戊型肝炎病毒(hepatitis E virus, HEV)是引起戊型病毒性肝炎的病原體，為單股正鏈RNA病毒，屬于戊型肝炎病毒科，戊型肝炎病毒屬[1-2]。HEV屬于人畜共患病，動(dòng)物宿主包括豬、牛、羊、雞、鹿等。其主要傳播途徑為糞-口途徑，所以人或動(dòng)物的排泄物污染水源，是大規(guī)模暴發(fā)流行的主要原因[3-4]。HEV也可經(jīng)母嬰、HEV感染的移植物和血液等途徑傳播[5]，因此輸血傳播HEV的風(fēng)險(xiǎn)備受關(guān)注。多個(gè)國(guó)家對(duì)獻(xiàn)血者中HEV的感染情況進(jìn)行了調(diào)查，結(jié)果顯示HEV IgG陽(yáng)性率分別為：新西蘭4.0%，英國(guó)13.5%，丹麥20.6%，美國(guó)16%，荷蘭27.0%[6-8]。近來(lái)，國(guó)際上陸續(xù)有輸血傳播HEV病例的報(bào)道。例如2014年英國(guó)報(bào)道了62位HEV RNA陽(yáng)性獻(xiàn)血者的血液制品輸注給43例患者，導(dǎo)致18例感染HEV[9]。器官移植、孕婦和免疫缺陷患者感染HEV后不易清除病毒，導(dǎo)致嚴(yán)重肝損傷甚至死亡[5]。因此HEV對(duì)免疫狀態(tài)異常患者的輸血安全構(gòu)成潛在威脅。從已有調(diào)查數(shù)據(jù)來(lái)看，國(guó)內(nèi)獻(xiàn)血者HEV感染率高達(dá)30%～42%，且感染率有著地域性差異[5]。廣州作為國(guó)家中心城市，是華南地區(qū)最大的城市，人口數(shù)量龐大且流動(dòng)性大，人群(包括獻(xiàn)血人群)結(jié)構(gòu)復(fù)雜，加上廣州地區(qū)擁有良好的醫(yī)療資源，臨床用血需求較大，故存在HEV經(jīng)輸血傳播的風(fēng)險(xiǎn)。因此，調(diào)查廣州地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者中HEV的感染情況，為是否需要進(jìn)行HEV血液篩查提供科學(xué)數(shù)據(jù)，對(duì)保障輸血安全有重要意義。

1 材料與方法

1.1樣本來(lái)源 2017年4月-2018年4月間隨機(jī)收集廣州血液中心獻(xiàn)血者的血液樣本5 552份，年齡18～60歲。這些獻(xiàn)血者在獻(xiàn)血前經(jīng)乙肝和梅毒快速試紙條及ALT初篩合格，其所獻(xiàn)血液均經(jīng)過(guò)血液篩查(HBV、HCV、HIV、HTLV、梅毒和ALT)。其中檢測(cè)項(xiàng)目全合格獻(xiàn)血者血樣4 652份，僅ALT陽(yáng)性(>50 U/L)的血樣900份，血樣經(jīng)離心，留取血漿待檢。

1.2試劑與儀器 抗-HEV IgG抗體、抗-HEV IgM抗體和HEV Ag的ELISA試劑盒均購(gòu)自北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)有限公司。ELISA實(shí)驗(yàn)步驟中的加樣和后處理操作，分別采用全自動(dòng)加樣器(瑞士HAMILTON，STAR)和全自動(dòng)酶免分析儀(瑞士Microlab，F(xiàn)AME)進(jìn)行。

1.3方法 采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)HEV IgG、HEV IgM和HEV Ag，實(shí)驗(yàn)步驟依照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)操作，樣本孔的OD值≥cut off值判為陽(yáng)性。

1.4統(tǒng)計(jì)分析 采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行HEV感染的人群分布特征的單因素分析，多因素Logistic回歸分析判辨HEV感染的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中多因素Logistic回歸分析采用向前步進(jìn)(Wald)方法建立模型，對(duì)進(jìn)入方程的變量分析結(jié)果中包含比值比(OR)和95%置信區(qū)間(95%CI)兩個(gè)統(tǒng)計(jì)量，而不在方程中的變量，屬于非獨(dú)立因素，結(jié)果中沒(méi)有OR值和95%CI。所有統(tǒng)計(jì)分析均使用SPSS 20.0軟件進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.1HEV感染血清學(xué)篩查情況 5 552名獻(xiàn)血者中，檢出HEV IgG、IgM和Ag ELISA陽(yáng)性1 113例、42例和2例，陽(yáng)性率分別為20.05%、0.76%和0.04%。其中，IgG/IgM雙陽(yáng)性32例，陽(yáng)性率為0.58%，IgG單陽(yáng)性和IgM單陽(yáng)性分別有1 081例和10例，陽(yáng)性率為19.47%和0.18%。2例Ag陽(yáng)性獻(xiàn)血者，其IgG和IgM均為陰性。

