周亞茹 肖凱 張愛(ài)冬 吳雪霞

doi：10.7606/j.issn.1004-1389.2024.07.011

https：//doi.org/10.7606/j.issn.1004-1389.2024.07.011

收稿日期：2023-06-16? 修回日期：2023-08-04

基金項(xiàng)目：國(guó)家大宗蔬菜產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項(xiàng)目（CARS-25）。

第一作者：周亞茹，女，碩士研究生，研究方向?yàn)榉肿舆z傳育種。E-mail：yaruzhou153@163.com

通信作者：吳雪霞，女，博士，研究員，研究方向?yàn)榉肿舆z傳育種。E-mail：wuxuexiarose@sohu.com

摘? 要? WRKY轉(zhuǎn)錄因子在各種生理過(guò)程和逆境反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，為了探究茄子轉(zhuǎn)錄因子 SmeWRKY53抗逆性，對(duì) SmeWRKY53的啟動(dòng)子元件進(jìn)行預(yù)測(cè)分析，運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）檢測(cè) SmeWRKY53在不同非生物脅迫中表達(dá)量的變化，通過(guò)遺傳轉(zhuǎn)化在茄子中過(guò)表達(dá) SmeWRKY53，并對(duì)過(guò)表達(dá)茄子苗期耐鹽性進(jìn)行鑒定。啟動(dòng)子元件預(yù)測(cè)分析結(jié)果顯示，該基因啟動(dòng)子序列不僅有啟動(dòng)子基本轉(zhuǎn)錄元件，還含有TC-rich repeats、CGTCA-motif、TGACG-motif等與脅迫相關(guān)的抗逆元件。實(shí)時(shí)熒光定量（qRT-PCR）結(jié)果顯示 SmeWRKY53能夠響應(yīng)高溫、低溫、干旱以及鹽脅迫處理，且在鹽脅迫條件下可以被顯著誘導(dǎo)。在茄子中過(guò)表達(dá) SmeWRKY53可以提高植株的耐鹽能力。生理指標(biāo)檢測(cè)表明，鹽脅迫條件下，過(guò)表達(dá)植株體內(nèi)丙二醛（MDA）含量積累顯著低于對(duì)照。同時(shí)過(guò)表達(dá)植株細(xì)胞內(nèi)脯氨酸、可溶性蛋白的含量和抗氧化酶［過(guò)氧化氫酶（CAT）和過(guò)氧化物酶活（POD）］的活性顯著高于對(duì)照植株。對(duì)鹽脅迫相關(guān)基因（ SmeSOS1、 SmeCIPK3 和 SmeNHX1）的表達(dá)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，鹽脅迫處理顯著誘導(dǎo)了相關(guān)基因（ SmeSOS1、 SmeCIPK3 和 SmeNHX1）的表達(dá)，且過(guò)表達(dá)植株中的表達(dá)顯著高于對(duì)照。這些結(jié)果表明茄子 SmeWRKY53能正調(diào)控提高茄子對(duì)鹽脅迫的耐受性，對(duì)后續(xù)研究 SmeWRKY53基因在茄子耐鹽脅迫中的分子機(jī)制提供了理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞? 茄子；轉(zhuǎn)錄因子； SmeWRKY53；非生物脅迫；耐鹽性

茄子為茄科茄屬一年生植物，起源于亞洲東南熱帶地區(qū)［1］，是世界范圍內(nèi)廣泛種植的重要的經(jīng)濟(jì)蔬菜［2］。在低溫、高溫、干旱和鹽脅迫等逆境條件下，茄子的生長(zhǎng)和產(chǎn)量會(huì)受到嚴(yán)重的損害。茄子作為喜溫型蔬菜，35? ℃以上高溫時(shí)茄子生長(zhǎng)發(fā)育的各個(gè)階段都會(huì)受到高溫脅迫影響［3］。低溫脅迫下茄子產(chǎn)量和品質(zhì)會(huì)受到嚴(yán)重的影響［4］。干旱也是影響茄子發(fā)育的一個(gè)重要原因，在干旱條件下茄子植株發(fā)育不良，易形成短柱花使果實(shí)發(fā)育受阻，果形小而且沒(méi)有光澤［5］。

