林麗君 嚴(yán)曉嵐 俞麗玲 丁建祖 陳 文 聞禮永

(浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院，杭州 310013)

血吸蟲(chóng)病是國(guó)家重大傳染病之一。經(jīng)過(guò)積極防治，全國(guó)先后有5個(gè)省達(dá)到血吸蟲(chóng)病傳播阻斷標(biāo)準(zhǔn)，但這些省份仍存在一定面積的殘存釘螺，隨著人口流動(dòng)的日益頻繁，輸入性傳染源也時(shí)有發(fā)現(xiàn)，血吸蟲(chóng)病重新傳播流行的因素依然存在(聞禮永等，2011)。湖北釘螺是日本血吸蟲(chóng)Schistosomajaponicum唯一中間宿主，血吸蟲(chóng)毛蚴感染釘螺宿主是血吸蟲(chóng)病流行不可缺失的重要環(huán)節(jié)。研究發(fā)現(xiàn)，釘螺的感染率與每只釘螺暴露于血吸蟲(chóng)毛蚴的數(shù)量呈正相關(guān)(何毅勛等，1994)。當(dāng)釘螺與毛蚴都減少至很少的程度時(shí)，即便多次投放毛蚴，釘螺也不感染(何尚英等，1989)。不同地區(qū)存在不同血吸蟲(chóng)品系和不同亞種湖北釘螺，且相互之間的相容性存在明顯差異(周曉農(nóng)等，2005)。不同地區(qū)、不同環(huán)境類(lèi)型釘螺對(duì)血吸蟲(chóng)的易感性不同，來(lái)自同一地區(qū)但屬于不同環(huán)境類(lèi)型的釘螺，以及屬于同一環(huán)境類(lèi)型而來(lái)自不同地區(qū)的釘螺也具有不同的易感性(洪青標(biāo)等，1995)。本研究通過(guò)了解傳播阻斷地區(qū)釘螺與輸入性血吸蟲(chóng)毛蚴的相容性，以期為傳播阻斷地區(qū)血吸蟲(chóng)病防治、監(jiān)測(cè)及科學(xué)研究提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 血吸蟲(chóng)毛蚴

采取安徽、江西省現(xiàn)場(chǎng)捕獲的陽(yáng)性釘螺及江蘇省血吸蟲(chóng)病防治研究所實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)陽(yáng)性釘螺逸取血吸蟲(chóng)尾蚴感染家兔，每只家兔感染毛蚴1 500只，飼養(yǎng)45 d后取兔肝蟲(chóng)卵孵化毛蚴。以孵出4 h內(nèi)的毛蚴作感染用。

1.2 釘螺

采集浙江省山丘型流行區(qū)長(zhǎng)興、常山、婺城光殼釘螺Oncomelanianosophora和水網(wǎng)型流行區(qū)秀洲、平湖微肋釘螺O.sublevis，分別經(jīng)逸蚴試驗(yàn)(何尚英等，1989)，并抽取其中100只釘螺解剖觀察無(wú)血吸蟲(chóng)感染，剩余釘螺做試驗(yàn)用。采集安徽、江西和江蘇省現(xiàn)場(chǎng)湖沼型流行區(qū)肋殼釘螺分別經(jīng)逸蚴試驗(yàn)，并抽取其中100只釘螺解剖觀察無(wú)血吸蟲(chóng)感染，剩余釘螺作陽(yáng)性對(duì)照組實(shí)驗(yàn)用。

1.3 方法

1.3.1釘螺群體感染：吸取含毛蚴水于玻片上，抽樣3次，在解剖鏡下計(jì)數(shù)后，推算水中的毛蚴密度，按每只釘螺20只毛蚴的比例加入50 mL燒杯中，加水至50 mL，杯中預(yù)先放入50只釘螺，并加紗網(wǎng)固定。在室溫25℃左右，日光燈光照下感染2 h。每組感染200只釘螺。

1.3.2單個(gè)釘螺感染：吸取含毛蚴水于玻片上，在解剖鏡下計(jì)數(shù)，用水沖入24孔細(xì)胞培養(yǎng)板孔內(nèi)，在每孔內(nèi)加釘螺一只，上蓋紗蓋，在室溫25℃左右，日光燈光照下感染2 h。感染過(guò)程中，釘螺爬至紗蓋上時(shí)，用解剖針輕輕撥入水中。毛蚴量分別為5、10、20、40只，每組分別感染浙江省山丘型長(zhǎng)興、常山、婺城釘螺和水網(wǎng)型秀洲、平湖釘螺各200只，感染同地域釘螺200只作陽(yáng)性對(duì)照。

1.3.3飼養(yǎng)、鑒別：感染后釘螺采用搪瓷盤(pán)底部放置一層海綿，上鋪草紙置于25℃左右室溫分別飼養(yǎng)。每隔1周喂食1次，更換草紙1次。45 d后采用壓碎法對(duì)釘螺進(jìn)行鏡檢，如見(jiàn)釘螺軟體有收縮反應(yīng)為活螺，反之為死螺，有血吸蟲(chóng)母胞蚴、子胞蚴或尾蚴的釘螺為陽(yáng)性螺，并做計(jì)數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。