表1 HEV IgG, IgM和Ag的篩查結(jié)果Tab.1 Results for HEV IgG, IgM and Ag screening

IgG+IgM+Ag+Number1 113 (20.05)42 (0.76)2 (0.04)(%)IgM+IgM-IgG+IgG-IgG- IgM-Number(%)32(0.58)1 081(19.47)32(0.58)10(0.18)2(0.04)

2.2HEV IgG陽(yáng)性的影響因素 單因素和多因素分析結(jié)果顯示，年齡、民族和職業(yè)是影響HEV IgG陽(yáng)性的因素。其中，獻(xiàn)血者年齡越大，HEV IgG陽(yáng)性率越高(OR=1.089, 95%CI: 1.080-1.098,P<0.001)，從18～27歲年齡段的9.64%上升至48～60歲的59.29%；漢族的陽(yáng)性率為19.89%，顯著低于壯族的32.69%(χ2=5.278,P=0.022)，其他民族由于樣本量少而未作統(tǒng)計(jì)分析；在不同職業(yè)中，學(xué)生的HEV IgG陽(yáng)性率最低(8.03%)，其他職業(yè)如農(nóng)民(51.25%)、軍人(26.47%)、醫(yī)務(wù)人員(24.16%)和職員(25.13%)的陽(yáng)性率均高于學(xué)生，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=243.437,P<0.001)。此外，雖然單因素分析結(jié)果顯示男性獻(xiàn)血者的陽(yáng)性率高于女性(22.23%vs15.96%, χ2=30.964,P<0.001)，但多因素分析結(jié)果顯示性別并不是HEV IgG陽(yáng)性率的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素(P=0.138)。ALT是否升高不是影響HEV IgG陽(yáng)性率的風(fēng)險(xiǎn)因素(單因素: χ2=0.587,P=0.467，多因素:P=0.334)。

2.3HEV IgM陽(yáng)性的影響因素 在影響HEV IgG陽(yáng)性的因素中，年齡和民族也是影響HEV IgM陽(yáng)性的因素，HEV IgM陽(yáng)性率隨著獻(xiàn)血者年齡增大而上升(OR=1.055, 95%CI: 1.028-1.084,P<0.001)，18～27歲年齡段的HEV IgM陽(yáng)性率僅為0.31%，28歲及以上年齡段的陽(yáng)性率則在1.33%～1.60%；漢族人群的陽(yáng)性率為0.70%，顯著低于壯族的7.69%(χ2=32.878,P=0.001)。此外，ALT是影響HEV IgM陽(yáng)性的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素(OR=0.129, 95%CI: 0.018-0.944,P=0.044)，ALT陽(yáng)性獻(xiàn)血者的陽(yáng)性率(0.11%)顯著低于ALT陰性者(0.88%)。性別和職業(yè)均不是HEV IgM陽(yáng)性率的影響因素(性別：χ2=0.044,P=0.873；職業(yè)：χ2=7.932,P=0.323)。

3 討 論

HEV因在獻(xiàn)血者中的高感染率以及經(jīng)輸血傳播的病例報(bào)道而受到全世界的關(guān)注。由于需要接受輸血治療的患者大多處于免疫力低下的狀態(tài)，所以是HEV的易感人群，且較正常人感染更易慢性化和引起重癥肝炎[5]。而感染HEV的獻(xiàn)血者多數(shù)處于無(wú)癥狀的亞臨床感染狀態(tài)，這對(duì)臨床輸血安全帶來(lái)了挑戰(zhàn)，因此調(diào)查獻(xiàn)血者中的HEV感染率和進(jìn)一步評(píng)估其傳播風(fēng)險(xiǎn)意義重大。在2010年和2014年對(duì)中國(guó)無(wú)償獻(xiàn)血者HEV感染情況的多中心流行病學(xué)調(diào)查中，HEV IgG陽(yáng)性率分別為32.60%和28.29%，IgM陽(yáng)性率分別為0.94%和1.14%[10-11]。不同地區(qū)之間的HEV陽(yáng)性率差異較大。HEV IgG陽(yáng)性率較高的地區(qū)有：杭州(32.88%)、昆明(38.35%)、廈門(mén)(30.48%)、武漢(31.32%)、溫州(32.28%)和湖州(41.71%)，而北京(19.26%)、江蘇(19.23%)和深圳(22.15%)的HEV IgG陽(yáng)性率則相對(duì)低[11-14]。從本研究的調(diào)查結(jié)果顯示，廣州地區(qū)獻(xiàn)血者中HEV感染率為HEV IgG 20.05%、HEV IgM 0.76%，在國(guó)內(nèi)屬于相對(duì)較低水平，這可能與廣州地區(qū)有著較好的經(jīng)濟(jì)水平和衛(wèi)生條件等因素有關(guān)。值得注意的是，本研究里血液篩查合格的獻(xiàn)血者中檢出了HEV IgG(20.23%)和IgM(0.88%)，表明仍存在輸血傳播HEV的風(fēng)險(xiǎn)。