鹽脅迫是世界范圍內(nèi)最有害的非生物脅迫之一，通過(guò)影響細(xì)胞生長(zhǎng)和代謝過(guò)程來(lái)?yè)p害植物的生產(chǎn)力，對(duì)種子萌發(fā)、幼苗生長(zhǎng)和作物產(chǎn)量造成不可逆的損害［6］，嚴(yán)重限制了植物生長(zhǎng)。設(shè)施栽培條件下的連作以及化肥肥料的過(guò)度使用使得土壤鹽漬化情況越來(lái)越嚴(yán)重，對(duì)農(nóng)作物的產(chǎn)量和品質(zhì)造成重大損失［7］。挖掘耐鹽基因是提高植株耐鹽性，選育耐鹽品種的有效手段。

在大多數(shù)真核植物中，轉(zhuǎn)錄因子家族（WRKY、MADS-box和MYB）激活獨(dú)特的細(xì)胞水平的非生物和生物脅迫響應(yīng)策略，被認(rèn)為是防御和發(fā)育過(guò)程的關(guān)鍵決定因素［8］。據(jù)報(bào)道，一些轉(zhuǎn)錄因子在植物對(duì)鹽脅迫的響應(yīng)中發(fā)揮核心作用。在馬鈴薯中發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)NAC轉(zhuǎn)錄因子 StNAC053提高擬南芥耐鹽耐旱性［9］。秋葵中在鹽脅迫下轉(zhuǎn)錄因子 AeNAC83基因顯著上調(diào)，在擬南芥中過(guò)表達(dá) AeNAC83基因發(fā)現(xiàn)，過(guò)表達(dá)的擬南芥植株耐鹽性有很大的提高［10］。番茄中轉(zhuǎn)錄因子 SlWRKY3的表達(dá)受外界鹽脅迫誘導(dǎo)，且過(guò)表達(dá)番茄轉(zhuǎn)基因株系具有更高的耐鹽性［11］。蕎麥中的 FtMYB9在擬南芥中異源過(guò)表達(dá)會(huì)大大增強(qiáng)擬南芥耐鹽性［12］。另外已有研究發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子 SmERF1在茄子鹽脅迫中起正向調(diào)節(jié)作用，通過(guò)對(duì) SmERF1的沉默顯著增強(qiáng)了植物對(duì)鹽脅迫的敏感性并下調(diào)了鹽脅迫防御相關(guān)標(biāo)記基因［13］。

在本研究中，鹽脅迫處理可以顯著誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子 SmeWRK53的表達(dá)。通過(guò)基因過(guò)表達(dá)對(duì) SmeWRKY53的功能進(jìn)行驗(yàn)證，通過(guò)表型觀測(cè)、生理指標(biāo)和相關(guān)基因表達(dá)檢測(cè)結(jié)果表明過(guò)表達(dá) SmeWRKY53增強(qiáng)了植株的耐鹽能力，該基因可以正向調(diào)控茄子耐鹽性。

1? 材料與方法

1.1? 植物材料

供試茄子品種‘卜麗卡由上海市農(nóng)科院設(shè)施園藝所提供。

1.2? 試驗(yàn)方法

1.2.1? SmeWRKY53基因啟動(dòng)子序列的獲得以及順式作用元件分析? 利用茄子基因數(shù)據(jù)庫(kù)網(wǎng)站（http：//eggplant.kazusa.or.jp/）下載茄子基因組，提取 SmeWRKY53基因5端上游2 000 bp序列作為啟動(dòng)子序列，然后在PlantCARE數(shù)據(jù)庫(kù)中（https：//bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/plantcare/html/）進(jìn)行順式作用元件預(yù)測(cè)分析。

