許海梅 李永超 劉海珊 廖雪霞 張裕照

海南儋州市人民醫(yī)院消化內(nèi)科， 儋州 571179

AP是常見的消化系統(tǒng)疾病，輕癥患者病情較輕，可自愈，而重癥AP(SAP)病情進展迅速、并發(fā)癥多、預(yù)后較差，給臨床治療造成了極大的困難。因此，如何對SAP進行早期診治和預(yù)后判斷是當前研究的熱點問題。微小核糖核酸(microRNA，miRNA)是一種由21～25個核苷酸組成的非編碼RNA分子，通過轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因表達，參與AP的發(fā)病過程[1]。研究表明，miR-148a-3p及miR-551b-3p在AP時異常表達，其與AP患者的發(fā)病及病情嚴重程度密切相關(guān)，是AP預(yù)后監(jiān)測、靶向治療的潛在生物學標志物[2-3]。本研究通過檢測AP患者血清miR-148a-3p及miR-551b-5p的表達水平，分析其判斷SAP患者預(yù)后的價值，以期為SAP的早期救治提供指導。

資料與方法

一、一般資料

選取2017年1月至2020年9月間儋州市人民醫(yī)院收治的152例AP患者，其中男性95例，女性57例，年齡27～68(50±11)歲。根據(jù)病情嚴重程度分為MAP組(70例)、MSAP組(40例) 和SAP組(42例)。另根據(jù)42例SAP患者的預(yù)后情況，分為生存組(25例)和死亡組(17例)。納入標準：(1)符合中國急性胰腺炎診治指南(2014)AP診斷及分級標準[4]；(2)發(fā)病入院時間<72 h。排除標準：(1)合并嚴重心、肝、腎、呼吸系統(tǒng)疾病及惡性腫瘤者；(2)已接受外院治療后轉(zhuǎn)診來院者。另選取同期50例體檢健康者作為對照組，其中男性34例，女性16例，年齡30～65(51±10)歲。本研究通過醫(yī)院倫理委員會批準，所有患者均簽署知情同意書。

二、血清 miR-148a-3p及miR-551b-5p表達檢測

所有AP患者于發(fā)病當天(對照組于體檢時)采集空腹靜脈血5 ml，置于無抗凝劑的離心管中，離心分離血清，采用ABI 7500型熒光定量PCR儀進行實時熒光定量PCR。miR-148a-3p正向引物序列為5′-AGATCGCATCATCGATAGAC-3′，反向引物序列為5′-GATAGCCTGTACGTGCAGCT-3′；miR-551b-5p正向引物序列為5′-GACTAGCTGCAGCGTAGTAG-3′，反向引物序列為5′-ACTTCAGATGCATGCACATG-3′；內(nèi)參照U6正向引物序列為5′-CTGAGTCACTAGCTAGA-3′，反向引物序列為5′-ACTGTGCAGCGTAGCAT-3′。PCR反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性10 min、95℃變性15 s、60℃復(fù)性60 s，45個循環(huán)。通過儀器自帶軟件獲取Ct值，采用2-△△Ct公式計算miR-148a-3p及miR-551b-5p的相對表達量，每個樣品設(shè)3個復(fù)管，取均值。

三、統(tǒng)計學處理

結(jié) 果

一、各組一般資料比較

各組性別、年齡及體重指數(shù)比較，差異無統(tǒng)計學意義，具有可比性(表1)。

表1 3組急性胰腺炎患者與健康對照者一般臨床資料比較

二、AP組和對照組miR-148a-3p及miR-551b-5p表達水平比較

AP組血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表達水平分別為3.18±1.27及1.94±0.85，明顯高于對照組的0.96±0.28及0.51±0.12，差異均有統(tǒng)計學意義(t值分別為16.412、13.115，P值均<0.001)。

三、病情嚴重程度不同的AP患者血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表達水平比較

SAP組血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表達水平分別為4.36±1.70及2.80±1.04，均明顯高于MSAP組的2.84±1.10及1.68±0.53和MAP組的2.50±0.92及1.42±0.45，差異均有統(tǒng)計學意義(F值分別為12.850、11.273，P值均<0.001)；而MSAP組與MAP組血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表達水平的差異無統(tǒng)計學意義。

