摘要：黃萎病（Verticillium wilt）是影響我國棉花產(chǎn)量和品質(zhì)的重要病害，其病原菌是大麗輪枝菌（Verticillium dahliae）。AP2/ERF類轉(zhuǎn)錄因子在植物生長發(fā)育和脅迫適應(yīng)性響應(yīng)中的作用日益突顯。為挖掘棉花抗黃萎病相關(guān)基因并探究其生物學(xué)功能，利用擬南芥抗大麗輪枝菌相關(guān)基因AT1G22810.1，同源比對獲得棉花抗黃萎病候選基因GhERF020（XM_016842745.1）。生物信息學(xué)分析結(jié)果表明，GhERF020 開放閱讀框的長度為441 bp，編碼147個氨基酸；其蛋白含有1個保守的AP2結(jié)構(gòu)域，相對分子質(zhì)量為16.16 kD，無跨膜結(jié)構(gòu)，屬于親水蛋白；預(yù)測其啟動子區(qū)域含有水楊酸、茉莉酸甲酯和脫落酸等響應(yīng)元件?；虮磉_模式分析發(fā)現(xiàn)，GhERF020 受大麗輪枝菌侵染誘導(dǎo)表達。亞細胞定位分析表明，GhERF020蛋白定位于細胞核中。利用病毒誘導(dǎo)的基因沉默（virus-induced gene silencing， VIGS）技術(shù)下調(diào)GhERF020 表達后，棉花植株對大麗輪枝菌的敏感性顯著增強，病情指數(shù)和病原菌生物量明顯升高。由此表明，GhERF020是棉花抗黃萎病的正向調(diào)控因子。

關(guān)鍵詞：棉花黃萎??；大麗輪枝菌；轉(zhuǎn)錄因子；GhERF020；VIGS

doi：10.13304/j.nykjdb.2023.0407

中圖分類號：S562；Q78 文獻標(biāo)志碼：A 文章編號：1008‐0864（2024）09‐0112‐10

棉花是重要的經(jīng)濟作物之一，也是我國農(nóng)業(yè)安全的重要組成部分[1]。棉花黃萎?。╒erticilliumwilt，VW）主要是由大麗輪枝菌（Verticilliumdahliae）引發(fā)的土傳性真菌維管束病害。大麗輪枝菌通過土壤傳播，入侵植物維管組織進而引發(fā)病害，嚴重影響棉花的品質(zhì)和產(chǎn)量[2]；其具有寄主范圍廣、傳播速度快、破壞面積大和環(huán)境適應(yīng)性強等特點，防治極為困難。目前還沒有針對大麗輪枝菌的有效殺菌劑[3]。因此，深入挖掘棉花抗黃萎病相關(guān)基因資源，探究棉花抗黃萎病分子機制，進而利用生物育種的方式培育抗病品種是防治黃萎病的穩(wěn)定而有效的方法。

轉(zhuǎn)錄因子（transcription factors，TF）在植物響應(yīng)逆境脅迫中發(fā)揮著不可或缺的作用，可調(diào)控與抗逆性狀相關(guān)基因的表達，使植物抗逆性得到顯著改善。因此，轉(zhuǎn)錄因子的發(fā)掘鑒定已逐漸成為植物抗逆育種的關(guān)鍵。AP2/ERF是植物特有的一類轉(zhuǎn)錄因子，具有60～70個氨基酸的AP2/ERF型DNA結(jié)合域[4]。根據(jù)其序列相似性和AP2/ERF結(jié)構(gòu)域的數(shù)量，將其分成4 類，分別為AP2（APETALA2）、ERF（ethylene-responsive elementbinding factors）、RAV（related to ABI3/VP1）和DREB （dehydration-responsive element bindingprotein）亞家族[5]。其中，ERF 亞家族只含有1 個AP2 保守結(jié)構(gòu)域，可特異性結(jié)合基因上游AGCCGCC 元件（CCC-box），參與植物水楊酸（salicylicacid，SA）、茉莉酸（jasmonicacid，JA）和乙烯（ethylene，ET）等多個信號傳導(dǎo)途徑，在植物生長發(fā)育和脅迫應(yīng)答中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用[6]。