1.2.2? 茄子幼苗非生物脅迫處理? 挑選飽滿(mǎn)均勻的‘卜麗卡茄子種子播入發(fā)芽盒中，28? ℃暗處理催芽，待露白后轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱，培養(yǎng)條件為溫度26 ℃，光照度4 000 lx，光照時(shí)間12 h，相對(duì)濕度為65%。待長(zhǎng)出真葉后移栽至轉(zhuǎn)入營(yíng)養(yǎng)缽中，培養(yǎng)條件同上。植株長(zhǎng)至4～5片真葉時(shí)進(jìn)行低溫、高溫、干旱脅迫和鹽脅迫處理。

低溫脅迫處理時(shí)，培養(yǎng)條件為溫度4 ℃，光照度4 000 lx，光照時(shí)間12 h，相對(duì)濕度為65%；高溫脅迫處理時(shí)，培養(yǎng)條件為溫度45 ℃，光照度? 4 000 lx，光照時(shí)間12 h，相對(duì)濕度為65%；干旱脅迫處理時(shí)，用含15%的PEG6000的營(yíng)養(yǎng)液澆灌幼苗，培養(yǎng)條件為溫度26 ℃，光照度4 000 lx，光照時(shí)間12 h，相對(duì)濕度為65%；鹽脅迫處理時(shí)，營(yíng)養(yǎng)液中NaCl的濃度為150 mmol/L，培養(yǎng)條件為溫度26 ℃，光照度4 000 lx，光照時(shí)間12 h，相對(duì)濕度為65%。

不同脅迫處理均于處理后0 h、0.5 h、1 h、? 2 h、3 h、6 h、12 h和24 h取苗子葉片進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.3? 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）? 樣品總RNA的提取以及cDNA第一條鏈的合成植物RNA提取試劑盒和cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒（均購(gòu)于艾克瑞生物工程有限公司），操作按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。以cDNA為模板， EF1α作為內(nèi)參，使用2×Taq SYBR Green qPCR Premix（購(gòu)自諾唯贊生物科技股份有限公司）檢測(cè) SmeWRKY53在茄子葉片中的表達(dá)量。在 qPCR 儀（BIO-RAD CFX96）設(shè)置反應(yīng)程序 ：95 ℃ 30 s ；95 ℃ 10 s，60 ℃ 30 s，40 個(gè)循環(huán)；95 ℃ 15 s ；60 ℃ 60 s ；? 95 ℃ 15 s。各樣品 3 次重復(fù)，2-△△Ct采用文獻(xiàn)［14］公式計(jì)算基因相對(duì)表達(dá)水平。所用引物如表1? 所示。

1.2.4? 轉(zhuǎn)基因茄子（SmeWRKY53-OE）的獲得? 以茄子葉片cDNA為模板，PCR擴(kuò)增? SmeWRKY53? CDS序列，將擴(kuò)增產(chǎn)物連接至pCambia2301，并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞。重組質(zhì)粒驗(yàn)證后轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌GV3101感受態(tài)細(xì)胞。通過(guò)農(nóng)桿菌侵染下胚軸，獲得 SmeWRKY53過(guò)表達(dá)T0代植株。

