張穎 陳華

[摘要]近年來，已經(jīng)開發(fā)出不同的自體血小板濃縮物，例如富血小板血漿（Platelet-rich plasma，PRP））和富血小板纖維蛋白（Platelet-rich fibrin，PRF）。注射型富血小板纖維蛋白（Injectable platelet-rich fibrin，i-PRF）作為PRF衍生物中唯一以液體形式獲得的產(chǎn)物，不僅保留了PRF在創(chuàng)面治療中的獨(dú)特優(yōu)勢（如：持續(xù)釋放生長因子，促進(jìn)新生血管生成，細(xì)胞遷移、增殖和分化），低速離心后更是顯著增加了白細(xì)胞和血小板數(shù)量以及生長因子濃度。同時(shí)還可以達(dá)到最大化注射，并能夠與其他生物材料聯(lián)用，因此在創(chuàng)面修復(fù)領(lǐng)域受到廣泛關(guān)注。本文就i-PRF在創(chuàng)面修復(fù)治療中的應(yīng)用現(xiàn)狀進(jìn)行綜述。

[關(guān)鍵詞]注射型富血小板纖維蛋白；創(chuàng)面修復(fù)；富血小板血漿；富血小板纖維蛋白

[中圖分類號(hào)]R641? ? [文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A? ? [文章編號(hào)]1008-6455（2023）11-0202-03

Research Progress of Injectable Platelet-rich Fibrin in Wound Repair

ZHANG Ying，CHEN Hua

（Department of Plastic and Cosmetic Surgery，the First Hospital of Inner Mongolia Medical University，Hohhot 010050，Inner Mongolia，China）

Abstract： In recent years， different autologous platelet concentration techniques have been developed， such as platelet-rich plasma （PRP） and platelet-rich fibrin （PRF）.As the only liquid product of PRF derivatives， injectable platelet-rich fibrin （i-PRF） not only retains the unique advantages of PRF in wound treatment （such as continuous release of growth factors， promoting neovascularization， cell migration， proliferation and differentiation）， but also significantly increases the number of white blood cells and platelets and the concentration of growth factors after low-speed centrifugation.At the same time， it can achieve maximum injection and can be used in conjunction with other biomaterials， so it has attracted wide attention in the field of wound repair.This article reviews the application of i-PRF in wound repair.

Key words： injectable platelet-rich fibrin; wound repair; platelet-rich plasma; platelet-rich fibrin

創(chuàng)面修復(fù)是一個(gè)動(dòng)態(tài)而復(fù)雜的過程，涉及生長因子、細(xì)胞因子、趨化因子和各種細(xì)胞之間的多種協(xié)調(diào)，相互作用[1]。修復(fù)過程中的任何失敗都可能導(dǎo)致慢性傷口或瘢痕的形成。事實(shí)上，隨著現(xiàn)代文明和經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人們的注意力正在從傷口是否會(huì)愈合或愈合過程需要多長時(shí)間轉(zhuǎn)移到傷口愈合對(duì)身體機(jī)能和人的容貌的影響上來。常規(guī)傷口治療通常包括選擇合適的敷料以維持良好的傷口愈合環(huán)境、控制感染、清創(chuàng)組織等方法，并且近年來，臨床上也已開發(fā)了許多用于局部傷口的臨床藥物，然而，大多數(shù)藥物似乎只是具有藥理作用的簡單活性成分，并可能對(duì)身體產(chǎn)生某些副作用[2]。因此臨床上需要療效更好、副作用更少的傷口修復(fù)產(chǎn)品。

i-PRF作為PRF的液體制劑，不含PRP中的任何抗凝劑或PRF中的纖維蛋白基質(zhì)[3]。液體形式的存在使得它可以很容易地被注入并填充不規(guī)則的吸收腔和傳統(tǒng)治療方式難以進(jìn)入的區(qū)域。同時(shí)，由于其含有大量的血小板和白細(xì)胞，與其他血小板濃縮物相比，它具有針對(duì)細(xì)菌脂多糖的抗菌效力，可以發(fā)揮更強(qiáng)的抗菌和抗生物膜活性[4]，從而在創(chuàng)面愈合過程中發(fā)揮重要作用。鑒于其良好的生物學(xué)特性和在創(chuàng)面修復(fù)領(lǐng)域的應(yīng)用前景，本文就i-PRF在創(chuàng)面修復(fù)治療中的應(yīng)用現(xiàn)狀做一綜述。

