侯建彬　李新宇　陳琦瑋　柳燕　賈靜

【摘要】? 目的? ? 分析結(jié)腸癌組織中血小板反應(yīng)蛋白2（THBS2）、溶質(zhì)載體家族11成員1（SLC11A1）表達(dá)及與腫瘤相關(guān)性中性粒細(xì)胞（TANs）浸潤(rùn)的關(guān)系。方法? ? 選取2020年1月—2022年4月在泉州市第一醫(yī)院進(jìn)行手術(shù)切除的120例結(jié)腸癌患者的腫瘤組織及癌旁組織，用免疫組化法檢測(cè)結(jié)腸癌組織及癌旁組織中THBS2、SLC11A1表達(dá)，收集患者臨床病理特征，分析THBS2、SLC11A1表達(dá)與結(jié)腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系，分析THBS2、SLC11A1與TANs浸潤(rùn)密度的相關(guān)性。結(jié)果? ? THBS2在結(jié)腸癌組織中主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，SLC11A1在結(jié)腸癌組織中主要表達(dá)于細(xì)胞膜中，染色均呈現(xiàn)棕黃色；相較于癌旁正常組織，結(jié)腸癌組織中THBS2表達(dá)明顯降低，SLC11A1表達(dá)明顯升高。結(jié)腸癌組織THBS2表達(dá)與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、血管浸潤(rùn)具有明顯相關(guān)性（P<0.05）；結(jié)腸癌組織SLC11A1表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤浸潤(rùn)深度、病理分型、TNM分期、血管浸潤(rùn)具有明顯相關(guān)性（P<0.05）。結(jié)腸癌組織中THBS2表達(dá)與TANs浸潤(rùn)密度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.444，P<0.05），SLC11A1表達(dá)與TANs浸潤(rùn)密度呈正相關(guān)（r=0.355，P<0.05）。結(jié)論? ? 在結(jié)腸癌組織中THBS2、SLC11A1均呈現(xiàn)異常表達(dá)，與TANs浸潤(rùn)相互作用共同促進(jìn)結(jié)腸癌的惡性進(jìn)程，推測(cè)兩指標(biāo)可作為潛在的結(jié)腸癌臨床預(yù)后因子。

【關(guān)鍵詞】? 結(jié)腸癌； THBS2； SLC11A1； TANs浸潤(rùn)； 相關(guān)性

Expression of THBS2， SLC11A1 genes and their relationship with TANs invasion in colon cancer

Hou Jianbin，Li Xinyu， Chen Qiwei et al. The First Hospital of Quanzhou City，Quanzhou，F(xiàn)ujian? ?362000

【Abstract】 Objective? ? To analyze the expression of platelet reactive protein 2（THBS2），solute vector family 11 member 1（SLC11A1）and their relationship with tumor associated neutrophil（THBS）infiltration in colon cancer. Methods? ? The tumor tissues and paracancerous tissues of 120 patients with colon cancer who underwent surgical resection in our hospital from January 2020 to April 2022 were selected.The expression of THBS2 and SLC11A1 in colon cancer tissues and paracancerous tissues was detected by immunohistochemical method.The clinicopathological features of patients were collected，and the relationship between the expression of THBS2 and SLC11A1 and the clinicopathological features of colon cancer patients was analyzed；Pearson correlation analysis was used to analyze the correlation between THBS2，SLC11A1 and THBS infiltration density. Results? ? THBS2 was mainly expressed in the cytoplasm and SLC11A1 was mainly expressed in the cell membrane in colon cancer tissues.The staining of THBS2 and SLC11A1 was brownish yellow；Compared with normal adjacent tissues，THBS2 expression was significantly decreased and SLC11A1 expression was significantly increased in colon cancer tissues.THBS2 expression was significantly correlated with differentiation，lymph node metastasis，TNM stage and vascular invasion（P<0.05）；The expression of SLC11A1 in colon cancer was significantly correlated with lymph node metastasis，depth of tumor invasion，pathological classification，TNM stage and vascular invasion（P<0.05）.There was a negative correlation between THBS2 expression and THBS invasion density in colon cancer（r=-0.444，P<0.05），and a positive correlation between SLC11A1 expression and tans invasion density（r=0.355，P<0.05）.Conclusion? ? THBS2 and SLC11A1 are abnormally expressed in colon cancer tissue，and interact with THBS infiltration to promote the malignant process of colon cancer.It is speculated that the two indicators can be used as potential clinical prognostic factors of colon cancer.

