李璐　杜勇　李敬　師曉強　賈艷輝

【摘要】目的：深入探析系統(tǒng)性紅斑狼瘡病患者外周血當中固有淋巴細胞變化及其臨床相關性。方法：任意篩選從2017年11月到2018年5月治療于我院的風濕免疫科病患者，并且符合相應年齡段，且規(guī)避免疫有關病癥及其家族史遺傳的身體健康群體，流式細胞術檢測外周血當中ILC、B細胞、CD4+T與CD8+T細胞百分比值，解析ILC各亞組之間的變動偏差，區(qū)別于B細胞、T細胞亞群相互間的關聯(lián)性。酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測血漿當中包括細胞介素（IL）-4、-33與干擾素-γ等細胞因子水準，并且解析ILC亞群和各因子的關聯(lián)性。結果：具體劃分為SLE活動組，即P=0.0037;SLE穩(wěn)定組，即P=0.0462，分開跟健康對照組進行比較，外周血當中ILC百分比完全上升，伴隨著ILC2百分比的提升，而SLE疾病活動度評價也隨之下降，兩者呈現(xiàn)負相關，SLE病患者當中ILC2即r=0.1543，P=0.0288與ILC3百分比即r=0.3136，P=0.0011對比IL-4水準呈現(xiàn)正相關。結論：SLE病患者ILC細胞百分比失調(diào)和病癥活動有著緊密關系，細胞因子出現(xiàn)不尋常表現(xiàn)也摻雜當中，需要深入研究功能與作用。

【關鍵詞】系統(tǒng)性紅斑狼瘡;固有淋巴細胞;臨床相關性

【中圖分類號】R593.241 【文獻標識碼】A

【基金項目】保定市科技計劃項目：艾拉莫德對系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者B淋巴細胞的影響及臨床療效研究;（編號：2041ZF323）

系統(tǒng)性紅斑狼瘡的簡稱為SLE，其是一種多系統(tǒng)受累的自身免疫性疾病，在人體內(nèi)形成對于核蛋白復合物的致病性身體抗體針對包含腎臟在內(nèi)絕大多數(shù)器官有極大的損害影響。通過探究從中找出各種固有免疫細胞加入到SLE的發(fā)病中，參照ILC細胞因子譜把其劃分為三大亞群，呈現(xiàn)出分泌干擾素-γ特性，集中分散在黏膜和組織當中。接下來文章主要研究了ILC在SLE中的表現(xiàn)水平，及其跟細胞因子有慣性，進一步深入研究LLC在SLE具體實踐中的影響。

1 研究對象

具體探究對象為任意篩選從2017年到2018年5月在我院診治風濕免疫科SLE病患者40名，整體病患者完全符合1997年SLE劃分標準，當中男性1名，女性39名，平均歲數(shù)42.0+2.2歲。根據(jù)SLE病癥活動度-2K把SLE病患者劃分成為活動組與穩(wěn)定組，每組各20名，篩選同期在我院體檢中心體檢歲數(shù)達標的人群，同時規(guī)避免疫有關病癥及其家族遺傳病史的健康對照者15名。按照我院倫理委員會的相關制度，已獲得全體研究對象及其家屬簽字知情同意書。

2 方法

2.1 實驗室檢查數(shù)據(jù)

采集SLE病患者實驗室檢查材料，比如：抗核抗體、血紅細胞沉降率、C-反應蛋白、類風濕因子及其免疫球蛋白等，并且綜合病患者臨床病癥實施SLEDAI詳盡評估。

2.2 重點試劑和儀器

其中流式熒光抗體為：CD56-PE，CD11b-PE，CD16-PE，CD14-PE，CD19-PE，CD11C-PE，CD20-PE，F(xiàn)eRIa-PE，CD3-PE，CD123-PE，CD127-PerCP/Cy5.5，CD161-AF700，CD336-APC，CD117-BV421，CD45-FITC，CD294-PE/Cy7，CD19-PE/Cy7，CD4-FITC，CD3-PaificBlue，CD8-PerCP/Cy5.5;儀器具體包含：BDFACSCCantoII流式細胞儀、Biocell2010酶標儀。

2.3 外周血單個核細胞制備

需要空腹抽取兩組數(shù)據(jù)5ml外周抗凝血，通過Ficoll密度梯度離心法分離，最終獲得PBMC懸液，且計算數(shù)值。

2.4 測定ILC細胞群測

獲取200μlPBMC懸液中添加到抗體CD56，CD11b，CD16，CD14，CD19，CD1IC，CD20，F(xiàn)cRlo，CD3，CD123，CD127，CD161，CD336.CD117，CD45，CD294，待避光孵育30分鐘之后，采取磷酸鹽緩沖液沖洗，添加300μulPBS重懸，流式細胞術檢測ILC細胞比例。