近年來，ERF類轉(zhuǎn)錄因子得到廣泛關(guān)注，已在擬南芥[5]、水稻[5]、大豆[7]、番茄[8]、楊樹[9]等植物中鑒定出來并對其功能進行闡述。ERF類轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控方式復(fù)雜，不僅可正向調(diào)控植物抗性，也可負調(diào)控植物抗性。在擬南芥中過表達AtERF1可提高植株對灰霉菌和黃瓜織球殼菌等壞死性真菌的抗性[10]。過表達馬鈴薯StERF94 基因可增強與編碼病程相關(guān)防御基因的表達，抑制病菌繁殖，從而增強馬鈴薯對枯萎病的抵抗力[11]。水稻OsERF922的RNAi沉默轉(zhuǎn)化子增強了水稻對稻瘟病菌抗性，過表達該基因使植株對稻瘟病菌的入侵更加敏感[12]，并且利用CRISPR/Cas9（clusted regularlyinterspaced short palindromic repeats and CRISPassociatedprotein 9）技術(shù)編輯水稻OsERF922 可提高水稻抗稻瘟病菌的能力[13]。研究表明，擬南芥ERF019通過抑制病原體相關(guān)分子模式（pathogenassociatedmolecular patterns，PAMP）激發(fā)的免疫反應(yīng)負向調(diào)控對寄生疫霉菌的抗性[14]。植物感受并識別來自病菌的信號后，通過激活SA、ET和JA等植物激素的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，從而準確調(diào)控植物的防衛(wèi)反應(yīng)，有些ERF轉(zhuǎn)錄因子在抗病信號交叉途徑中發(fā)揮重要作用，是關(guān)鍵的連接因子[15-17]。

在野生型擬南芥中，ERF1 受ET 和茉莉酸甲酯（methyl jasmonate，MEJA）誘導(dǎo)表達，作用于ET和JA交叉途徑的下游，是探究2種信號聯(lián)合調(diào)控抗病機制的關(guān)鍵元素，可調(diào)節(jié)下游防御反應(yīng)基因[18]。ERF96可結(jié)合ET和JA響應(yīng)的防衛(wèi)基因PDF1.2a、PR-3 和PR-4 的GCC 基序，進而正向調(diào)控植物對死體營養(yǎng)型病原菌的抗性[19]。在陸地棉（Gossypium hirsutum L.）中共鑒定了220個包含AP2單結(jié)構(gòu)域的基因[20]，然而和抗性相關(guān)的相對較少，尤其是與黃萎病抗性相關(guān)的ERF亞族轉(zhuǎn)錄因子亟待深入研究。本實驗室前期通過對接種大麗輪枝菌的擬南芥進行轉(zhuǎn)錄組和代謝組學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)了大量差異表達基因（differentialexpression genes， DEGs）。通過生物信息學(xué)分析錨定擬南芥抗大麗輪枝菌基因AT1G22810.1，并從NCBI網(wǎng)站獲得棉花基因組中與其高度同源的基因GhERF020（XM_016842745.1），利用亞細胞定位和病毒誘導(dǎo)的基因沉默（virus-induced genesilencing，VIGS）技術(shù)對該基因在棉花抗黃萎病中的功能進行初步探究，為進一步闡述該基因的抗病分子機制奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

以陸地棉品種R15為試驗材料。棉花VIGS載體為pTRV1、pTRV2、pTRV2-CLA1，大麗輪枝菌為強致病力菌系V991，大腸桿菌Trans1-T1 感受態(tài)細胞、大腸桿菌DH5α 菌株、根瘤農(nóng)桿菌GV3101感受態(tài)細胞均由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所提供。

1.2 試驗試劑

植物總RNA小量提取試劑盒購自廣州美基（Magen）生物有限公司；質(zhì)粒小提試劑盒購自天根生化科技（北京）有限公司；DNA Marker、反轉(zhuǎn)錄試劑盒MonScriptTM RT Ⅲ all-in-one Mix（withdsDNase）購自莫納（Monad）生物科技有限公司；2×Taq PCR Mix購自北京艾德萊生物科技有限公司；限制性內(nèi)切酶EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ購自NEB（北京）有限公司；2×Assembly Mix、熒光定量試劑盒2×ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix 購自南京諾唯贊生物科技股份有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 GhERF020 生物信息學(xué)分析

