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豬瘟病毒微生物學(xué)檢測技術(shù)研究進(jìn)展

2018-11-13 12:03:04趙嘉寧
新一代 2018年13期
關(guān)鍵詞:檢測技術(shù)生物學(xué)

趙嘉寧

摘 要:關(guān)于豬瘟,主要是由豬瘟病毒所引起的具有高度接觸性的傳染病,且具有較高的死亡率,因而受到各國對該病毒的關(guān)注。而本文主要就針對豬瘟病毒微生物學(xué)檢測技術(shù)進(jìn)行重點(diǎn)探討和分析,以期能夠更好的保證有關(guān)豬瘟防控工作的有序進(jìn)行。

關(guān)鍵詞:豬瘟病毒;生物學(xué);檢測技術(shù)

因豬瘟是由該病毒所引發(fā)的高傳染性疾病,且在流行范圍較廣,如果得不到及時的遏制,勢必會給養(yǎng)豬業(yè)帶來嚴(yán)重的影響。在這種形勢下,則需要有關(guān)部門加強(qiáng)對相關(guān)檢測技術(shù)的研究和應(yīng)用,以此能夠?qū)υ摬《咀龊孟鄳?yīng)的防控工作,減少病毒感染對社會經(jīng)濟(jì)發(fā)展所產(chǎn)生的影響

一、豬瘟病毒基因結(jié)構(gòu)及功能

(一)豬瘟病毒的基本特征。結(jié)合相關(guān)調(diào)查表明,豬瘟病毒屬于黃病毒科,還包含其它病毒,即,能牛病毒性腹瀉病毒、羊邊界病病毒[1]。因這三種病毒在各方面具有較為密切的聯(lián)系,一旦感染其中一個病毒,則會在對其他病毒產(chǎn)生不同程度的交叉保護(hù)反應(yīng)。另外,豬瘟病毒還可在多個細(xì)胞中生長繁殖,如豬胚、乳豬啤、腎等。

(二)豬瘟病毒基因組。在這方面,能夠發(fā)現(xiàn)有關(guān)豬瘟病毒的基因組基本上是由三個部分所組成的,分別是5,非編碼區(qū)(5,UTR)、編碼區(qū)(TR)以及3,非編碼區(qū)(3,UTR)。在這其中,基因組的5,沒有甲基化帽狀結(jié)構(gòu),且在3,也缺少Poly(A)結(jié)構(gòu)。因而在翻譯相關(guān)起始機(jī)制上與常見的真核生物中的mRNA是不同的。這就需要相關(guān)人員在豬瘟研究工作中注重這方面。

二、關(guān)于豬瘟病毒微生物學(xué)檢測技術(shù)

(一)聚合酶鏈反應(yīng)檢測技術(shù)

1.反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)。對于反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)的出現(xiàn),已經(jīng)逐漸應(yīng)用在豬瘟病毒的實(shí)驗(yàn)室檢測中。該技術(shù)的使用,能夠?qū)ωi病中所存在的多種病原進(jìn)行有效區(qū)分,具體就有:口蹄疫病毒、豬細(xì)小病毒以及豬繁殖與呼吸綜合征病毒等[2]。在過去所使用的PCR技術(shù)與常規(guī)實(shí)施診斷方法相比,雖然在方式上更為簡單,但是在當(dāng)前分子生物學(xué)檢測技術(shù)的快速發(fā)展趨勢下,該技術(shù)在應(yīng)用過程中所存在的問題也開始凸顯出來。

2.多重RT-PCR。通過對RT-PCR的改進(jìn)和創(chuàng)新后,已經(jīng)發(fā)展出多重RT-PCR。這種技術(shù)的應(yīng)用,能夠?qū)ωi體內(nèi)中所帶有的各種病原體予以快速檢測。由此可見,多重RT-PCR作為快速且高速的實(shí)驗(yàn)室檢測手段,只需要進(jìn)行一次試驗(yàn)工作就能夠?qū)Χ喾N病毒進(jìn)行有效檢測,進(jìn)而為相關(guān)人員在病原檢測上提供極大的便利。但是在實(shí)際應(yīng)用過程中,這種方法對各方面的要求比較高,特別是對引物設(shè)計這方面的要求,十分嚴(yán)格。這是因病毒檢測種類越多,則就需應(yīng)用較多的引物設(shè)計,因而在此環(huán)節(jié)中,很容易出現(xiàn)失誤,導(dǎo)致擴(kuò)增片段的長度會受到不同程度的限制。在這種情況下,在這種方法應(yīng)用上,最多可對2-3種病原進(jìn)行檢測,如果檢測到4種及以上病原時,是會在一定程度上影響該方式檢測的靈敏度。

