陳天朝 賈晴晴 李瑞穎 馬彥江 王嬌 程思卿

摘要：目的? 探究清炒炮制對山藥物性參數(shù)、主要成分及指標性成分動態(tài)變化的影響。方法? 以山藥清炒炮制品為研究對象，測定物性參數(shù)，采用紫外分光光度法及HPLC測定不同炮制品中淀粉、多糖及尿囊素含量，運用SPSS22.0軟件對清炒工藝、物性參數(shù)及主要成分含量進行差異性及相關性分析。結果? 山藥不同清炒炮制品物性參數(shù)有顯著差異（P<0.05），氧化值與總淀粉含量呈顯著負相關，吸水率與多糖含量呈顯著正相關;清炒炮制后山藥總淀粉含量降低，多糖含量升高，尿囊素消失，有新物質產(chǎn)生。結論? 山藥清炒炮制后物料性質、主要成分、指標性成分變化顯著;清炒工藝、物性參數(shù)與主要成分間相互影響;指標性成分尿囊素與新物質、淀粉與多糖之間可能存在相互轉化。

關鍵詞：山藥;清炒炮制;物料性質;含量測定;相關性

中圖分類號：R283.1? ? 文獻標識碼：A? ? 文章編號：1005-5304（2019）04-0091-05

山藥始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，生用以滋陰為主，補脾多炒用。山藥主要含有大分子及小分子兩類化學成分，大分子成分以淀粉、多糖為主，小分子成分以

尿囊素等為主[1]。山藥炮制方法主要有麩炒、清炒、土炒及膨化法等[2]，其中清炒法是最直接的加熱處理工藝，包括炒黃、炒焦及炒炭。目前對山藥飲片的炮制多憑形態(tài)、色澤、質地及氣味等傳統(tǒng)經(jīng)驗判斷，有明顯的主觀性和隨意性，難以保證炮制品質量的穩(wěn)定性[3]。中藥經(jīng)清炒炮制后內(nèi)部分子結構產(chǎn)生變化[4]，其化學成分、性味、藥理作用和功能主治等均發(fā)生不同程度改變，而物理化學性質是飲片性狀鑒別中反映形、色、氣、味、質等的內(nèi)在因素，在對同一中藥不同炮制品炮制程度及質量的衡量中尤為重要。本研究制備山藥清炒炮制品并對炮制前后物性參數(shù)[5-6]及成分含量進行測定，從大分子及小分子層面探討清炒炮制對山藥性質的影響，為山藥清炒工藝自動化、炮制品鑒別和臨床應用等提供基礎及依據(jù)。

1? 儀器與試藥

UliMate3000高效液相色譜儀（美國賽默飛公司），Thermo Evolution 201紫外可見光分光光度計（美國賽默飛公司），BSA224S-CW電子天平（德國賽多利斯公司），LXJ-ⅡB飛鴿臺式離心機（上海安亭科學儀器廠），GZX-9146MBE電熱鼓風干燥箱（上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠），F(xiàn)W-500高速萬能粉碎機（北京科偉永興儀器有限公司）。

山藥生品（河南中一公司，批號1710201）;直鏈淀粉對照品（上海源葉生物科技有限公司，批號J11D8N50350），支鏈淀粉對照品（上海源葉生物科技有限公司，批號K01DY49573），D（+）-無水葡萄糖（上海源葉生物科技有限公司，批號S08J6G1），尿囊素對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號111501- 200202，純度≥98%），正丁醇（分析純，天津市永大化學有限公司），乙腈（色譜純，Sigma試劑有限公司）。

2? 方法與結果

2.1? 山藥不同炮制品的制備

采用多層次試驗設計法，以烘箱加熱炮制，并邀請朱清山（河南省非物質文化遺產(chǎn)傳承人，國家級老藥工）、陳天朝（河南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院藥學部，主任藥師）、王宏賢（河南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院藥學部，副主任藥師）等經(jīng)驗豐富的河南省炮制專家進行德爾菲評價及鑒定，確定山藥炒黃、炒焦、炒炭最佳炮制工藝，結果見表1?；趦?yōu)選工藝并參考2015年版《中華人民共和國藥典》（四部）0213炮制通則中炒黃、炒焦、炒炭相關項下要求，制備炒山藥、焦山藥、山藥炭標準飲片。