1? i-PRF的衍生過程

血小板濃縮物于20世紀(jì)80年代初被Coccheri等首先提出，富血小板血漿（PRP）是第一代血小板濃縮物。由于PRP制備過程中加入的抗凝劑能夠抑制組織再生，因此限制了其在臨床上的應(yīng)用[5]。2000年，由法國Choukroun教授等首先研制出PRF，作為第二代血小板濃縮制品主要成分為血小板、纖維蛋白及白細(xì)胞，且不含抗凝劑[6]。2014年，Ghanaati等研制出了APRF，與傳統(tǒng)的PRF相比，含有更高水平的血小板和血小板源性生長因子。但因其具有疏松的三維結(jié)構(gòu)，生物相容性較差，臨床應(yīng)用受到限制[7]。2015年，Mour?o等提出了注射型富血小板纖維蛋白這一概念。研究建議使用普通塑料管以3 300 rpm的速度將新鮮血液離心2 min，i-PRF可通過該塑料管從管頂部吸出[8]。2017年，Choukroun和Miron等提出了制備i-PRF的低速離心概念。低速離心理論認(rèn)為，使用普通塑料管將新鮮血液以700 rpm離心3 min來制備i-PRF，其原理是較慢的離心速度或較小的離心力會(huì)減少細(xì)胞的沉降率，從而形成具有更多血小板和白細(xì)胞的濃縮物，這意味著各種生長因子的釋放增加以及膠原蛋白1 mRNA水平的增加[9-10]。

2? i-PRF在創(chuàng)面修復(fù)治療中的應(yīng)用現(xiàn)狀

2.1 體外研究：關(guān)于i-PRF的再生潛力，Hugo HA等[11]在一項(xiàng)對(duì)比i-PRF和外周血中血細(xì)胞含量，I型膠原蛋白表達(dá)、生長因子釋放情況及形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)的體外研究中發(fā)現(xiàn)。i-PRF組含有更高濃度的血小板和白細(xì)胞，并檢測到i-PRF中VEGF和PDGF大量釋放。免疫組化結(jié)果顯示與外周血相比，i-PRF組檢測到更高的TGF-β、IL-10和骨鈣素，RT-PCR結(jié)果顯示i-PRF中含有更高的I型膠原蛋白的表達(dá)。掃描電鏡顯示i-PRF具有致密的纖維蛋白三維網(wǎng)狀支架結(jié)構(gòu)，并使得血小板和白細(xì)胞均勻分布其中。且支架結(jié)構(gòu)在孵育7 d時(shí)仍可保持完整，而外周血在第7天時(shí)，已經(jīng)出現(xiàn)了溶血跡象。此外，纖維蛋白不僅可以充當(dāng)傷口愈合的支架，使細(xì)胞在組織愈合部位黏附聚集，還可以作為控釋系統(tǒng)中生長因子的載體，在創(chuàng)面愈合過程中維持生物活性[12]。研究最終證實(shí)，i-PRF在促進(jìn)創(chuàng)面愈合過程中能夠發(fā)揮積極作用，并且在再生領(lǐng)域具有巨大潛力。同樣，Wang X等[13]在一項(xiàng)比較i-PRF和PRP對(duì)皮膚成纖維細(xì)胞再生潛力影響的研究中也發(fā)現(xiàn)，相比PRP，i-PRF可以更顯著地刺激人皮膚成纖維細(xì)胞的遷移和增殖，增加生長因子和細(xì)胞外基質(zhì)分子的細(xì)胞mRNA水平，并進(jìn)一步改善膠原蛋白的合成。這說明i-PRF相比于其他血小板濃縮物具有更高的生物活性以及更強(qiáng)的再生潛力。

關(guān)于i-PRF的體外抗菌效果和抗生物膜活性，Kour P等[14]在評(píng)估i-PRF對(duì)牙齦卟啉單胞菌和伴放線桿菌的體外抗菌功效時(shí)，觀察到相比于PRF和PRP，i-PRF表現(xiàn)出的抗菌活性最高。Azade A等[15]在一項(xiàng)評(píng)估含有三種抗生素混合物的i-PRF支架對(duì)奈氏放線菌（A.naeslundi）和糞腸球菌（E.faecalis）生物膜的抗菌性能的研究中發(fā)現(xiàn)，相比于單獨(dú)應(yīng)用三種抗生素混合物，研究者開發(fā)的新型抗生素洗脫i-PRF支架顯著減少細(xì)菌總量和活細(xì)菌的數(shù)量。并進(jìn)一步強(qiáng)調(diào)了新型支架抗雙物種生物膜（糞大腸桿菌和奈瑟菌）的潛力。Sharmila SAT等[16]在評(píng)估i-PRF對(duì)葡萄球菌的體外抗菌和抗生物膜作用的研究中發(fā)現(xiàn)i-PRF對(duì)弱、中和強(qiáng)生物膜產(chǎn)生葡萄球菌菌株都能表現(xiàn)出廣譜活性，并顯著減少生物膜的數(shù)量。并進(jìn)一步推斷i-PRF可以作為抗微生物肽和潛在的生物活性劑來預(yù)防創(chuàng)面感染。體外研究表明，i-PRF具有優(yōu)異的體外抗菌效果和廣泛的抗生物膜活性。