3.套式RT-PCR。關(guān)于套式RT-PCR,又被稱為巢式PCR。主要作用就是對豬瘟病毒進(jìn)行檢測以及對豬瘟病毒與其他病毒進(jìn)行有效區(qū)別。另外,其所具有的敏感度要高于比較常見的PT-PCR,且所具有的特異性也相對較高。在該技術(shù)中,可通過對抗原-ELLSA和RT-nPCR 這幾種實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)進(jìn)行深入比較,能夠清楚的發(fā)現(xiàn),RT-nPCR更加具有優(yōu)越性。同時也是檢測豬瘟病毒感染的最重要方法。

4.熒光定量RT-PCR技術(shù)。結(jié)合實(shí)際發(fā)現(xiàn),當(dāng)前所使用的水解探針模式中的Re-al-time RT–PCR,在檢測豬瘟病毒中得到較好的應(yīng)用。但是在使中所呈現(xiàn)出的假陰性結(jié)果,則會在內(nèi)一定程度上凸顯出其所存在的不足[3]。這種情況的出現(xiàn),主要是因探針的結(jié)合點(diǎn)明顯出現(xiàn)突變,進(jìn)而會對接下來的檢測造成干擾。在這種現(xiàn)象下,基于其他相關(guān)檢測模式下,如引物探針能量轉(zhuǎn)移等也會受到干擾。

綜合來說,熒光定量PCR既能夠?qū)悠愤M(jìn)行較好的定量檢測,同時還具有較強(qiáng)的特異性,進(jìn)而保障結(jié)果準(zhǔn)確。

(二)DNA芯片技術(shù)。關(guān)于DNA芯片技術(shù),作為現(xiàn)代化基因診斷技術(shù),在實(shí)際應(yīng)用中具有較多的優(yōu)勢,如高效、敏感以及自動化等。比如,在Gladue DP,則就可借助DNA芯片技術(shù),來檢測豬細(xì)胞中所出現(xiàn)的基因模式以及體外感染豬病毒強(qiáng)株后發(fā)生的反應(yīng),進(jìn)而幫助相關(guān)人員對這些基因與先天免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)機(jī)制所存在的聯(lián)系。另外,相關(guān)人員能夠利用DNA芯片技術(shù),進(jìn)一步檢測豬瘟病毒。以此能夠在最大程度上保障檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

綜合上述,在生物學(xué)檢測技術(shù)的不斷發(fā)展下,極大的提高我國對豬瘟病毒分子生物學(xué)的檢測技術(shù)水平。通過本文對豬瘟病毒微生物學(xué)檢測技術(shù)深入分析后,現(xiàn)階段所使用的豬瘟病毒分子生學(xué)物檢測技術(shù),除了傳統(tǒng)的RT-PCR技術(shù)之外,還可根據(jù)實(shí)際需要,使用套式RT-PCR、反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)、熒光定量RT-PCR技術(shù)、DNA芯片技術(shù)等。這些檢測技術(shù)在應(yīng)用上都具有自己的優(yōu)缺點(diǎn),因而相關(guān)人員在使用這些檢測方法上,則可將這些方式進(jìn)行適當(dāng)?shù)慕Y(jié)合,以此能夠達(dá)到取長補(bǔ)短的效果。隨著近幾年我國在分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展,促使豬瘟病毒技術(shù)在實(shí)際應(yīng)用中具有更高的靈敏度,推動相關(guān)部門對豬瘟監(jiān)測工作的有序開展,滿足當(dāng)前社會發(fā)展對這方面的要求。

參考文獻(xiàn):

[1]褚建軍.豬瘟病的防治新方法[J].吉林農(nóng)業(yè),2018(08):72.

[2]陳景容.不同豬瘟病毒株在ST細(xì)胞上的增殖研究[J].福建畜牧獸醫(yī),2017,39(03):9-11.

[3]吳艷萍.當(dāng)前豬瘟病的特點(diǎn)及免疫失敗原因分析[J].中國動物保健,2016,18(12):3-4.

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