在NCBI 網(wǎng)站中比對擬南芥抗黃萎病基因AT1G22810.1，發(fā)現(xiàn)棉花高度同源基因GhERF020 （XM_016842745.1）。利用MEGA 11對來自不同物種的同源基因的氨基酸序列構(gòu)建系統(tǒng)進化樹；利用Cotton FGD 網(wǎng)站（https：//cottonfgd.org/）獲得GhERF020 的編碼區(qū)（coding sequence， CDS）及基因組DNA 序列；使用NCBI 在線工具Batch CDsearch（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/wrpsb.cgi）預(yù)測基因的保守結(jié)構(gòu)域；使用ProtParam在線網(wǎng)站（http：//web.expasy.org/protparam）預(yù)測GhERF020蛋白的分子量、氨基酸組成、不穩(wěn)定指數(shù)、理論等電點、總平均親水性等理化性質(zhì)；使用TMHMM（http：//www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/）預(yù)測跨膜結(jié)構(gòu)域；使用SignalP5.0（http：//www.cbs.dtu. dk/services/SignalP/index. php）預(yù)測信號肽；使用SOPMA （http：//npsa-pbil. ibcp. fr/cgi-bin/npsa_automat.pl？page=npsa_sopma.html）預(yù)測蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)；使用SWISS-MODEL（https：//www.swissmodel.expasy.org/）預(yù)測蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)；使用Plant-mPLoc 網(wǎng)站（http：//www. csbio. sjtu. edu. cn/bioinf/plant-multi/）預(yù)測GhERF020 蛋白的功能結(jié)構(gòu)域。

1.3.2 基因表達分析

取V991菌液（107 CFU·mL-1）1 mL加入含有卡那青霉素和羧芐青霉素抗生素的CM（complete medium）培養(yǎng)基（6 g·L-1酵母提取物、6 g·L-1 酸水解酪蛋白和10 g·L-1 蔗糖）中，28 ℃、220 r·min-1 震蕩培養(yǎng)4～5 d，鏡檢觀察孢子并利用血球計數(shù)板統(tǒng)計孢子含量。當(dāng)孢子量達到107 CFU·mL-1時用4層紗布過濾掉菌絲體，收集孢子液。當(dāng)棉花長至2葉1心時，將其根部浸泡在V991 孢子懸浮液中0.0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 和12.0 h后，分別提取根、莖、葉組織的RNA，并反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。以棉花管家基因GhUBQ7（LOC107925174）作為內(nèi)參基因，使用GhUBQ7-RT-F/R 與GhERF020-qRT-F/R（ 表1）進行RTqPCR擴增，每個樣本3次重復(fù)。反應(yīng)結(jié)束后，根據(jù)目的基因和內(nèi)參基因的Ct值，使用2-ΔΔCt法[21]計算目的基因的表達量。

1.3.3 GhERF020 亞細胞定位

結(jié)合在線平臺WoLFPROST（https：//wolfpsort.hgc.jp/）預(yù)測的亞細胞定位結(jié)果，用p1132-GhERF020-F/R（表1，下劃線處為EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ酶切位點）克隆GhERF020基因的開放閱讀框（open reading frame， ORF）序列，并插入含有綠色熒光蛋白（green fluorescentprotein，GFP）基因表達載體pYBA1132（BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位點）中。將構(gòu)建成功的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌EHA105中并在煙草中瞬時表達。注射煙草下表皮48 h后在LSM980共聚焦激光掃描顯微鏡（Zeiss，Jena，Germany）下觀察熒光亞細胞定位情況。細胞核標(biāo)記載體pH2B-mCherry[22]由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所王磊研究員提供。