2.5 測定外周免疫細胞亞群

獲取200μlPBMC懸液添加到抗體CD3，CD4，CD8，CD19;待避光孵育30分鐘后，使用PBS沖洗，添加300μlPBS重懸，流式細胞術T、B細胞群比例。

2.6 ELISA檢測二組研究對象血漿中細胞因子表達水準

遵照ELSA試劑盒當中說明書檢測L-4.-33與干擾素-γ具體濃度，試劑盒完全購買于外國公司。

2.7 統(tǒng)計學處置

采取SPSS17.0統(tǒng)計軟件實施數(shù)據(jù)解析。全部數(shù)據(jù)完全達到正態(tài)分布，每組計量材料使用獨立樣本t檢驗方式，三組及其三組之上材料運用方差解析，結果為P<0.05具備統(tǒng)計學意義。

3 結果

3.1 SLE病患者臨床材料對比二組病患者的SLEDAI評分與ESR呈現(xiàn)上升趨勢，差異具備統(tǒng)計學意義;活動組C3水準對比穩(wěn)定組有所下降，差異具備統(tǒng)計學意義;然而，RF、CRP、IgG及其C4水準二組之間差異不具備統(tǒng)計學意義。詳見表1所示。

3.2 三組對象ILC百分比對比

第一，SLE活動組和對照比較，ILC比例呈現(xiàn)上升趨勢，即22.33+2.52）%比（14.56+1.28）%，t=2.488，P=0.0181，ILC2比例呈現(xiàn)下降趨勢，即（8.67+0.83）%比（42.48+3.46）%，t=10.79，P<0.0001;ILC3百分比在SLE活動組中下降（5.72±1.08）%比（14.35+2.40）%，t=3.504，P=0.0013。第二，SLE穩(wěn)定組和對照組比較，二組之間ILC1與ILC3群百分比之間沒有顯著差異，ILC2百分比在SLE穩(wěn)定組中對比健康對照組顯著下降，第三，SLE兩組病患者對比，活動組對比穩(wěn)定組的ILC1比例上升，LC2比例顯著下降，ILC3在兩組之間差異化不具備統(tǒng)計學意義。

3.3 SLE病患者外周血T、B細胞百分比與ILC百分比關聯(lián)性

第一，SLE穩(wěn)定組當中ILC各亞群和CD4+T、CD8+T與CD19+B細胞沒有明顯關聯(lián)性，全部P>0.05;第二，SLE活動組病患者外周血中，伴隨著外周ILC2百分比例上升，而CD4+T細胞比例有所降低，兩者有互相關聯(lián)性，ILC1與ILC3細胞和CD4+T、CD8+T及其CD19+B細胞百分比完全沒有明顯關聯(lián)性。

3.4 SLE病患者外周血LC細胞比例和臨床血清學標準關聯(lián)性解析

SLE病患者外周ILC百分比和ESR、RF及其CRP等不具備明顯關聯(lián)性，全部P>0.05。隨著SLE病患者外周ILC2百分比上升，血清當中的IgG含量下降，二者體現(xiàn)出負相關。

3.5 SLE病患者外周血PBMC當中ILC占比及其疾病活動度相關性

ILC2百分比上升時，而SLEDAI評分卻漸漸下降，二者體現(xiàn)出負相關，然而，在ILC1和ILC3群中沒有相關性，差異化不具備統(tǒng)計學意義。不一樣活動度的SLE病患者外周ILC表達水平不一樣，跟對照組進行比較，SLE穩(wěn)定組當中ILC百分比上升，即（3.79+0.39）%比（6.59+1.19）%，t=2.077，P=0.0462;SLE活動組中ILC百分比明顯上升，即（3.79+0.39）%比（12.58+2.40）%，t=3.129，P=0.0037;SLE兩組對比，活動組即（6.59+1.19）%比（12.58+2.40）%，t=2.155，P=0.0379，病患者外周血中ILC百分比先祖上升，活動組LEDAI評分對比穩(wěn)定組呈現(xiàn)上升趨勢。