【Key Words】? Colon cancer； THBS2； SLC11A1； THBS infiltration； Correlation

中圖分類(lèi)號(hào)：R735.3+5? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? 文章編號(hào)：1672-1721（2023）19-0016-04

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.19.006

結(jié)腸癌是常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤，近年來(lái)，隨著人們生活方式的改變，我國(guó)結(jié)腸癌的發(fā)病率和病死率明顯升高，早發(fā)現(xiàn)、早診斷及綜合治療為提高結(jié)腸癌患者生存率的關(guān)鍵所在。尋找新的方法早期預(yù)測(cè)、診斷結(jié)腸癌已成為臨床醫(yī)師關(guān)注的重點(diǎn)。腫瘤復(fù)發(fā)和化療藥物耐藥在結(jié)腸癌晚期非常常見(jiàn)，轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)是結(jié)腸癌患者的主要死因，與腫瘤相關(guān)性中性粒細(xì)胞（tumor associated neutrophils，TANs）浸潤(rùn)密切相關(guān)[1]。相關(guān)資料顯示[2]，TANs與結(jié)腸癌的惡性生物學(xué)行為及不良預(yù)后呈明顯正相關(guān)。血小板反應(yīng)蛋白2（platelet reactive protein 2，THBS2）是一類(lèi)細(xì)胞膜表面鈣結(jié)合糖蛋白，近年來(lái)相關(guān)資料顯示[3]，其在多種腫瘤組織中呈現(xiàn)異常表達(dá)，其表達(dá)下降與腫瘤新生血管的形成有關(guān)，被認(rèn)為是一種“抑癌基因”。溶質(zhì)載體家族11成員1（solute carrier family 11 member 1，SLC11A1）為一種促炎性因子，與多種炎癥性疾病的發(fā)生密切相關(guān)。已有研究證實(shí)SLCILAL與感染、自身免疫和癌癥有關(guān)，其轉(zhuǎn)錄抑制可導(dǎo)致細(xì)胞增殖和存活[4]。本研究旨在分析結(jié)腸癌組織中THBS2、SLC11A1基因表達(dá)及與TANs浸潤(rùn)的關(guān)系，報(bào)道如下。

1? ? 資料與方法

1.1? ? 一般資料? ? 選取2020年1月—2022年4月在泉州市第一醫(yī)院進(jìn)行手術(shù)切除的120例結(jié)腸癌患者的腫瘤組織及癌旁組織，其中男47例，女73例，年齡28～80歲，平均年齡（62.33±8.15）歲。根據(jù)免疫組化染色結(jié)果分為T(mén)HBS2陰性組（n=98例）、THBS2陽(yáng)性組（n=22例）及SLC11A1陰性組（n=31例）、SLC11A1陽(yáng)性組（n=89例）。

入組標(biāo)準(zhǔn)：（1）研究對(duì)象符合結(jié)腸癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]，且經(jīng)病理學(xué)組織檢查確診；（2）患者術(shù)前未接受任何治療；（3）有完整的臨床資料和隨訪記錄；（4）研究經(jīng)過(guò)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)同意后進(jìn)行。

排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并其他惡性腫瘤；（2）患者重要器官存在嚴(yán)重功能障礙；（3）嚴(yán)重感染性疾病者；（4）對(duì)研究不能配合，依從性較差；（5）伴有精神疾病障礙。