1.3.4 棉花VIGS

設(shè)計特異性引物GhERF020-VIGS-F/R（表1），PCR 擴增GhERF020 基因VIGS片段，插入pTRV2 多克隆位點EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ間。利用電擊轉(zhuǎn)化法將pTRV2-GhERF020 質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌GV3101。農(nóng)桿菌介導(dǎo)的棉花VIGS操作按照Gao等[23]的方法進行。注射VIGS菌液之后，觀察注射pTRV2-CLA1 菌液植株葉片的白化情況，當(dāng)?shù)?片真葉出現(xiàn)葉脈網(wǎng)格狀白化即可進行沉默效率檢測，取沉默植株與對照植株葉片大小一致的第1 片真葉，提取RNA 并反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，使用引物GhERF020-qRT-F/R（表1），采用RT-qPCR檢測沉默效率。

1.3.5 GhERF020 棉花沉默植株黃萎病抗病性鑒定

使用1.3.2的棉花接菌方法，將棉花的根浸泡在孢子液（107 CFU·mL-1）5 min，然后重新移栽至營養(yǎng)土中。10 d后觀察棉花表型并統(tǒng)計病情指數(shù)。病情分為5級：0級，無病葉，正常生長；1級，子葉變黃，真葉無??；2級，所有子葉均發(fā)病，1～3片真葉發(fā)?。?級，包括子葉在內(nèi)的5片以上棉花葉片發(fā)病；4級，所有葉片發(fā)病，并有葉片脫落，或植物死亡[24]。病情指數(shù)的計算公式如下[25]。

病情指數(shù)=Σ（每一級病株數(shù)× 相應(yīng)病害等級／（10 × 4） ）×100（1）

提取棉花基因組DNA，在大麗輪枝菌基因組DNA中核糖體RNA基因ITS1和ITS2區(qū)域（Z29511）檢測真菌生物量，使用的引物為Vd-ITS-F/R，內(nèi)參基因為GhUBQ7（表1）。RT-qPCR反應(yīng)在ABI7500 Fast儀器上進行，數(shù)據(jù)通過2-ΔΔCt法[21]分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 GhERF020 基因生物信息學(xué)分析

2.1.1 棉花GhERF020 基因的同源性及結(jié)構(gòu)分析

通過在NCBI 網(wǎng)站中比對擬南芥基因AT1G22810.1，獲得棉花基因組中與其高度同源的基因XM_016842745.1，將其命名為GhERF020。利用MEGA 11對來自不同物種同源基因的氨基酸序列構(gòu)建系統(tǒng)進化樹，結(jié)果（圖1A）發(fā)現(xiàn)，GhERF020 基因與毛楊、蘋果的親緣關(guān)系較近，與草莓、土豆等的親緣關(guān)系較遠。該基因全長444bp，無內(nèi)含子，編碼147個氨基酸；僅含有1個AP2保守結(jié)構(gòu)域，位于12～76位氨基酸之間，推測屬于AP2/ERF轉(zhuǎn)錄因子超家族ERF亞家族類轉(zhuǎn)錄因子（圖1B）。

2.1.2 GhERF020 蛋白理化性質(zhì)分析

對GhERF020蛋白的組成成分及其理化性質(zhì)進行分析，結(jié)果（表2）表明，GhERF020 蛋白分子式為C691H1095N207O221S10，分子量為16.16 kD，含有丙氨酸（Ala）、精氨酸（Arg）、天冬酰胺（Asn）等20種氨基酸，其中絲氨酸（Ser）、丙氨酸（Ala）、甘氨酸（Gly）含量較高，分別為12.2%、9.5%、8.2%；親疏水性分析顯示，該蛋白為親水性蛋白（圖2A）；二級結(jié)構(gòu)主要由α-螺旋、延伸鏈、β-折疊和無規(guī)則卷曲構(gòu)成（圖2B），4種結(jié)構(gòu)包含的氨基酸數(shù)量分別為40、18、8、81，占比分別為27.21%、12.24%、5.44%和55.10%?？缒そY(jié)構(gòu)域預(yù)測GhERF020蛋白為非膜蛋白，位于膜外側(cè)，因此推測該蛋白游離在細胞質(zhì)中發(fā)揮作用（圖2C）；三級結(jié)構(gòu)具α-螺旋、β-折疊和無規(guī)則卷曲等空間結(jié)構(gòu)（圖2D）。