1.2.5? 過(guò)表達(dá)茄子鹽脅迫處理以及生理指標(biāo)檢測(cè)? 將轉(zhuǎn)基因（T1）和野生型茄子種子平鋪于發(fā)芽盒，操作同“1.2.2”。待苗子長(zhǎng)至4～5片真葉分別挑選生長(zhǎng)狀態(tài)一致的轉(zhuǎn)基因及野生型植株，提取其RNA并反轉(zhuǎn)錄為第一鏈cDNA進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證 SmeWRKY53的表達(dá)量。對(duì)陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因植株和WT植株進(jìn)行鹽脅迫處理，使用200 mmol/L? NaCl連續(xù)灌溉兩周，分別于處理后0 h、6 h、12 h、24 h、48 h和14 d取樣，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)將所取樣品進(jìn)行混樣檢測(cè)生理指標(biāo)，每次試驗(yàn)3次重復(fù)。丙二醛（MDA）含量、蛋白含量、脯氨酸含量及過(guò)氧化物酶（CAT）和過(guò)氧化氫酶（POD）活性測(cè)定試劑盒均于蘇州科銘生物技術(shù)有限公司購(gòu)買(mǎi)，檢測(cè)方法參考試劑盒說(shuō)明書(shū)。

2? 結(jié)果與分析

2.1? SmeWRKY53基因啟動(dòng)子序列元件分析

利用PlantCARE在線數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì) SmeWRKY53基因啟動(dòng)子元件進(jìn)行預(yù)測(cè)，結(jié)果顯示（表2）， SmeWRKY53啟動(dòng)子除有啟動(dòng)子基本轉(zhuǎn)錄元件TATA-box外，還有一個(gè)防御和應(yīng)激反應(yīng)的順式作用元件TC-rich repeats以及6個(gè)參與茉莉酸反應(yīng)的順式作用元件， SmeWRKY53啟動(dòng)子中順式作用元件如圖1所示。

2.2? 轉(zhuǎn)錄因子SmeWRKY53在非生物脅迫下的表達(dá)模式分析

通過(guò)RT-qPCR分別檢測(cè) SmeWRKY53在高溫、低溫、鹽脅迫以及干旱脅迫下的表達(dá)動(dòng)態(tài)。結(jié)果表明（圖2），低溫脅迫處理后， SmeWRKY53的表達(dá)量在前3 h變化不明顯，到6 h時(shí)顯著升高，6 h之后 SmeWRKY53表達(dá)量逐漸下降；高溫脅迫處理后， SmeWRKY53的表達(dá)量前6 h變化不明顯，在12 h時(shí)表達(dá)量最高，隨后 SmeWRKY53的表達(dá)量逐漸下降；干旱脅迫處理后， SmeWRKY53的表達(dá)量無(wú)明顯變化；鹽脅迫處理后，1 h可檢測(cè)到 SmeWRKY53表達(dá)量的顯著升高，在1 h后 SmeWRKY53的表達(dá)量明顯下降。以上結(jié)果表明 SmeWRKY53在茄子中能夠響應(yīng)低溫、高溫、干旱以及鹽脅迫，推測(cè)其可能在茄子遭受非生物脅迫時(shí)發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。

2.3? ?SmeWRKY53過(guò)表達(dá)茄子植株的鑒定

通過(guò)克隆質(zhì)粒上的片段來(lái)驗(yàn)證陽(yáng)性植株（圖3）并且通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR（qRT-PCR）來(lái)驗(yàn)證陽(yáng)性植株的 SmeWRKY53的表達(dá)量（圖4）。共得到 SmeWRKY53過(guò)表達(dá)陽(yáng)性植株22棵（OE1-OE18）。

2.4? 過(guò)表達(dá)SmeWRKY53植株鹽脅迫下表型分析

對(duì)SmeWRKY53過(guò)表達(dá)植株進(jìn)行鹽脅迫處理，使用濃度為200 mmol/L的NaCl溶液連續(xù)灌溉兩周，觀察植株表型。由圖5可知，鹽脅迫處理下均會(huì)對(duì)過(guò)表達(dá)和野生型植株造成傷害，野生型‘卜麗卡在鹽脅迫處理后48 h葉片變黃，過(guò)表達(dá)植株在處理14 d后變黃，與處理0 h相比，野生型植株在14 d鹽脅迫后生長(zhǎng)明顯受到限制，而過(guò)表達(dá)植株在處理14 d后有明顯的成長(zhǎng)。