2.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：劉小嘉等[17]通過將i-PRF用于治療大鼠深Ⅱ度燒傷創(chuàng)面，最終證實(shí)i-PRF可在一段時(shí)間內(nèi)增加創(chuàng)面VEGF的含量，促進(jìn)肉芽組織生成，降低創(chuàng)面炎癥反應(yīng)。提高愈合質(zhì)量。Zhang J等[18]將12只成年Wistar大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和i-PRF組，將一只大鼠的雙側(cè)腓腸肌分別制成5 mm深的切口，取出10 mm×5 mm×5 mm的肌肉組織而不出血。立即將i-PRF加入合適大小的明膠海綿中，使其轉(zhuǎn)化為凝膠狀態(tài)，向一只大鼠的左右肌肉缺損模型中分別植入明膠海綿、金黃色葡萄球菌（GS+SA）和明膠海綿，金黃色葡萄球菌和i-PRF（GS+SA+i-PRF）。術(shù)后3 d時(shí)分別予以蘇木精和伊紅染色，進(jìn)行組織學(xué)觀察，發(fā)現(xiàn)i-PRF組中炎性細(xì)胞浸潤較少，添加i-PRF顯著降低了局部先天免疫細(xì)胞的數(shù)量，并證實(shí)了i-PRF的抗炎作用，有利于創(chuàng)面愈合。Amira AM等[19]在探討i-PRF和褪黑激素對(duì)糖尿病大鼠頜下腺傷口愈合影響的一項(xiàng)研究中。將大鼠隨機(jī)分為三組，糖尿病誘導(dǎo)成功后，在大鼠的頜下腺中制造標(biāo)準(zhǔn)的手術(shù)缺損，28 d后取局部組織進(jìn)行組織學(xué)和生物化學(xué)分析。相比于褪黑激素，i-PRF組創(chuàng)面顯著減小，表現(xiàn)出更強(qiáng)的再生能力，并形成了大量的血管、腺泡和導(dǎo)管。除此之外，與褪黑激素組相比，i-PRF組VEGF表達(dá)顯著增加。最終推斷i-PRF是改善糖尿病大鼠頜下腺傷口愈合的候選藥物。這說明i-PRF能夠通過調(diào)節(jié)炎癥和刺激趨化的免疫過程，從而促進(jìn)創(chuàng)面的愈合。

2.3 臨床研究：Xue X等[20]在一項(xiàng)評(píng)估i-PRF聯(lián)合封閉式負(fù)壓引流（VSD）技術(shù)對(duì)慢性難愈性創(chuàng)面炎癥反應(yīng)和瘢痕形成的影響的研究中發(fā)現(xiàn)，相比單獨(dú)應(yīng)用VSD，使用i-PRF/VSD可以明顯縮短創(chuàng)面愈合時(shí)間、住院時(shí)間，顯著降低患者的WBC計(jì)數(shù)、CRP和IL-6水平。減輕炎癥反應(yīng)并改善瘢痕形成，并推斷這是因?yàn)閕-PRF聯(lián)合VSD促進(jìn)了外周血液循環(huán)和細(xì)胞生長和代謝，有利于減少感染的發(fā)生，從而促進(jìn)慢性難愈性創(chuàng)面的愈合。同樣，陳道才等[21]在一項(xiàng)利用i-PRF/VSD治療慢性難愈性創(chuàng)面的研究中，通過觀察患者創(chuàng)面細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果、炎癥指標(biāo)、記錄肉芽生長情況、創(chuàng)面愈合時(shí)間等，證實(shí)i-PRF聯(lián)合VSD治療慢性創(chuàng)面相比于單純應(yīng)用VSD技術(shù)可以更加有效地控制創(chuàng)面感染，減輕患者疼痛，加速創(chuàng)面愈合，有一定的臨床推廣價(jià)值。

