，可能反而促進(jìn)再狹窄的發(fā)生[1517]。研究顯示，腎臟、心臟等多種臟器、組織中存在的MSCs，不但同樣有損傷修復(fù)能力，而且對(duì)其來(lái)源的特定臟器、組織的損傷修復(fù)能力可能要優(yōu)于骨髓來(lái)源的MSCs[18]。同時(shí)由于心臟和血管在胚胎發(fā)育時(shí)共同起源于中胚層，所以心臟來(lái)源的干細(xì)胞，目前被認(rèn)為是最有希望治療心血管疾病的

圖7小鼠心臟CD51+細(xì)胞誘導(dǎo)內(nèi)皮分化前后的體外血管形成能力比較（×50）

A：誘導(dǎo)前；B：誘導(dǎo)后干細(xì)胞之一。但目前心臟干細(xì)胞尚沒(méi)有統(tǒng)一、明確的表面標(biāo)記物[19]。因此，尋找其特異的表面標(biāo)記物，并證明其對(duì)心功能及內(nèi)皮損傷的修復(fù)作用具有重要意義。CD51又稱(chēng)為整合素蛋白αV，其對(duì)胚胎器官生成、血管生成等過(guò)程起重要的調(diào)節(jié)作用[20]。本課題組前期研究已證明，心臟來(lái)源的CD51+細(xì)胞具有較強(qiáng)的自我更新能力和多向分化能力，具有間充質(zhì)干細(xì)胞特性。移植到AMI小鼠心臟的CD51+細(xì)胞可分化為成熟心肌細(xì)胞，并促進(jìn)梗死區(qū)周邊血管再生，從而促進(jìn)心梗后心功能改善。因此，本研究采用心臟CD51+細(xì)胞作為誘導(dǎo)內(nèi)皮分化的種子細(xì)胞，探討其誘導(dǎo)分化為內(nèi)皮細(xì)胞的潛力，以期為治療PCI術(shù)后再狹窄提供新的思路和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

雖然目前干細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)分化的機(jī)制尚未清楚，誘導(dǎo)的條件也不盡相同，但誘導(dǎo)因子中均含有VEGF，即模擬體內(nèi)內(nèi)皮細(xì)胞分化的微環(huán)境，促進(jìn)內(nèi)皮基因的開(kāi)放和表達(dá)，從而完成向內(nèi)皮細(xì)胞的誘導(dǎo)分化。本實(shí)驗(yàn)在Kuwana等[21]的誘導(dǎo)方法基礎(chǔ)上進(jìn)一步改進(jìn)，用包含VEGF、hEGF、R3IGF1、hFGFβ等多種因子的EGM2培養(yǎng)基對(duì)小鼠心臟CD51+細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)后細(xì)胞形態(tài)逐漸變?yōu)殇伮肥瘶优帕械牡湫蛢?nèi)皮細(xì)胞形態(tài)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR證明誘導(dǎo)后細(xì)胞的內(nèi)皮相關(guān)基因的mRNA表達(dá)量顯著增加，免疫熒光染色、流式表型分析結(jié)果均顯示誘導(dǎo)后細(xì)胞表達(dá)內(nèi)皮特異性標(biāo)志物，其中除成熟內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)志CD31、vWF顯著增加外，VEGFR2、VECadherin、CD34也明顯增加。VEGFR2是內(nèi)皮細(xì)胞重要的增殖性標(biāo)志物，其可維持內(nèi)皮細(xì)胞存活、促進(jìn)其增殖、阻止其凋亡，進(jìn)而加快內(nèi)膜的內(nèi)皮化，使內(nèi)膜屏障功能得以盡快恢復(fù)[22]。VECadherin即血管內(nèi)皮鈣黏蛋白，對(duì)維持內(nèi)皮細(xì)胞極性和血管完整性起重要作用[23]。CD34多表達(dá)于血管新生旺盛的組織中，對(duì)血管新生、維持內(nèi)皮細(xì)胞單層結(jié)構(gòu)有重要作用。這些結(jié)果不僅證明了誘導(dǎo)后細(xì)胞具有內(nèi)皮細(xì)胞特征，還說(shuō)明誘導(dǎo)后細(xì)胞將有利于損傷血管內(nèi)膜屏障的修復(fù)。另外，有功能的成熟內(nèi)皮細(xì)胞的重要特征是合成NO、可在基質(zhì)膠上黏附、遷移并最終形成管腔樣結(jié)構(gòu)。本研究采用細(xì)胞NO含量測(cè)定及基質(zhì)膠成管實(shí)驗(yàn)，均進(jìn)一步證明了誘導(dǎo)后細(xì)胞初步具有血管內(nèi)皮細(xì)胞的生物學(xué)功能活性。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)從多方面證實(shí)了心臟來(lái)源的CD51+細(xì)胞具有向內(nèi)皮細(xì)胞分化的潛能，這就為下一步開(kāi)展動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探討其修復(fù)內(nèi)皮損傷的能力提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，也為臨床治療PCI術(shù)后再狹窄提供了新的思路和細(xì)胞來(lái)源。

參考文獻(xiàn)