2 結(jié)果

2.1 釘螺群體感染情況

用湖沼型血吸蟲(chóng)病流行區(qū)血吸蟲(chóng)毛蚴感染血吸蟲(chóng)病傳播阻斷地區(qū)釘螺結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 不同地區(qū)血吸蟲(chóng)毛蚴感染傳播阻斷地區(qū)釘螺的結(jié)果Tab.1 Susceptibility of Oncomelania hupensis from areas Schistosomiasis transmission-interrupted to Schistosoma japonicum miracidia from different areas

湖沼型血吸蟲(chóng)病流行區(qū)安徽、江西和江蘇血吸蟲(chóng)毛蚴均可感染浙江山丘型長(zhǎng)興、常山、婺城釘螺和水網(wǎng)型秀洲、平湖釘螺。三地血吸蟲(chóng)毛蚴感染其本地釘螺，感染率均高于感染浙江各地釘螺。浙江水網(wǎng)型秀洲釘螺對(duì)三地血吸蟲(chóng)易感性高，感染率分別為29.88%、26.35%和18.18%，三者感染率有顯著性差異(χ2=12.97，P<0.01)。浙江山丘型婺城釘螺對(duì)三地血吸蟲(chóng)易感性低，感染率分別為1.69%、0.56%和0.57%，三者感染率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=1.62，P>0.05)。

2.2 單個(gè)釘螺感染情況

用湖沼型血吸蟲(chóng)病流行區(qū)血吸蟲(chóng)毛蚴以5、10、20和40個(gè)不同數(shù)量感染傳播阻斷地區(qū)單個(gè)釘螺結(jié)果見(jiàn)表2。

湖沼型血吸蟲(chóng)病流行區(qū)安徽、江西和江蘇省血吸蟲(chóng)毛蚴5個(gè)/螺的量感染浙江山丘型長(zhǎng)興、常山和婺城釘螺，除江西血吸蟲(chóng)感染浙江山丘型常山釘螺發(fā)現(xiàn)2只陽(yáng)性螺，其余均未感染；感染浙江水網(wǎng)型秀洲、平湖釘螺感染率為5.52%～8.11%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.83，P>0.05)，均處于較低感染率。浙江山丘型婺城釘螺用上述三地血吸蟲(chóng)毛蚴5、10個(gè)/螺感染后，除江蘇血吸蟲(chóng)感染組發(fā)現(xiàn)1只陽(yáng)性釘螺，其余組均未發(fā)生感染。用湖沼地區(qū)血吸蟲(chóng)20、40個(gè)/螺毛蚴量感染浙江各地釘螺，均有陽(yáng)性釘螺發(fā)現(xiàn)。各地釘螺隨著感染血吸蟲(chóng)毛蚴量的增加，感染率也隨之增大。三地血吸蟲(chóng)毛蚴感染浙江釘螺后感染率均低于感染其本地釘螺。

2.3 單個(gè)釘螺感染后死亡情況

不同數(shù)量血吸蟲(chóng)毛蚴感染釘螺后，釘螺顯示出不同的死亡率，結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 血吸蟲(chóng)毛蚴數(shù)量與傳播阻斷地區(qū)釘螺易感性Tab.2 Susceptibility of Oncomelania hupensis from Schistosomiasis transmission-interrupted areaswith different dose of Schistosoma japonicum miracidia

表3 傳播阻斷地區(qū)釘螺與不同量血吸蟲(chóng)毛蚴感染后死亡率Tab.3 Mortolity of Oncomelania hupensis infected in different dose of Schistosoma japonicum miracidia

用湖沼型血吸蟲(chóng)病流行區(qū)安徽、江西和江蘇省血吸蟲(chóng)毛蚴5個(gè)/螺感染釘螺，釘螺死亡率最低是安徽血吸蟲(chóng)感染浙江山丘型長(zhǎng)興釘螺組為5.50%，最高是安徽血吸蟲(chóng)感染浙江水網(wǎng)型秀洲釘螺組和江西血吸蟲(chóng)感染浙江山丘型常山釘螺組，均為12%，5個(gè)毛蚴感染各組平均死亡率為9%。10只毛蚴感染釘螺，死亡率最低是江蘇血吸蟲(chóng)感染常山釘螺為6.5%，最高為安徽、江西省血吸蟲(chóng)感染浙江水網(wǎng)型秀洲釘螺組，均為17.5%，各組平均死亡率為11.69%。20只毛蚴感染釘螺，死亡率最低是江西血吸蟲(chóng)感染浙江山丘型婺城釘螺組為10.5%，最高是江西血吸蟲(chóng)感染浙江水網(wǎng)型秀洲釘螺，為25.5%，各組平均死亡率為17.14%。40只毛蚴感染釘螺，死亡率最低是江西血吸蟲(chóng)感染浙江山丘型長(zhǎng)興和婺城釘螺組，均為14.5%，最高是安徽血吸蟲(chóng)感染長(zhǎng)興釘螺，為28.5%，各組平均死亡率為19.47%。不同毛蚴量感染釘螺后平均死亡率具有顯著性差異(χ2=204.43，P<0.01)，釘螺隨著感染血吸蟲(chóng)毛蚴量的增加死亡率也隨之增高。