2.1.3 GhERF020 基因上游啟動子順式元件分析

利用Plant CARE在線分析軟件對GhERF020基因起始密碼子上游約2 000 bp啟動子序列反義鏈進行分析，該啟動子上有15個真核生物所必需的核心元件CAAT-box和24個TATA-box；除此之外，在啟動子區(qū)域還有許多功能性元件，如ABRE脫落酸響應(yīng)元件、ARE 厭氧誘導(dǎo)作用元件、CGTCA-motif MEJA反應(yīng)元件、水楊酸響應(yīng)有關(guān)的順式結(jié)構(gòu)元件TCA-element及光響應(yīng)元件GT1-box、LAMP-element、G-box等（圖3）。因此，GhERF020 可能受到激素誘導(dǎo)進而調(diào)控抗病相關(guān)基因參與抗黃萎病脅迫反應(yīng)。

2.2 GhERF020 基因表達模式分析

RT-qPCR結(jié)果（圖4）顯示，GhERF020 在大麗輪枝菌侵染0.5 h時輕度誘導(dǎo)表達，1.0 h時達到峰值；組織特異性分析結(jié)果表明，GhERF020 在棉花根、莖和葉中均有表達。綜上所述，GhERF020 在棉花感染大麗輪枝菌后被誘導(dǎo)表達，并參與棉花對大麗輪枝菌的抗性反應(yīng)。

2.3 GhERF020 亞細胞定位分析

為了確定GhERF020的亞細胞定位，構(gòu)建了pYBA1132-GhERF020-GFP 融合質(zhì)粒，并將對照pYBA1132-GFP 載體和核定位基因H2B-mCherry轉(zhuǎn)化到煙草葉片中瞬時表達，結(jié)果（圖5）顯示，作為對照的pYBA1132-GFP蛋白定位在細胞膜、細胞質(zhì)和細胞核，表明煙草瞬時表達體系建立；GhERF020-GFP融合蛋白與H2B-mCherry的共定位信號僅在細胞核中可見。因此，GhERF020可能是核定位蛋白，在激活下游抗病基因表達方面發(fā)揮作用。

2.4 GhERF020 基因沉默導(dǎo)致棉花對黃萎病的敏感性增加

為探究GhERF020 在棉花抗黃萎病中的作用，對棉花幼苗進行VIGS處理10 d后，沉默CLA1基因的棉苗（TRV2：：CLA1）新生真葉出現(xiàn)白化表型（圖6A）。利用RT-qPCR檢測基因表達，結(jié)果（圖6B）顯示，沉默組（TRV2：：GhERF020）的GhERF020基因表達量較對照組（TRV2：：00）降低76.7%，沉默效果顯著。由此表明，VIGS體系建立成功，并且成功獲得GhERF020 沉默植株，可繼續(xù)用于抗黃萎病功能分析。

將對照組和沉默組植株接種V991 10 d后，對照組表現(xiàn)為個別葉片葉緣黃化、向下卷曲；GhERF020 沉默組表現(xiàn)出嚴重的植株萎蔫、葉片脫落等黃萎病癥狀。取GhERF020沉默組和對照組植株的子葉連接處分別進行剖桿觀察，結(jié)果（圖7A）顯示，沉默組植株的維管束褐化，出現(xiàn)更加明顯的褐色條紋。同時，GhERF020 沉默組植株的病情指數(shù)、相對真菌生物量較對照組顯著升高（圖7B和C）。因此，推測GhERF020 基因在棉花抵御黃萎病過程中起重要調(diào)控作用。

3 討論

黃萎病是嚴重威脅棉花生產(chǎn)的重要病害，該病的防治非常困難。通過傳統(tǒng)的雜交育種方法選育抗病品種難度大、周期長，不能有效滿足現(xiàn)實生產(chǎn)發(fā)展的需求。因此，挖掘棉花抗病相關(guān)基因，探究棉花抗黃萎病基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)及其抗病分子機制，將為棉花抗病分子育種提供理論依據(jù)及基因資源。