[1]Go AS， Mozaffarian D， Roger VL， Benjamin EJ， Berry JD， Borden WB， Bravata DM， Dai S， Ford ES， Fox CS， Franco S， Fullerton HJ， Gillespie C， Hailpern SM， Heit JA， Howard VJ， Huffman MD， Kissela BM， Kittner SJ， Lackland DT， Lichtman JH， Lisabeth LD， Magid D， Marcus GM， Marelli A， Matchar DB， McGuire DK， Mohler ER， Moy CS， Mussolino ME， Nichol G， Paynter NP， Schreiner PJ， Sorlie PD， Stein J， Turan TN， Virani SS， Wong ND， Woo D， Turner MB； American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee Executive summary： heart disease and stroke statistics——2013 update： a report from the American Heart Association Circulation， 2013，127（1）：143152

[2]Haeck ML， Hoogslag GE， Rodrigo SF， Atsma DE， Klautz RJ， van der Wall EE， Schalij MJ， Verwey HF Treatment options in endstage heart failure： where to go from here？ Neth Heart J，2012，20（4）：167175

[3]Bulum J， Ernst A， Strozzi M The impact of successful manual thrombus aspiration on instent restenosis after primary PCI： angiographic and clinical followup Coron Artery Dis，2012，23（7）：487491

[4]Andersen DC， Andersen P， Schneider M，Jensen HB， Sheikh SP Murine “cardiospheres” are not a source of stem cells with cardiomyogenic potentialStem Cells，2009，27（7）：15711581

[5]陳陽(yáng)，李桂蘭，姜美花，彭朝權(quán) 小鼠心源性CD51陽(yáng)性細(xì)胞的分離與鑒定 中山大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)科學(xué)版），2014，35（3）：424430

[6]林婉文，楊珂，廖延，姜美花，彭朝權(quán) CD51陽(yáng)性心肌細(xì)胞對(duì)心肌梗死后小鼠心功能改善的作用 新醫(yī)學(xué)，2015，46（6）：350355

[7]王正東，李平，林智海，甘劍挺 血管損傷及PCI術(shù)后再狹窄機(jī)制的研究進(jìn)展和相應(yīng)對(duì)策 醫(yī)學(xué)綜述，2016，22（2）：280283

[8]Kwon JS， Kim YS， Cho AS， Kim JS， Jeong SY， Hong MH， Jeong MH， Ahn Y Origin of restenosis after drugeluting stent implantation in hyperglycemia is inflammatory cells and thrombus J Atheroscler Thromb， 2011，18（7）：604615

[9]Perkins LE Preclinical models of restenosis and their application in the evaluation of drugeluting stent systemsVet Pathol，2010，47（1）：5876

[10]Guerra E， Byrne RA， Kastrati A Pharmacological inhibition of coronary restenosis： systemic and local approaches Expert Opin Pharmacother，2014，15（15）：21552171

[11]Lupi A， Secco GG， Rognoni A， Rossi L， Lazzero M， Nardi F， Rolla R， Bellomo G， Bongo AS， Di Mario C Plasma fibrinogen levels and restenosis after primary percutaneous coronary intervention J Thromb Thrombolysis，2012，33（4）：308317

[12]Gutman D， Golomb G Liposomal alendronate for the treatment of restenosis J Control Release，2012，161（2）：619627

[13]Chaabane C， Otsuka F， Virmani R， BochatonPiallat ML Biological responses in stented arteriesCardiovasc Res，2013，99（2）：353363

[14]Cassese S， Byrne RA， Tada T， Pinieck S， Joner M， Ibrahim T， King LA， Fusaro M， Laugwitz KL， Kastrati A Incidence and predictors of restenosis after coronary stenting in 10 004 patients with surveillance angiographyHeart，2014，100（2）：153159

[15]沈根，張順，葉紅華 他汀類(lèi)藥物對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞作用的研究進(jìn)展 新醫(yī)學(xué)，2015，46（12）：789793

[16]孫文博，王賀，司春嬰，解金紅，陳玉善，柴爽爽，關(guān)懷敏 內(nèi)皮祖細(xì)胞對(duì)藥物洗脫支架置入術(shù)后再狹窄及再內(nèi)皮化影響的研究進(jìn)展 中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2016，13（24）：5457

[17]Liao J， Chen X， Li Y，Ge Z， Duan H， Zou Y， Ge J Transfer of bonemarrowderived mesenchymal stem cells influences vascular remodeling and calcification after balloon injury in hyperlipidemic rats J Biomed Biotechnol，2012，2012：165296

[18]Fuchs E， Tumbar T， Guasch G Socializing with the neighbors： stem cells and their niche Cell，2004，116（6）：769778

[19]Beltrami AP， Barlucchi L， Torella D， Baker M， Limana F， Chimenti S， Kasahara H， Rota M， Musso E， Urbanek K， Leri A， Kajstura J， NadalGinard B， Anversa P Adult cardiac stem cells are multipotent and support myocardial regeneration Cell，2003，114（6）：763776

[20]Sheppard D Roles of alphav integrins in vascular biology and pulmonary pathologyCurr Opin Cell Biol，2004，16（5）：552557

[21]Kuwana M， Okazaki Y， Kodama H， Satoh T， Kawakami Y， Ikeda Y Endothelial differentiation potential of human monocytederived multipotential cellsStem Cells，2006，24（12）：27332743

[22]胡慶松，聶如瓊 血管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物研究進(jìn)展 嶺南心血管病雜志，2012，18（2）：196 201

[23]Vestweber D VEcadherin： the major endothelial adhesion molecule controlling cellular junctions and blood vessel formationArterioscler Thromb Vasc Biol，2008，28（2）：223232

（收稿日期：20180108）

（本文編輯：楊江瑜）