2.5? 鹽脅迫處理SmeWRKY53過(guò)表達(dá)植株的理化指標(biāo)分析

通過(guò)對(duì)鹽脅迫處理后野生型茄子植株和 SmeWRKY53過(guò)表達(dá)植株的MDA含量、可溶性蛋白含量、過(guò)氧化氫酶（CAT）活性、過(guò)氧化物酶（POD）活性以及脯氨酸（Pro）含量進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明，在0 h時(shí)過(guò)表達(dá)植株與野生型的MDA含量無(wú)明顯差異，鹽脅迫處理后，MDA的含量總體呈升高趨勢(shì)（圖6-A），且野生型植株的MDA含量顯著高于過(guò)表達(dá)植株。

可溶性蛋白含量測(cè)定結(jié)果（圖6-B）顯示，未處理時(shí)過(guò)表達(dá)植株的可溶性蛋白顯著高于野生型植株，鹽脅迫處理后過(guò)表達(dá)植株的可溶性蛋白含量在0～48 h內(nèi)呈降低的趨勢(shì)，在48 h～14 d顯著升高。野生型植株的可溶性蛋白含量在0～? 6 h內(nèi)呈上升的趨勢(shì)，在12 h～14 d顯著下降。

對(duì)CAT和POD活性檢測(cè)發(fā)現(xiàn)（圖6-C、圖6-D），未處理時(shí)野生型和過(guò)表達(dá)植株的CAT和POD活性無(wú)顯著差異，鹽脅迫處理后0～48 h內(nèi)過(guò)表達(dá)植株CAT活性逐漸升高，在14 d時(shí)顯著下降，野生植株的CAT酶活總體呈下降趨勢(shì)，并且在6 h～14 d內(nèi)過(guò)表達(dá)植株的CAT活性都顯著高于野生型；POD活性在野生型植株中呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢(shì)，在過(guò)表達(dá)植株中POD活性呈上升趨勢(shì)，在14 d時(shí)活性達(dá)到最高。脯氨酸含量檢測(cè)結(jié)果顯示（圖6-E），過(guò)表達(dá)植株脯氨酸含量在0 h～12 h逐漸上升，在12 h～48 h有所下降，48 h～14 d呈上升趨勢(shì)，在14 d時(shí)達(dá)到最大值。野生型植株的脯氨酸含量呈先下降后上升的趨勢(shì)，在14 d達(dá)到峰值。野生型植株的脯氨酸含量在處理期間均顯著低于過(guò)表達(dá)植株。

2.6? 鹽脅迫相關(guān)基因表達(dá)量檢測(cè)

選取茄子中3個(gè)鹽脅迫相關(guān)基因 SmeSOS1、 SmeCIPK3和 SmeNHX1，分別檢測(cè)其在野生型和過(guò)表達(dá)植株中鹽脅迫前后的表達(dá)量變化。如圖7所示，鹽脅迫處理前，過(guò)表達(dá)植株中 SmeSOS1、 SmeCIPK3和 SmeNHX1的表達(dá)量顯著高于野生型植株。對(duì)鹽脅迫處理14 d后的表達(dá)分析發(fā)現(xiàn)，野生型植株中 SmeSOS1、 SmeCIPK3和 SmeNHX1的表達(dá)量均有明顯升高。過(guò)表達(dá)植株中 SmeSOS1、 SmeCIPK3和 SmeNHX1的表達(dá)量顯著升高，且顯著高于同時(shí)期野生型植株。以上結(jié)果表明，過(guò)表達(dá) SmeWRKY53可以誘導(dǎo)鹽脅迫相關(guān)基因的表達(dá)。