2.2? 物性參數(shù)確定

物性是指物質固有的物理和化學屬性，可通過形、色、氣、味、質對中藥物料進行評價。美拉德反應表明，中藥飲片炮制過程中伴隨著氧化值的變化[7-8]，而中藥物料的內(nèi)部結構、對水中氫離子電離作用、氣味、成分等也發(fā)生不同程度改變。故綜合選擇吸水率、pH值、氧化值、膨脹度[9]作為山藥的物性參數(shù)，考察清炒炮制對物性指標的影響，形成山藥物料性質的數(shù)字化表征。

2.2.1? 物料的制備

分別稱取適量山藥、炒山藥、焦山藥、山藥炭標準飲片，干燥粉碎，過5號篩，備用。

2.2.2? 氧化值測定

精密稱定約1.00 g物料細粉（記為M1），置于500 mL圓底燒瓶中，加水混勻，蒸餾，收集餾分。移取蒸餾液于滴定瓶內(nèi)（記為V），加入硫酸5 mL和0.002 mol/L高錳酸鉀溶液10 mL，振蕩均勻。加10%碘化鉀溶液5 mL，滴加0.02 mol/L硫代硫酸鈉（Na2S2O3）標準溶液，當溶液顏色由深黃變?yōu)闇\黃色時，加淀粉指示劑1 mL，繼續(xù)滴加Na2S2O3標準溶液至無色，記錄消耗Na2S2O3標準溶液體積（A，mL）。另以物料細粉相同質量的水代替樣品重復上述操作，進行空白試驗，記錄消耗Na2S2O3標準溶液的體積（B，mL）。氧化值=（B-A）×0.02×200÷（5×0.002×V×M1）。

2.2.3? 吸水率測定

將濾紙放入漏斗內(nèi)，置于盛有純化水的恒溫恒濕干燥器內(nèi)飽和，靜置，稱定質量（記為M2），精密稱取約1.00 g物料細粉（記為M0），置于濾紙中，加入適量純化水，靜置，過濾，同法準確稱定物料細粉濾紙質量（記為M3）。平行測定3次，計算平均值。吸水率=（M3-M2）÷M0。

2.2.4? pH值測定

精密稱取1.00 g物料細粉，加水100 mL，室溫浸泡60 min，取濾液，測定pH值，平行測定3份，取其平均值。

2.2.5? 膨脹度測定

參照2015年版《中華人民共和國藥典》（四部）通則2101膨脹度測定法，平行測定3份，計算平均值。膨脹度=物料細粉膨脹后體積÷物料細粉質量。

2.2.6? 物性參數(shù)測定結果

山藥不同清炒炮制品物料的氧化值、吸水率、pH值、膨脹度測定結果見表2。

2.3? 主要成分測定

山藥的大分子成分主要包括淀粉和多糖。采用雙波長法[10]檢測不同炮制品中直鏈淀粉、支鏈淀粉含量，采用苯酚-硫酸顯色法[11-12]測定多糖含量。

2.3.1? 直鏈淀粉、支鏈淀粉標準曲線

采用作圖法確定直鏈淀粉的測定波長、參比波長分別為604、468 nm，支鏈淀粉的測定波長、參比波長分別為537、718 nm。直鏈淀粉標準曲線回歸方程為Y=0.004 5X-0.008 7（r=0.999 2），表明直鏈淀粉在20～90 ?g/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關系;支鏈淀粉標準曲線回歸方程為Y=0.002 8X+0.005 5（r?=0.998 8），表明支鏈淀粉在0～200 ?g/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關系。

2.3.2? 葡萄糖標準曲線

葡萄糖標準曲線回歸方程為Y=79.183X-0.016 3（r2=0.998 7），在0.002 8～0.011 5 mg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關系。

2.3.3? 含量測定結果

稱取適量“2.2.1”項下山藥炮制品物料細粉，按上述方法分別測定直鏈淀粉、支鏈淀粉及多糖含量，結果見表3。

2.4? 尿囊素含量測定

2.4.1? 色譜條件

采用Agilent ZORBAX SB-Aq色譜柱（5 μm，4.6 mm×250 mm）;流動相為甲醇-水（體積比1∶99）;流速：0.5 mL/min;柱溫：30 ℃;檢測波長：224 nm;進樣量：10 μL。理論塔板數(shù)以尿囊素計不低于5000。