為了解廣州地區(qū)獻(xiàn)血者HEV感染的人群分布特征及其危險(xiǎn)因素，我們對(duì)獻(xiàn)血者的性別、年齡、民族、職業(yè)和ALT水平等進(jìn)行了單因素和多因素分析。結(jié)果表明，年齡是HEV感染的風(fēng)險(xiǎn)因素，IgG和IgM陽(yáng)性率均隨著獻(xiàn)血者年齡增大而上升，與國(guó)內(nèi)外研究結(jié)果一致[10, 12-13, 15-17]，說(shuō)明年齡越大，接觸病原體的機(jī)會(huì)越多，因而感染HEV的幾率也相應(yīng)增大。雖然單因素分析中男性HEV IgG陽(yáng)性率顯著高于女性，但多因素分析表明性別并不是HEV感染的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素。既往研究也沒(méi)有得出一致結(jié)論，例如聶冬梅和黃國(guó)永等認(rèn)為HEV陽(yáng)性與性別無(wú)關(guān)，而李美霖和朱紹汶則認(rèn)為男性的HEV IgG陽(yáng)性率高于女性[12-14, 18]。不同研究采用的診斷試劑的靈敏度差異、研究對(duì)象人群特征的不同以及統(tǒng)計(jì)分析方法不一致可能是導(dǎo)致不同研究結(jié)論的原因。不同性別之間的HEV感染率是否有差別，需要多中心、大樣本量以及嚴(yán)謹(jǐn)統(tǒng)計(jì)分析的研究才能得出結(jié)論。

本研究的結(jié)果顯示民族是HEV感染的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素，其中壯族獻(xiàn)血者的IgG和IgM陽(yáng)性率(32.69%，7.69%)均高于漢族(19.89%，0.70%)。17名HEV 陽(yáng)性的壯族獻(xiàn)血者中，15名來(lái)自廣西省。有文獻(xiàn)報(bào)道，廣西省普通人群的HEV感染率為20.2%，其中壯族人群陽(yáng)性率(47.66%)高于漢族(14.29%)[19-20]。Meiyu Wang等對(duì)中國(guó)地區(qū)獻(xiàn)血者HEV感染情況的調(diào)查結(jié)果顯示，廣西省獻(xiàn)血者HEV IgM和HEV Ag陽(yáng)性率均高于昆明、烏魯木齊和洛陽(yáng)等地區(qū)[21]。廣西省是我國(guó)HEV的高流行區(qū)，而壯族可能是HEV感染的高風(fēng)險(xiǎn)人群，可能與壯族人群機(jī)體遺傳多態(tài)性或生活行為習(xí)慣有關(guān)。其他少數(shù)民族因樣本量過(guò)少而未納入統(tǒng)計(jì)分析。

HEV為人獸共患病，除經(jīng)血傳播以外，可以糞-口及其他途徑傳播。本研究發(fā)現(xiàn)學(xué)生的感染率最低，農(nóng)民、醫(yī)務(wù)人員、軍人和職員的HEV陽(yáng)性率較高，且經(jīng)多因素分析具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明這些職業(yè)是影響HEV陽(yáng)性率的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素，與年齡、民族等因素?zé)o關(guān)。農(nóng)民可能由于更多的和家畜接觸而更容易感染HEV。醫(yī)務(wù)人員、軍人和職員則可能由于職業(yè)暴露或工作壓力等原因增加了感染HEV的機(jī)會(huì)。相反，公務(wù)員、教師和工人的HEV陽(yáng)性率雖然高于學(xué)生，但經(jīng)多因素分析后不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明這些人群的高陽(yáng)性率可能是由于樣本量不足或其他混雜因素(如年齡、民族等)所致。

表2 廣州地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者HEV IgG陽(yáng)性影響因素的單因素和多因素分析

Tab.2 Univariate and multivariate analysis of factors affecting HEV IgG positive among blood donors in Guangzhou