3? 討 論

WRKY基因家族是高等植物中最大的轉(zhuǎn)錄因子家族之一。在植物應(yīng)對(duì)生物和非生物脅迫的一些過(guò)程中發(fā)揮重要作用［15］。許多研究表明WRKY家族可調(diào)控植物在鹽脅迫下的抗逆性，Bo等［16］發(fā)現(xiàn)水稻中過(guò)表達(dá)玉米? WRKY114基因降低了水稻耐鹽性。Liang等［17］從菊花中分離并誘導(dǎo)得到轉(zhuǎn)錄因子 DgWRKY5，通過(guò)過(guò)表達(dá) DgWRKY5證明過(guò)表達(dá)菊花的耐鹽性比野生型菊花強(qiáng)。在本研究中，首先對(duì)轉(zhuǎn)錄因子 SmeWRKY53的啟動(dòng)子進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)啟動(dòng)子序列有一個(gè)參與防御和應(yīng)激反應(yīng)的順式作用元件TC-rich repeats和多個(gè)MeJA反應(yīng)性的順式作用調(diào)控元件。MeJA作為一種參與植物逆境脅迫反應(yīng)的激素，可以通過(guò)調(diào)節(jié)無(wú)機(jī)滲透離子或有機(jī)滲透劑來(lái)抑制有毒離子的吸收，從而對(duì)抗?jié)B透脅迫的不利影響［18］。本研究通過(guò)使用鹽脅迫處理發(fā)現(xiàn) SmeWRKY53被顯著誘導(dǎo)，表明 SmeWRKY53可能在茄子鹽脅迫反應(yīng)中發(fā)揮作用。通過(guò)過(guò)表達(dá) SmeWRKY53可以減緩鹽脅迫下茄子植株的不良反應(yīng)，證明? SmeWRKY53可能在茄子鹽脅迫反應(yīng)中的正向調(diào)控作用。

鹽脅迫反應(yīng)的早期信號(hào)包括過(guò)量的Na+、細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平的變化，以及活性氧物質(zhì)（ROS）的積累［19］。有報(bào)道表明，轉(zhuǎn)錄因子? SlMYB102、 PpCAS1和 FcWRKY40可以顯著降低葉片或根中的Na+含量，增加K+/Na+的比率，從而維持這些組織中的離子動(dòng)態(tài)平衡，提高植物的耐鹽性。植物通常利用Na+轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白如 SOS1、 NHX1和 HKT1來(lái)消除多余的Na+，并在細(xì)胞質(zhì)中保持最合適的Na+/K+比率［23］。CBL-CIPK復(fù)合體可作用于離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白參與調(diào)節(jié)逆境脅迫下的離子穩(wěn)態(tài)［24］，已有研究表明茄子中CBL1可與CIPK3相互作用響應(yīng)鹽脅迫［25］。本研究對(duì)離子轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因進(jìn)行表達(dá)分析，發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)植株中 SmeSOS1、和 SmeNHX1表達(dá)量顯著高于野生型，并且在鹽脅迫處理后，過(guò)表達(dá)植株中 SmeSOS1、 SmeCIPK3和 SmeNHX1受到更強(qiáng)烈的誘導(dǎo)表達(dá)。

植物在響應(yīng)鹽脅迫時(shí)，往往會(huì)在細(xì)胞中一些有機(jī)分子，如脯氨酸和可溶性蛋白等以維持較高的滲透壓［26］。積累脯氨酸是植物為抵御鹽脅迫而采取的一種保護(hù)措施［27］，脯氨酸在滲透調(diào)節(jié)、保護(hù)細(xì)胞大分子和清除羥基自由基等方面發(fā)揮作用。本研究發(fā)現(xiàn)，鹽脅迫處理后，在 SmeWRKY53過(guò)表達(dá)植株可以積累更多的脯氨酸來(lái)清除活性氧從而提高植株的耐鹽性，并且含有更多的可溶性蛋白以維持滲透壓的平衡。