四、SAP死亡組和生存組血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表達水平比較

SAP死亡組血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表達水平分別為5.30±1.95及3.62±1.37，均明顯高于生存組的3.47±1.40及2.08±0.91，差異均有統(tǒng)計學意義(t值分別為14.820、13.624，P值均<0.001)。

五、血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表達水平判斷SAP患者預(yù)后的價值

miR-148a-3p及miR-551b-5p判斷SAP患者預(yù)后的最佳截斷值分別為4.15、2.70，二者聯(lián)合判斷SAP患者預(yù)后的AUC值明顯高于miR-148a-3p、miR-551b-5p單項指標(P值均<0.001)，其靈敏度為98.3%，特異度為84.6%(圖1、表2)。

圖1 血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表達水平判斷重癥急性胰腺炎患者預(yù)后的ROC曲線

六、 SAP患者血清miR-148a-3p與miR-551b-5p表達水平的相關(guān)性

Pearson相關(guān)分析顯示，SAP患者血清miR-148a-3p與miR-551b-5p表達水平呈正相關(guān)(r=0.835，P<0.001，圖2)。

討 論

miRNA是一類短序、內(nèi)源啟動的小分子RNA，具有組織特異性、性質(zhì)穩(wěn)定和易于獲取等特點，為其成為新的生物標志物提供了較好的前景[5-6]。miRNA參與細胞生長、促血管生成、誘導細胞分化和調(diào)節(jié)免疫，可能在AP的發(fā)病過程和預(yù)后判斷中發(fā)揮了關(guān)鍵作用[7-8]。有研究指出，miR-148a-3p及miR-551b-5p參與介導炎癥反應(yīng)相關(guān)的基因調(diào)節(jié)過程，在胰腺組織異常表達，且參與胰腺炎的發(fā)生發(fā)展，具有成為SAP診斷及預(yù)后判斷的生物學標志物及治療靶點的潛能[9-10]。

表2 血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表達水平判斷重癥急性胰腺炎患者預(yù)后的價值

圖2 重癥急性胰腺炎患者血清miR-148a-3p與miR-551b-5p表達水平的相關(guān)性

本研究顯示，與對照組比較，miR-148a-3p及miR-551b-5p表達水平在AP組中明顯升高，提示其在AP發(fā)病中發(fā)揮了一定作用。與MSAP組和MAP組比較，miR-148a-3p及miR-551b-5p表達水平在SAP組中明顯升高，且miR-148a-3p及miR-551b-5p在死亡組的表達明顯高于生存組，說明高表達的miR-148a-3p及miR-551b-5p可能促進AP的病情進展，導致預(yù)后較差。這主要是miR-148a-3p及miR-551b-5p參與調(diào)節(jié)炎癥細胞因子，兩者的高表達促使各種因子及炎癥遞質(zhì)釋放，造成全身炎癥反應(yīng)綜合征，導致循環(huán)、呼吸或腎功能衰竭，進而造成SAP患者死亡。有研究認為，SAP患者miRNA表達水平明顯高于MAP和MSAP患者，miRNA對判斷AP的病情進展具有較好的幫助[11]。Zhang等[12]和Kus′nierz-Cabala等[13]研究發(fā)現(xiàn)，與對照組比較，miR-551b-5p在MSAP和SAP患者中的表達明顯升高，其可能通過調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)來參與SAP的發(fā)生，有望作為SAP病情判斷的一個可靠指標。另有研究表明，miR-148a-3p在AP中高表達，參與了AP發(fā)病過程，在AP診斷和預(yù)后判斷中具有較大的幫助[14]。本研究結(jié)果顯示miR-148a-3p及miR-551b-5p對SAP患者預(yù)后判斷均具有一定的價值，兩項聯(lián)合判斷的靈敏度更高，說明miR-148a-3p及miR-551b-5p可作為判斷患者SAP預(yù)后的良好指標，兩項聯(lián)合的效能更好。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突