2.4.2? 對照品溶液的制備

精密稱取尿囊素對照品10.00 mg，置25 mL量瓶中，加20%乙醇定容至刻度，搖勻，即得。

2.4.3? 供試品溶液的制備

精密稱定山藥及炮制品細粉各1.0 g，置50 mL容量瓶中，加20%乙醇溶解稀釋至刻度，超聲處理（功率250 W，頻率50 kHz）30 min，3000 r/min離心20 min，過濾，即得。

2.4.4? 標準曲線繪制

依次取0.25、0.5、1、1.5、2、2.5、3、5 mL尿囊素對照品溶液至10 mL容量瓶中，乙醇稀釋至刻度，搖勻，按“2.4.1”項下色譜條件進樣測定，以濃度對峰面積進行線性回歸，得回歸方程Y=0.098 4X+0.279 9，r2=0.999 7，結果表明尿囊素在10～400 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關系良好。

2.4.5? 精密度試驗

取高、中、低3個已知濃度的尿囊素對照品溶液，于當日內(nèi)連續(xù)進樣5次，測定峰面積，結果RSD均小于2%，表明儀器精密度良好。

2.4.6? 穩(wěn)定性試驗

取山藥供試品溶液，按“2.4.1”項下色譜條件，于0、2、4、8、12、24 h進樣測定，結果RSD=2.01%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.7? 重復性試驗

取山藥細粉1.0 g，平行精密稱定5份，按“2.4.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.4.1”項下色譜條件分別進樣測定，結果RSD=2.42%，表明本法重復性良好。

2.4.8? 加樣回收率試驗

取山藥細粉1.0 g，平行精密稱定9份，按“2.4.3”項下方法制備供試品溶液，分別加入適量尿囊素對照品溶液，按“2.4.1”項下色譜條件進樣測定，結果平均回收率為101.82%，RSD=2.15%，表明本法準確度良好。

2.4.9? 含量測定結果

精密吸取尿囊素對照品及各供試品溶液10 μL，進樣測定，記錄色譜峰與色譜圖，結果分別見表4、圖1。山藥經(jīng)清炒炮制后，尿囊素基本消失，由生品到炒黃過程，伴隨有1、2號峰增大并新出現(xiàn)3號峰的情況;由炒黃到炒焦過程，新產(chǎn)生4號峰，1、3號峰繼續(xù)增大，2號峰減小;由炒焦到炒炭過程，1、2號峰逐漸減小，4號峰增大，3號峰消失。

2.5? 相關性分析

采用SPSS22.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析，運用配對t檢驗考察各炮制品炮制工藝、物性參數(shù)及主要成分含量間的相關性，結果見表5～表7。

物性參數(shù)分析結果表明，山藥清炒炮制前后物性參數(shù)（吸水率、膨脹度、氧化值、pH值）比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。炮制工藝、物性參數(shù)與主要成分含量之間相關性分析結果顯示：氧化值與總淀粉含量呈顯著負相關，吸水率與多糖含量呈顯著正相關，多糖與淀粉含量存在負相關性;山藥清炒炮制工藝中的炮制溫度、炮制時間與總淀粉含量均呈顯著負相關，與氧化值呈顯著正相關。

3? 討論

山藥具有補脾養(yǎng)胃、生津益肺等功效，“入滋陰藥內(nèi)宜生用，入補脾藥內(nèi)宜炒黃用”[13]。目前，關于山藥的藥理活性及臨床應用研究日益增多[14-17]，而對其炮制后物料性質及主要成分變化的研究甚少，因此在實際應用中存在一定的局限性。山藥經(jīng)清炒炮制后，物理化學性質發(fā)生不同程度改變。本研究結果表明，山藥清炒炮制前后物料性質（氧化值、吸水率、膨脹度、pH值）存在顯著差異，因此可形成山藥炮制品的數(shù)字化評價指標，為山藥清炒炮制品的鑒別提供依據(jù);相關性分析顯示，山藥清炒炮制后總淀粉含量逐漸降低，多糖含量逐漸升高，二者之間有顯著相關性，存在相互轉化，而尿囊素消失，伴隨某些新物質成分產(chǎn)生。本結果可為山藥的開發(fā)應用提供參考，還需進一步深入探究。