1.2? ? 免疫組化法? ? 用免疫組化法檢測(cè)結(jié)腸癌組織及癌旁組織中THBS2、SLC11A1表達(dá)。結(jié)腸癌組織及癌旁組織經(jīng)石蠟包埋后以4 μm厚度連續(xù)切片，65 ℃烘烤2 h，然后進(jìn)行脫蠟；將EDTA緩沖液滴加至修復(fù)盒中，加熱后放入切片，進(jìn)行組織抗原修復(fù)；自然冷卻至室溫，PBS緩沖液沖洗3遍，各3 min；3%H₂O₂處理阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化酶活性；取用10%鼠抗人THBS2、SLC11A1抗體，在冰箱中4 ℃孵育；將蓋子打開(kāi)的濕盒放在37 ℃溫箱復(fù)溫30 min；在PBS緩沖液洗滌3次，每次5 min，甩掉表面液體；在每個(gè)切片中加入75 μL酶標(biāo)記的山羊抗鼠/兔IgG聚合物，用抗體覆蓋組織，37 ℃孵育30 min；用PBS沖洗切片3次，每次5 min；在每個(gè)切片中滴加20 μL 0.02%DAB溶液進(jìn)行顯色，純水終止顯色；蘇木精復(fù)染3 min；1%鹽酸酒精分化，切片置于無(wú)菌水中5 min，使其恢復(fù)藍(lán)色；切片在梯度酒精中依次脫水5 min；二甲苯透明；切片采用中性樹(shù)脂密封。

結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)染色強(qiáng)度評(píng)分，棕褐色3分、棕黃色2分、淡黃色1分、無(wú)色為0分。根據(jù)染色細(xì)胞占百分比評(píng)分，>75%為3分，51%～75%為2分，11%～50%為1分，≤10%為0分。將染色強(qiáng)度評(píng)分和染色范圍評(píng)分相乘計(jì)算結(jié)果，0～2分為低表達(dá)，3分以上為高表達(dá)。

1.3? ? 臨床病理資料收集? ? 收集患者臨床病理資料，包括年齡（≤55歲、>55歲）、性別（男、女）、腫瘤大小（≤5 cm、>5 cm）、分化程度（低分化、中+高分化）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（是、否）、血管浸潤(rùn)（是、否）、腫瘤浸潤(rùn)深度（T1+T2、T3+T4）、TNM分期（根據(jù)國(guó)際抗癌協(xié)會(huì)TNM分期方案[6]進(jìn)行分期）及病理分型（腫塊型、潰瘍型、浸潤(rùn)型）。

1.4? ? 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法? ? 使用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以百分比表示，采用χ²檢驗(yàn)，相關(guān)性檢驗(yàn)采用Pearson相關(guān)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? ? 結(jié)果

2.1? ? 結(jié)腸癌組織中THBS2、SLC11A1表達(dá)情況? ? THBS2在結(jié)腸癌組織中主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，SLC11A1在結(jié)腸癌組織中主要表達(dá)于細(xì)胞膜中，染色均呈現(xiàn)棕黃色；相較于癌旁正常組織，結(jié)腸癌組織中THBS2表達(dá)明顯降低，SLC11A1表達(dá)明顯升高（P<0.05），見(jiàn)圖1。

2.2? ? 結(jié)腸癌組織中THBS2、SLC11A1表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系? ? 結(jié)腸癌組織THBS2表達(dá)與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、血管浸潤(rùn)具有明顯相關(guān)性（P<0.05）；結(jié)腸癌組織SLC11A1表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤浸潤(rùn)深度、病理分型、TNM分期、血管浸潤(rùn)具有明顯相關(guān)性（P<0.05），見(jiàn)表1。

2.3? ? 結(jié)腸癌組織THBS2、SLC11A1表達(dá)與TANs浸潤(rùn)的關(guān)系? ? 結(jié)腸癌組織中THBS2表達(dá)與TANs浸潤(rùn)密度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.444，P<0.05），SLC11A1表達(dá)與TANs浸潤(rùn)密度呈正相關(guān)（r=0.355，P<0.05），見(jiàn)圖2。