Shashank B等[22]將i-PRF應(yīng)用于胸造口術(shù)后難治性深創(chuàng)面，治療前傷口有大量惡臭性分泌物，深約5 cm，大小約5 cm×5 cm。傷口局部使用i-PRF，7 d后局部滲出物明顯減少，經(jīng)過3次治療，傷口完全愈合。Mehmet M等[23]為了探討i-PRF對(duì)游離齦移植術(shù)后腭部傷口愈合的影響，在試驗(yàn)的第3、7、14天和第1個(gè)月通過H2O2試驗(yàn)，VAS、MSS和LTH指數(shù)評(píng)估傷口愈合情況，在第3、7天評(píng)估出血狀態(tài)，在第1個(gè)月和第3個(gè)月通過基線測量方法測量腭組織厚度。最終證實(shí)，i-PRF可以顯著增強(qiáng)傷口上皮化程度，加速創(chuàng)面愈合，有良好的止血效果，減輕患者疼痛，提高患者生活質(zhì)量。這表明，當(dāng)i-PRF單獨(dú)應(yīng)用于創(chuàng)面時(shí)，對(duì)創(chuàng)面愈合起到了積極作用。

2019年，Bennardo F等[24]將i-PRF用于治療繼發(fā)于藥物相關(guān)頜骨壞死（MRONJ）的面部皮膚竇道。共治療了8例診斷為MRONJ和面部竇道的患者，從手術(shù)治療當(dāng)天開始，每周在瘺管周圍注射1 ml i-PRF，經(jīng)過4次治療，4周后7例患者顯示瘺管完全愈合。研究結(jié)果表明，i-PRF可以促進(jìn)皮膚黏膜軟組織的愈合，減輕疼痛，改善患者的生活質(zhì)量，以非手術(shù)的方式達(dá)到美學(xué)效果。2020年，一項(xiàng)關(guān)于使用改良型富血小板的纖維蛋白（A-PRF）和i-PRF在治療繼發(fā)MRONJ的面部皮膚竇道的5年隨訪病例報(bào)告中顯示[25]，使用APRF膜和i-PRF治療繼發(fā)于MRONJ的皮膚竇道，可以減少局部感染，減輕患者的疼痛。并且使用i-PRF可以加速皮膚竇道的愈合，隨訪5年內(nèi)沒有復(fù)發(fā)。這說明，當(dāng)i-PRF與其他生物活性物質(zhì)聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，可以更好地促進(jìn)創(chuàng)面修復(fù)，提高患者的生活質(zhì)量。

3? 小結(jié)和展望

從第一代血小板濃縮物（PRP）問世至今，人們通過不斷改進(jìn)制備方式和方法，促進(jìn)了血小板濃縮物的更新?lián)Q代，使其物理特性和生物學(xué)性能被更好地表現(xiàn)出來?，F(xiàn)如今，血小板濃縮物已經(jīng)成熟地應(yīng)用于醫(yī)學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域中[26]，通過將自體來源的高濃度的血小板和生長因子直接作用于組織，從而發(fā)揮促進(jìn)細(xì)胞的遷移和分化及新生血管的生成等生物學(xué)效應(yīng)，進(jìn)而促進(jìn)創(chuàng)面的修復(fù)。

就目前血小板濃縮物的研究現(xiàn)狀而言，i-PRF作為第二代血小板濃縮物，相比PRP的明顯優(yōu)勢在于它是完全自體的，不含任何外部添加劑，并且具有優(yōu)越的生物活性（如具有更高的生長因子含量和釋放）[27]。與其他類型的PRF衍生物相比，它是液體形式，可以很容易地被注入并填充不規(guī)則的吸收腔和傳統(tǒng)治療方式難以進(jìn)入的區(qū)域；經(jīng)過低速離心后還可顯著增加再生細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板數(shù)量以及生長因子濃度[10]?？偠灾?，i-PRF可以更好地發(fā)揮濃縮血小板的有效性，以及它允許包含各種生物材料的通用性。

如何更好地發(fā)揮上述的生物學(xué)效應(yīng)，延長作用時(shí)間仍是該領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。然而，在積極開展i-PRF應(yīng)用于創(chuàng)面修復(fù)治療研究的同時(shí)，仍需進(jìn)一步明確i-PRF中各種生長因子發(fā)揮作用的分子機(jī)制，從而達(dá)到更好的組織修復(fù)效果。同時(shí)，進(jìn)一步的研究還可以深入了解速度、時(shí)間和離心角度的變化對(duì)i-PRF的組成和生物活性的影響。

總而言之，i-PRF作為一種多功能生長因子釋放生物材料，在創(chuàng)面修復(fù)領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用潛力。相信在不久的將來，通過對(duì)i-PRF促進(jìn)創(chuàng)面修復(fù)幫助組織再生領(lǐng)域潛力的不斷挖掘，i-PRF將展現(xiàn)出更為廣闊的應(yīng)用前景。

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[收稿日期]2023-01-04

本文引用格式：張穎，陳華.可注射型富血小板纖維蛋白在創(chuàng)面修復(fù)治療中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].中國美容醫(yī)學(xué)，2023，32（11）：202-205.