轉(zhuǎn)錄因子可以調(diào)控多個與抗病相關(guān)基因的表達，使植物抗病性得到明顯改善。近年來，ERF轉(zhuǎn)錄因子在植物生長發(fā)育和脅迫適應(yīng)性中的作用日益突顯，在脅迫下通常正調(diào)控植物的抗性，但也會因低溫、缺鐵、干旱等一些原因負調(diào)控植物的抗性[26]。本研究室前期通過對接種大麗輪枝菌擬南芥進行轉(zhuǎn)錄組和代謝組學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)了大量差異表達基因，通過生物信息學(xué)分析錨定擬南芥抗黃萎病基因AtERF019（AT1G22810.1），通過同源比對獲得棉花同源基因GhERF020，該基因含有1個AP2 結(jié)構(gòu)域；AP2 結(jié)構(gòu)域是ERF 的DNA 結(jié)合域，是其行使轉(zhuǎn)錄調(diào)控的關(guān)鍵。

研究表明，SA、JA 和ET 是主要的抗病信號[27‐28]。黃榆普[29]研究發(fā)現(xiàn)，ERF012 能夠與JA合成基因的啟動子結(jié)合，并上調(diào)JA 合成基因的表達，促進JA合成。作為ET應(yīng)答因子，ERF轉(zhuǎn)錄因子可以特異性結(jié)合基因組上游的GCC-box，從而參與調(diào)控ET 應(yīng)答、抗病及非生物脅迫[30]。對GhERF020 啟動子順式元件進行預(yù)測發(fā)現(xiàn)，GhERF020 基因啟動子區(qū)域具有參與SA、MEJA、ABA響應(yīng)等功能性元件，推測GhERF020 基因可能受激素誘導(dǎo)，進而調(diào)控抗病相關(guān)基因參與抗黃萎病脅迫反應(yīng)。煙草的瞬時過表達結(jié)果表明，ERF019的核定位對其抗病功能至關(guān)重要[14]。本研究通過亞細胞定位同樣發(fā)現(xiàn)，GhERF020蛋白定位于細胞核中，可能是激活下游抗病基因表達的潛在因子。

Zafar等[20]對4類棉花和野生型擬南芥中ERF基因家族成員進行系統(tǒng)發(fā)育樹分析發(fā)現(xiàn)，GhERF020 與GhERF012 在同一分支上，并且與AtERF014 親緣關(guān)系較近。在AtERF014-RNAi 沉默植株中，病原菌和flg22誘導(dǎo)的活性氧（reactiveoxygen species，ROS）爆發(fā)、PTI 基因表達和SA 誘導(dǎo)的防御被部分抑制，而在超表達AtER014 植株中，病原菌誘導(dǎo)的ROS 和flg22 誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)被激活增強[31‐32]。本研究通過RT-qPCR 分析表明，GhERF020 能夠響應(yīng)黃萎病菌誘導(dǎo)處理，推測其在棉花抗黃萎病反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。利用VIGS 技術(shù)沉默該基因，沉默植株對黃萎病菌的抗性顯著降低，病情指數(shù)和真菌生物量均高于對照植株；剖桿檢測發(fā)現(xiàn)，GhERF020 沉默植株維管束的褐變程度更加嚴重，真菌的生物量顯著高于對照植株。由此表明，GhERF020 正向調(diào)控棉花抗黃萎病反應(yīng)，但該基因的抗病分子機制及可能參與的抗病信號通路仍需進一步解析。

綜上，本研究鑒定了1個ERF亞家族的轉(zhuǎn)錄因子編碼基因GhERF020，其ORF為441 bp，編碼147個氨基酸；GhERF020蛋白的相對分子質(zhì)量為16.16 kD，無跨膜結(jié)構(gòu)域，為親水性蛋白。該基因受大麗輪枝菌侵染誘導(dǎo)，并定位于細胞核，GhERF020 下調(diào)表達可顯著降低棉花對大麗輪枝菌的抗性。以上研究結(jié)果為棉花抗黃萎病基因資源的挖掘利用奠定了基礎(chǔ)，并為生物育種提供重要的基因資源。

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基金項目：河北省重點研發(fā)計劃項目（22322912D）；國家自然科學(xué)基金項目（32160624）。