3? ? 討論

結(jié)腸癌在全球惡性腫瘤死亡率中排名第三，盡管在結(jié)腸癌的診斷和治療方面取得了顯著進(jìn)展，但轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌的5年總生存率低于15%，早期診斷可提高5年生存率。限制結(jié)腸癌患者生存率和治愈率的主要因素是缺乏有效的轉(zhuǎn)移瘤治療策略，腫瘤及其與周?chē)M織的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移是患者死亡的主要原因。經(jīng)過(guò)根治性手術(shù)及術(shù)后輔助化療后患者病死率明顯降低，但仍有60%以上出現(xiàn)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。靶向藥物的開(kāi)發(fā)提高了晚期結(jié)腸癌患者的生存率和治愈率，尋找新方法早期預(yù)測(cè)、診斷和治療已成為延長(zhǎng)結(jié)腸癌患者生存期的主要研究方向[7]。

THBS2是基質(zhì)細(xì)胞Ca2+結(jié)合糖蛋白家族成員之一，與生長(zhǎng)因子、細(xì)胞受體和細(xì)胞外基質(zhì)相互作用，被認(rèn)為是一種強(qiáng)大的血管生成因子。其可通過(guò)與細(xì)胞表面結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)功能，包括血管生成、細(xì)胞黏附、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞運(yùn)動(dòng)等。近年來(lái)，有研究顯示，THBS2在腫瘤中發(fā)揮重要作用。Wang等研究發(fā)現(xiàn)，THBS2在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)與患者的生存呈時(shí)間依賴(lài)性相關(guān)，THBS2低表達(dá)可能會(huì)加速胃癌進(jìn)展，導(dǎo)致預(yù)后不良，THBS2水平越低，胃癌的分化程度越差[8]。Qu報(bào)道[9]，THBS2在結(jié)直腸腺瘤和結(jié)直腸癌正常鄰近組織中均表現(xiàn)出低甲基化。Xu等[10]發(fā)現(xiàn)結(jié)腸癌患者血漿中THBS2表達(dá)高于非癌癥對(duì)照。Gimotty PA等[11]確定THBS2可用于開(kāi)發(fā)高特異性的生物標(biāo)志物，用于檢測(cè)癌癥侵襲和預(yù)測(cè)對(duì)新輔助治療的反應(yīng)，以及針對(duì)相應(yīng)生物學(xué)機(jī)制的潛在多癌轉(zhuǎn)移抑制治療。本研究結(jié)果顯示，在結(jié)腸癌組織中THBS2表達(dá)明顯低于癌旁組織，且與患者分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、血管浸潤(rùn)明顯相關(guān)，與TANs浸潤(rùn)密度呈負(fù)相關(guān)。由此可見(jiàn)，在結(jié)腸癌中THBS2呈現(xiàn)低表達(dá)時(shí)腫瘤轉(zhuǎn)移及浸潤(rùn)惡性行為能力增強(qiáng)，可能促進(jìn)腫瘤惡性進(jìn)展。

SLC11A1在巨噬細(xì)胞的溶酶體區(qū)室和中性粒細(xì)胞的三級(jí)顆粒中表達(dá)，在對(duì)細(xì)胞內(nèi)微生物感染的先天抵抗中起關(guān)鍵作用。SLC11A2是鐵代謝的關(guān)鍵參與者，尤其是在近端十二指腸、未成熟的紅細(xì)胞、腦、胎盤(pán)和腎臟中普遍表達(dá)。SLC11A2對(duì)巨噬細(xì)胞功能產(chǎn)生多效性影響，包括增強(qiáng)腫瘤壞死因子-α、白細(xì)胞介素-1β、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶表達(dá)，對(duì)于自身免疫和癌癥的誘導(dǎo)和維持都很重要。相關(guān)資料顯示[12]，SLC11A1 的轉(zhuǎn)錄抑制導(dǎo)致細(xì)胞增殖和存活，如果不加以控制，可能導(dǎo)致癌癥和自身免疫。本研究結(jié)果顯示，結(jié)腸癌組織中SLC11A1表達(dá)明顯高于癌旁組織，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤浸潤(rùn)深度、病理分型、TNM分期、血管浸潤(rùn)明顯相關(guān)，與TANs浸潤(rùn)密度呈正相關(guān)。由此可見(jiàn)，SLC11A1在結(jié)腸癌表達(dá)上調(diào)可調(diào)控腫瘤的轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)等惡性行為，有望成為結(jié)腸癌預(yù)后標(biāo)志物和佐劑靶點(diǎn)，為改善患者預(yù)后奠定基礎(chǔ)。