3 討論

血吸蟲(chóng)中間宿主釘螺是血吸蟲(chóng)病流行的重要環(huán)節(jié)，釘螺對(duì)血吸蟲(chóng)的易感性直接影響血吸蟲(chóng)病的流行程度，在血吸蟲(chóng)病傳播動(dòng)力學(xué)中發(fā)揮重要作用。全國(guó)先后有5個(gè)省達(dá)到血吸蟲(chóng)病傳播阻斷標(biāo)準(zhǔn)，但尚有一定面積的殘存釘螺，其中浙江省殘存釘螺面積最大，螺情抽樣調(diào)查結(jié)果顯示浙江省有螺面積約為150～200 hm2(聞禮永等，2004)。本文根據(jù)傳播阻斷地區(qū)殘存釘螺面積大小和地域分布特點(diǎn)抽取了浙江省3個(gè)山丘型血吸蟲(chóng)病歷史流行區(qū)長(zhǎng)興、常山、婺城和2個(gè)水網(wǎng)型歷史流行區(qū)秀洲、平湖釘螺作為實(shí)驗(yàn)螺。隨著城市化建設(shè)的進(jìn)展，流動(dòng)人口日益增多，傳播阻斷地區(qū)輸入性血吸蟲(chóng)病例也呈上升勢(shì)頭(張劍鋒等，2007；江西均等，2007)。研究顯示，浙江省66%以上輸入性血吸蟲(chóng)病人來(lái)自江西、安徽，而浙江省近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的輸入性血吸蟲(chóng)病病例多以江西、安徽居多(李理等，2012)。上海市流動(dòng)人口中來(lái)自安徽省流動(dòng)人口的血清學(xué)陽(yáng)性數(shù)和發(fā)病人數(shù)均占首位(周曉農(nóng)等，2007)。因此本研究選用血吸蟲(chóng)地域株分別為與浙江省和上海市毗鄰的尚未達(dá)到血吸蟲(chóng)病傳播阻斷標(biāo)準(zhǔn)的安徽、江西和江蘇省血吸蟲(chóng)。

結(jié)果顯示，輸入性的血吸蟲(chóng)可以感染浙江釘螺，提示血吸蟲(chóng)病流行區(qū)外源性傳染源的輸入可感染傳播阻斷地區(qū)釘螺形成疫水，從而導(dǎo)致血吸蟲(chóng)病在這些地區(qū)重新傳播流行。浙江釘螺對(duì)湖沼型血吸蟲(chóng)病流行區(qū)血吸蟲(chóng)毛蚴易感性低，與許學(xué)積等(1987)報(bào)道血吸蟲(chóng)毛蚴對(duì)異地釘螺的感染率一般低于本地的感染率相符。不同類(lèi)型血吸蟲(chóng)病歷史流行區(qū)釘螺對(duì)輸入性的血吸蟲(chóng)表現(xiàn)出了不同的易感性，水網(wǎng)型地區(qū)釘螺對(duì)湖沼型地區(qū)血吸蟲(chóng)毛蚴易感性高，山丘型歷史流行區(qū)釘螺對(duì)湖沼型地區(qū)血吸蟲(chóng)毛蚴易感性低。水網(wǎng)型血吸蟲(chóng)病歷史流行區(qū)一旦釘螺面積回升，只要輸入少量病原體，即有可能引起血吸蟲(chóng)病重新傳播流行，因此需加強(qiáng)查滅殘存釘螺力度，以鞏固血防成果。山丘型歷史流行區(qū)釘螺對(duì)湖沼型流行區(qū)血吸蟲(chóng)的易感性低，但當(dāng)血吸蟲(chóng)毛蚴數(shù)量達(dá)到一定程度，仍可引發(fā)血吸蟲(chóng)病重新傳播流行，且本次研究未采集到陽(yáng)性光殼釘螺，我省山丘型光殼釘螺可能對(duì)這些地域株血吸蟲(chóng)的易感性高，因此，這些地區(qū)仍不能放松警惕。

研究結(jié)果顯示，用安徽、江西和江蘇血吸蟲(chóng)毛蚴以5個(gè)/螺感染浙江山丘型血吸蟲(chóng)病歷史流行區(qū)長(zhǎng)興、常山和婺城釘螺，除江西血吸蟲(chóng)感染常山釘螺發(fā)現(xiàn)2只陽(yáng)性螺，其余均未感染，提示當(dāng)血吸蟲(chóng)的毛蚴量下降后，釘螺可不發(fā)生感染。如果通過(guò)大量研究，找到釘螺與血吸蟲(chóng)幼蟲(chóng)的感染閾值，可為開(kāi)展血吸蟲(chóng)病流行病學(xué)研究、制定防治對(duì)策和監(jiān)測(cè)指標(biāo)、預(yù)測(cè)流行趨勢(shì)等提供理論依據(jù)，具有重要的現(xiàn)實(shí)指導(dǎo)意義。