NumberUnivariate analysisMultivariate analysisIgG+ n(%)POR (95%CI)PSexMale3 616804 (22.23)<0.001-0.138Female1 936309 (15.96)Age (years) 18～3 268315 (9.64)<0.0011.089 (1.080-1.098)<0.001 28～1 280311 (24.30) 38～692302 (43.64) 48-60312185 (59.29)EthnicityHan ethnicity5 3961 073 (19.89)0.022?1.0000.045Zhuang minority5217 (32.69)2.052 (1.103-3.819)0.023Others10423 (22.12)1.312(0.794-2.168)0.289OccupationStudent1 594128 (8.03)<0.0011.0000.006Civil servant3312 (36.36)1.281 (0.584-2.812)0.536Teacher3610 (27.78)1.573(0.700-3.536)0.273Soldier349 (26.47)2.993 (1.334-6.713)0.008Farmer8041 (51.25)2.734 (1.620-4.613)<0.001Worker29882 (27.52)1.328 (0.939-1.878)0.109Medical staff17843 (24.16)1.557 (1.031-2.351)0.035Office clerk752189 (25.13)1.375 (1.048-1.804)0.021Others2 547599 (23.52)1.328(1.055-1.671)0.016ALT (U/L)Negative(≤50)4 652941 (20.23)0.467-0.334Positive (>50)900172 (19.11)

注：漢族和壯族獻(xiàn)血者HEV IgG陽(yáng)性率的比較，其他民族未納入分析

表3 廣州地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者HEV IgM陽(yáng)性影響因素的單因素和多因素分析

Tab.3 Univariate and multivariate analysis of factors affecting HEV IgM positive among blood donors in Guangzhou

NumberUnivariate analysisMultivariate analysisIgM+ n(%)POR (95%CI)PSexMale3 61628 (0.77)0.873-0.952Female1 93614 (0.72)Age (years) 18～3 26810 (0.31)<0.0011.055 (1.028-1.084)<0.001 28～1 28017 (1.33) 38～69210 (1.45) 48-603125 (1.60)表3(續(xù))NumberUnivariate analysisMultivariate analysisIgM+ n(%)POR (95%CI)PEthnicityHan ethnicity5 39638 (0.70)0.001?1.000<0.001Zhuang minority524 (7.69)12.029 (4.067-35.580)<0.001Others1040 (0)--OccupationStudent1 5947 (0.44)0.323-0.988Civil servant331 (3.03)-0.391Teacher360 (0)-0.576Soldier340 (0)-0.684Farmer801 (1.25)-0.949Worker2983 (1.01)-0.934Medical staff1782 (1.12)-0.585Office clerk7525 (0.66)-0.628Others2 54723 (0.90)-0.826ALT (U/L)Negative(≤50)4 65241 (0.88)0.0150.129 (0.018-0.944)0.044Positive (>50)9001 (0.11)

注：漢族和壯族獻(xiàn)血者HEV IgM陽(yáng)性率的比較，其他民族未納入分析

既往研究認(rèn)為ALT水平升高與HEV感染密切相關(guān)[21]。本研究中HEV IgG陽(yáng)性率在ALT正常組和ALT升高組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而HEV IgM陽(yáng)性率在ALT正常組要高于ALT升高組，這可能是由于本研究的研究對(duì)象為獻(xiàn)血前ALT初篩合格的獻(xiàn)血者，而ALT顯著升高的獻(xiàn)血者已被排除。ALT初篩合格的獻(xiàn)血者，其血液制品即使經(jīng)獻(xiàn)血后篩查呈ALT不合格，其值大多處于正常值的1-2倍范圍內(nèi)，而此范圍內(nèi)影響ALT的因素很多，這些獻(xiàn)血者的HEV陽(yáng)性率并不能代表ALT升高人群的感染情況。

本研究報(bào)導(dǎo)了廣州地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者的HEV IgG, IgM和Ag陽(yáng)性率，分析了與HEV感染的相關(guān)因素。后續(xù)研究中我們將使用RT-PCR等方法檢測(cè)HEV RNA，獲得其基因片段序列并進(jìn)行基因分型和進(jìn)化分析，同時(shí)進(jìn)一步調(diào)查與HEV感染相關(guān)的生活行為方式，旨在掌握廣州地區(qū)HEV的流行特征與趨勢(shì)，為病毒的防控工作提供科學(xué)數(shù)據(jù)。

致謝：特別感謝國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)醫(yī)政醫(yī)管局(委托廣州血液中心項(xiàng)目:建立經(jīng)血傳播疾病病原體篩查技術(shù)方法)、廣州市醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(廣州血液中心)對(duì)本研究提供的資金支持。

利益沖突：無(wú)

本文引用格式：尤慶柱, 黃杰庭, 許茹, 等. 廣州地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者戊型肝炎病毒感染流行病學(xué)調(diào)查[J]. 中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào), 2019,35(4):363-368. DOI: 10.3969/j.issn.1002-2692.2019.00.039