3.6 三組對象干擾素-γ、IL4和IL-33表現(xiàn)水準對比

SLE活動組當中干擾素γ水準對比SLE穩(wěn)定組與健康對照組有所上升，SLE二組病患者差異不具備統(tǒng)計學意義。SLE兩組患者血漿IL4水平完全比健康對照組上升;然而，SLE活動組對比穩(wěn)定組IL4水平略微上升，但是無差異化統(tǒng)計學意義。IL-33表達水平，SLE活動組分開跟與健康對照組及其SLE穩(wěn)定組對比全部呈現(xiàn)下降，SLE穩(wěn)定組與健康對照組差異不具備統(tǒng)計學意義。

3.7 SLE病患者外周血ILC亞群比例和細胞因子相關性分析

SLE病患者外周LC2與ILC3百分比跟血清當中IL-4水平呈現(xiàn)相關性，ILCI與血清IL-4水平?jīng)]有顯著相關性，其他亞群和IL-33和干擾素-γ也沒有顯著相關性，P>0.05。

4 討論

SLE其實為免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)錯亂的自身免疫性并贈，呈現(xiàn)的特性為形成很多自身抗體與多系統(tǒng)受累，且病患者身體內(nèi)T、B細胞異?；罨?，同時跟細胞因子的變化有關聯(lián)。通過探究表明，先天細胞與淋巴細胞相互間放大的互相影響促使耐受性欠缺，造成本身反應性B細胞激活與連續(xù)產(chǎn)生。此次探究得出結論：ILC各亞群在SLE病患者外周血中的比例跟健康對照組對比差異具備統(tǒng)計學意義。

ILC有不一樣活動度SLE病患者外周血比例區(qū)別性非常顯著，干擾素-γ為介導細胞之間互相影響的關鍵因子，經(jīng)過調(diào)整TLR，抗原呈遞與淋巴細胞募集到生發(fā)中心，推動身體內(nèi)部抗體形成。基于此，干擾素-γ為驅(qū)動消耗性病癥與整體身體炎癥的關鍵原因，此次探究結果也證實了干擾素-γ在SLE病發(fā)中的影響。

ILC2分泌IL-4、-5和-9等2型細胞因子，部分炎性細胞因子介導各種炎性反應，可影響到T、B與DC等細胞。其DC細胞與單核細胞分解的IL-I2影響下，增強分解干擾素-γ的功能。其他探究得出結論，可塑性ILC2s能夠下調(diào)CATA3的表達，致使細胞走向類ILCI樣的狀態(tài)。不僅如此，SLE病患者血清中IgG水準隨著ILC百分比例上升而提升，同時SLE活動組外周血C3補體水準對比SLE穩(wěn)定組顯著下降，致使保護性免疫轉(zhuǎn)向病理狀態(tài)。

ILC3亞群具備非常強的可塑性與異質(zhì)性，其在特定環(huán)境中轉(zhuǎn)向ILC1群，具體探究表明，NKp46+T-be+ex-ILC3針對促炎細胞因子刺激的應答中失去了RORyt表達，且在功能與表型跟ILC105很相似。除了1L-17與-22，NCR+IILC3與ex1LC3也可分泌干擾素-γ與-ɑ加入到保護性免疫，隨之慢性活化的ILC3引導爆發(fā)性炎性反應造成病癥產(chǎn)生。ILC3活化后的分解IL-2、-6、-17、-10，有助于T與B細胞應答的啟動或調(diào)整。

通過此次探究得出結論，ILC細胞百分比與疾病活動度有一定相關性，ILC百分比提升并無法控制自身炎性反應，同時不一樣病癥活動度情況下，各亞群差異化完全不同。ILC不但呈現(xiàn)出百分比提升，同時跟適應性免疫反應細胞相互間的影響逐漸增強，由此得出結論，ILC細胞具備“雙刃”功能，其在SLE發(fā)病機制中影響需要深入探究。

5 總結

總而言之，SLE病患者尤其在病癥發(fā)病期內(nèi)，身體內(nèi)總T細胞及其亞群數(shù)量分配出現(xiàn)了異動情況，T細胞亞群、B細胞及其NK細胞的變動在病患者發(fā)病當中產(chǎn)生了巨大影響。當檢測病患者外周血淋巴細胞亞群，有針對性地全方位掌握機體免疫情況，才能精準地推斷出病情與指導臨床診治起到了積極的作用。

參考文獻：

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[3]周紅霞.系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血B淋巴細胞中TLR9的表達及其臨床意義[J].海南醫(yī)學院學報，2012，18（11）.

作者簡介：

李璐，女，漢族，河北省保定市人，碩士研究生，主治醫(yī)師，研究方向：狼瘡腎炎治療。

杜勇，男，漢族，河北省保定市人，碩士研究生，講師，主治醫(yī)師，研究方向：狼瘡腎炎治療。