本研究基于清炒炮制機理，采用烘箱加熱法，從清炒工藝參數(shù)（加熱溫度、時間）的連續(xù)變化中，探討山藥炒黃、炒焦、炒炭的節(jié)點，使炮制火候精準可控。通過分析得到山藥清炒炮制工藝對物性參數(shù)（氧化值）、淀粉及多糖均產(chǎn)生較大影響，不僅建立了炮制工藝-物性指標-成分測定之間的相關性聯(lián)系，詮釋了山藥清炒法炮制的動態(tài)變化過程，同時克服以外形、色澤等傳統(tǒng)經(jīng)驗判斷造成山藥質量不均一的弊端，為實現(xiàn)山藥清炒炮制評價客觀化、標準化、現(xiàn)代化、智能化奠定基礎。

參考文獻：

[1] 傅紫琴.山藥及其麩炒品多糖成分的化學及藥效研究[D].南京：南京中醫(yī)藥大學，2008.

[2] 吳建華，崔九成.山藥炮制方法初探[J].陜西中醫(yī)學院報，2007，23（4）：49-50.

[3] 石繼連.炮制火候數(shù)學模型的建立及對槐米的研究[D].北京：北京中醫(yī)藥大學，2013.

[4] 張紅偉，張振凌.炮制對中藥5-羥甲基糠醛成分的影響[J].中國實用醫(yī)藥，2009，4（15）：149-151.

[5] 陳天朝，于蘭蘭，劉瑞霞，等.不同物料參數(shù)及配比對模型丸劑體外溶出的影響[J].中華中醫(yī)藥學刊，2017，35（11）：2899-2902.

[6] 陳天朝，李瑞穎，于蘭蘭，等.5種中藥飲片在細粉、水丸之間吸水率和吸水膨脹度的傳遞性[J].中醫(yī)研究，2018，31（5）：66-70.

[7] 杜紹亮，李曉坤，張振凌，等.不同炮制方法對懷山藥中多糖含量的影響[J].中藥材，2010，32（12）：1858-1861.

[8] 張樂，潘歡歡，劉飛，等.白術麩炒過程中5-羥甲基糠醛的含量變化規(guī)律及其與飲片溫度、顏色變化的相關性分析[J].中國實驗方劑學雜志， 2016，22（17）：11-14.

[9] 王東，袁昌魯，林力.車前子膨脹度的分析[J].遼寧中醫(yī)藥大學學報， 2008，10（6）：192.

[10] 劉雪梅，宋燁，閆新煥，等.鮮食山藥直鏈淀粉、支鏈淀粉含量測定及品種差異比較[J].食品科技，2017，42（7）：290-293.

[11] 孫仕玲.山藥多糖含量的測定方法研究[J].農(nóng)業(yè)與技術，2010，30（3）：35-39.

[12] 王文，胡鵬翼.山藥飲片中多糖、尿囊素的含量測定研究[J].江西中醫(yī)學院學報，2013，25（4）：53-55.

[13] 蔣以號，劉偉，曹暉，等.山藥炮制歷史沿革研究[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2011，18（9）：108-110.

[14] 于蓮，張俊婷，馬淑霞，等.山藥多糖提取工藝優(yōu)化及其抗菌活性研究[J].中成藥，2014，36（6）：1194-1198.

[15] 陳杰桃，黃萬堅，穆青.三種山藥藥理活性成分及其礦物元素分析[J].食品工業(yè)科技，2017，38（7）：352-355.

[16] 陳運中，陳俊彰.四種山藥的藥理活性成分比較研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2014，25（10）：2389-2391.

[17] 邵禮梅，許世偉.山藥化學成分及現(xiàn)代藥理研究進展[J].中醫(yī)藥學報， 2017，45（2）：125-127.

（收稿日期：2018-06-28）

（修回日期：2018-08-07;編輯：陳靜）