非生物脅迫可引起脂質(zhì)過(guò)氧化，高濃度鹽會(huì)導(dǎo)致活性氧（ROS）積累，會(huì)損害植物的細(xì)胞膜，導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化和其他的氧化損傷，進(jìn)一步導(dǎo)致MDA和H2O2積累［28-29］。MDA的含量可以反映鹽脅迫對(duì)植物的傷害程度，本研究中， SmeWRKY53過(guò)表達(dá)植株中MDA的積累更少，植物的受傷害程度更低。對(duì)CAT活性檢測(cè)發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)植株中CAT活性更高，CAT可以將H2O2分解為水和氧氣，減少膜脂過(guò)氧化，增強(qiáng)植物的抗氧化性從而提高耐鹽性。

4? 結(jié)論

茄子中 SmeWRKY53受鹽脅迫的誘導(dǎo)。過(guò)表達(dá) SmeWRKY53能增強(qiáng)清除ROS的能力，抑制細(xì)胞膜損傷和細(xì)胞死亡并且產(chǎn)生更多的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)提高對(duì)鹽脅迫的耐受性，減少鹽脅迫對(duì)植株的傷害。該研究不僅有助于了解茄子 SmeWRKY53基因在茄子耐鹽脅迫中的分子機(jī)制，而且也為分子育種提供了候選基因。

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Response of Eggplant Transcription Factor?? SmeWRKY53 to Salt Stress

ZHOU Yaru1，XIAO Kai2，ZHANG Aidong2 and WU Xuexia1，2

（1.College of Fisheries and Life Sciences，Shanghai Ocean University，Pudong New Area，Shanghai? 201306，China;

2.Institute of Horticulture，Shanghai Academy of Agricultural Sciences，F(xiàn)engxian District，Shanghai? 201403，China）

Abstract? WRKY transcription factor plays an important role in various physiological processes and stress responses.To explore the stress resistance of eggplant transcription factor?? SmeWRKY53，the promoter elements of?? SmeWRKY53 were predicted and analyzed.Real-time fluorescent quantitative PCR （RT-qPCR） was used to detect the expression changes of?? SmeWRKY53 under different abiotic stresses.? SmeWRKY53 was overexpressed in eggplant through genetic transformation，and the salt tolerance of the overexpressed eggplant at seedling stage was identified.The results of promoter element prediction analysis showed that the promoter sequence of this gene not only contains basic transcriptional elements of promoters，but also contains stress-related elements such as TC-rich repeats，CGTCA-motif and TGACG-motif.Quantitative real-time polymerase chain reaction （qRT-PCR） results showed that?? SmeWRKY53 could respond to high temperature，low temperature，drought and salt stress in eggplant，and could be significantly induced under salt stress.Physiological tests showed that the accumulation of?? malondialdehyde （MDA） in overexpressed plants was significantly lower than that in control under salt stress.Meanwhile，overexpression of?? SmeWRKY53 increased the contents of proline and soluble protein and the activities of antioxidant enzymes （Catalase （CAT） and Peroxidase activity （POD）） to improve the salt tolerance of plants.The expression of salt stress-related genes （SmeSOS1，SmeCIPK3 and SmeNHX1） was detected，and the expression levels of salt stress-related genes （SmeSOS1， SmeCIPK3 and SmeNHX1） in overexpressed plants were significantly increased after salt stress treatment compared with the wild type.These results suggest that eggplant?? SmeWRKY53，as a positive regulator，can improve the tolerance of eggplant to salt stress.

Key words? Eggplant; Transcription factor；? SmeWRKY53; Abiotic stress; Salt tolerance

Received ??2023-06-16??? Returned? 2023-08-04

Foundation item? National Bulk Vegetable Industry Technology System Project （No.CARS-25）.

First author? ZHOU? Yaru，female，master student.Research area：molecular breeding.E-mail：yrzhou153@163.com

Corresponding?? author? WU Xuexia，female，Ph.D，research fellow.Research area：molecular breeding.? E-mail：wuxuexiarose@sohu.com

（責(zé)任編輯：潘學(xué)燕? Responsible editor：PAN Xueyan）