綜上所述，在結(jié)腸癌組織中THBS2、SLC11A1均呈現(xiàn)異常表達(dá)，與TANs浸潤(rùn)相互作用共同促進(jìn)結(jié)腸癌的惡性進(jìn)程，推測(cè)兩指標(biāo)可作為潛在的結(jié)腸癌臨床預(yù)后因子。

參考文獻(xiàn)

[1]? ? 秦超，馮永海，楊閃閃，等.結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1表達(dá)與肺鱗狀細(xì)胞癌和肺腺癌細(xì)胞順鉑耐藥性的相關(guān)性[J].新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2021，38（3）：249-254.

[2]? ? 馬波，張忠民.手術(shù)前外周血中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞的比值與直腸癌癌細(xì)胞遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的相關(guān)性分析[J].當(dāng)代醫(yī)藥論叢，2020，18（16）：18-20.

[3]? ?DENG B，LIU X P，WANG X.Prognostic and Immunological Role of THBS2 in Colorectal cancer[J].Biomed Res Int，2021，21：1124985.

[4]? PERRY I D，KRISHNAN L，MURPHY S P.SLC11A1 is expressed in the human placenta across multiple gestational ages[J].Placenta，2019，75：23-26.

[5]? ? 中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)，中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)大腸癌專(zhuān)業(yè)委員會(huì).中國(guó)惡性腫瘤整合診治指南—結(jié)腸癌部分[J/CD].中華結(jié)直腸疾病電子雜志，2022，11（1）：1-12I0001-I0004.

[6]? ?Pineros M，Parkin D M，Ward K，et al.Essential TNM：a registry tool to reduce gaps in cancer staging information[J].Lancet Oncol，2019，20（2）：e103-e111.

[7]? ? 王嘉源，董衛(wèi)國(guó).結(jié)腸癌靶向治療研究[J].胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志，2020，29（7）：721-725.

[8]? ?WANG Y，ZHENG K，CHEN X，et al.Bioinformatics analysis identifies COL1A1，THBS2 and SPP1 as potential predictors of patient prognosis and immunotherapy response in gastric cancer[J].Biosci Rep，2021，41（1）：BSR20202564.

[9]? ? QU H L，HASEN G W，HOU Y Y，et al.THBS2 promotes cell migration and invasion in colorectal cancer via modulating Wnt/β-catenin signaling pathway[J].Kaohsiung J Med Sci，2022，38（5）：469-478.

[10]? ?XU C，GU L，KUERBANJIANG M，et al.Thrombospondin 2/Toll-Like Receptor 4 Axis Contributes to HIF-1α-Derived Glycolysis in Colorectal Cancer[J].Front Oncol，2020，10：557730.

[11]? ?GIMOTTY P A，TILL J E，UDGATA S，et al.THSB2 as a prognostic biomarker for patients diagnosed with metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma[J].Oncotarget，2021，12（22）：2266-2272.

[12]? ?XU Y Z，THURAISINGAM T，KANAGARATHAM C，et al.c-Src kinase is involved in the tyrosine phosphorylation and activity of SLC11A1 in differentiating macrophages[J].PLoS One，2018，13（5）：e0196230.

（收稿日期：2023-04-12）