楊曉東

【摘要】目的：建立丹毒寧膠囊中綠原酸的測(cè)定方法。方法：本次研究采用高效液相色譜法，色譜柱為Agilent TG-C18（250mm×4.6mm，5μm）；檢測(cè)波長(zhǎng)324nm；流動(dòng)相：甲醇-水-冰醋酸，比例為12:88:1；柱溫30℃；體積流量為1.0mL/min。結(jié)果：在0。1267-0.760μg上綠原酸線性關(guān)系良好，RSD為0.6%，回收率為98.6%。結(jié)論：在對(duì)丹毒寧膠囊綠原酸進(jìn)行測(cè)定時(shí)，選擇高效液相色譜法測(cè)定具有重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便等多種優(yōu)點(diǎn)，適用于丹毒寧膠囊的綠原酸測(cè)定。

【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法、丹毒寧、綠原酸

【中圖分類號(hào)】R722.12 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1004-4949(2014)06-0188-01

丹毒寧膠囊中的主要成分為連翹、重樓、玄參、金銀花、黃柏、地黃、蒲公英以及紫花地丁，是醫(yī)院中常用的一種制劑，丹毒寧膠囊具有消腫止痛、清熱解毒等功效，在臨床上通常用來治療惡寒發(fā)熱、復(fù)發(fā)性丹毒靜脈炎、丹毒、紅腫熱痛等癥狀［1］。由于在醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)中并沒有丹毒寧膠囊的測(cè)定項(xiàng)，所以并不利于對(duì)質(zhì)量的控制［2］。綠原酸則被認(rèn)為是所有藥材以及中成藥中消炎利膽、抗菌解毒的有效成分，被人們用作定量、定性的重要指標(biāo)。本次研究將選擇丹毒寧膠囊中綠原酸為定量測(cè)定指標(biāo)，并且通過高效液相色譜法測(cè)定丹毒寧中綠原酸的含量，現(xiàn)將報(bào)道如下。

1儀器與方法

1.1選用儀器與樣品

本次研究中所選用的儀器為SHIMADZULC-2010A高效液相色譜儀，工作站CLASS-VP；色譜柱：Agilent TC-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）。所用試劑為：(由天津市康科德科技有限公司生產(chǎn))甲醇;冰醋酸（天津化學(xué)試劑一廠），純凈水。本次研究中樣品為丹毒寧膠囊（批號(hào)200801、200802、200803）對(duì)照品為綠原酸（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110753）

1.2方法

本次研究色譜柱為：AgilentTC-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-水-冰醋酸，比例為12:88:1；檢測(cè)波長(zhǎng)為324nm；柱溫：30℃；體積流量：1.0mL/min。根據(jù)綠原酸峰計(jì)算理論板數(shù)，在4000以上。選取適量綠原酸做對(duì)照品，精密稱定，加入40μg/ml甲醇制成溶液，并將其搖勻。取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物，研細(xì)，取1g，并精密稱定，放置于錐形瓶中，同時(shí)加入50%甲醇50ml，稱定質(zhì)量，并行超聲處理，功率為250W，頻率為33kHz，45min，將其放冷，對(duì)質(zhì)量進(jìn)行稱定，其中減失的質(zhì)量用50%甲醇補(bǔ)足，并且將其搖勻，濾過，取續(xù)濾液獲得。根據(jù)丹毒寧膠囊中處方配比，將綠原酸外的其他藥味去除，制成陰性對(duì)照膠囊，以上述方法制作成陰性對(duì)照溶液。

分別精密吸取10μg供試品溶液、10μg對(duì)照品溶液以及10μg陰性對(duì)照溶液，注入色譜儀，根據(jù)上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)準(zhǔn)確記錄色譜圖。經(jīng)結(jié)果表明，在綠原酸對(duì)照品色譜峰相應(yīng)位置，陰性對(duì)照溶液并未出現(xiàn)干擾峰。

1.2.1線性關(guān)系

在對(duì)照品溶液中，分別精密吸取3、6、9、12、15、18μL，注入色譜儀，根據(jù)色譜條件對(duì)各自峰面積進(jìn)行測(cè)定，橫坐標(biāo)x以進(jìn)樣量（μg）表示，峰面積積分值以縱坐標(biāo)（Y）行線性回歸，其方程為：Y=2.731×106X+4.54×102。通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在0.127-0.76μg綠原酸線性關(guān)系良好。

1.2.2精密度試驗(yàn)

選取丹毒寧膠囊樣品1分，批號(hào)為200801，取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物，研細(xì)，取1g，并精密稱定，放置于錐形瓶中，同時(shí)加入50%甲醇50ml，稱定質(zhì)量，并行超聲處理，功率為250W，頻率為33kHz，45min，將其放冷，對(duì)質(zhì)量進(jìn)行稱定，其中減失的質(zhì)量用50%甲醇補(bǔ)足，并且將其搖勻，濾過，取續(xù)濾液獲得。連續(xù)6次對(duì)綠原酸峰面積進(jìn)行測(cè)定，試驗(yàn)結(jié)果得出RSD為0.12%。

1.2.3重現(xiàn)性試驗(yàn)

選擇同一批丹毒寧膠囊樣品，批號(hào)為200801共6份，根據(jù)“1.2.2”中方法制作成試品溶液，再根據(jù)色譜柱為：AgilentTC-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-水-冰醋酸，比例為12:88:1；檢測(cè)波長(zhǎng)為324nm；柱溫：30℃；體積流量：1.0mL/min。根據(jù)綠原酸峰計(jì)算理論板數(shù)，在4000以上。對(duì)每份樣品中綠原酸的量進(jìn)行測(cè)定。測(cè)試結(jié)果得RSD為0.75%。

1.2.4穩(wěn)定性試驗(yàn)

選擇丹毒寧膠囊樣品根據(jù)上述方法制成試品溶液，再根據(jù)色譜條件分別在0.4.8.11h測(cè)定樣品中綠原酸峰面積，其結(jié)果測(cè)得 RSD為0.55%，由此說明樣品溶液在12h內(nèi)較為穩(wěn)定。

1.2.5回收率試驗(yàn)

選取丹毒寧膠囊，將其混勻，樣本共6份，每份0.5g，精密稱定，將樣品置于錐形瓶中，往其中加入綠原酸對(duì)照品溶液（0.03752mg/mL）25mL，50%甲醇溶液25ml，對(duì)質(zhì)量進(jìn)行稱定，行超聲處理，其功率為250W，頻率33kHz，時(shí)間為45min，將其放冷后再稱定質(zhì)量，減失的質(zhì)量用50%甲醇補(bǔ)足，取續(xù)濾液［3］。同時(shí)吸取10μL注入色譜儀，測(cè)定綠原酸的質(zhì)量，同時(shí)對(duì)綠原酸的回收率進(jìn)行計(jì)算。最終得出RSD為0.5%，回收率高達(dá)97%。

2結(jié)果

選擇3批丹毒寧膠囊樣品，根據(jù)1.2.2中方法調(diào)制試品溶液，進(jìn)樣10μL，采用外標(biāo)法對(duì)綠原酸的量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表1.

表1丹毒寧膠囊綠原酸的測(cè)定結(jié)果

批號(hào) 綠原酸/（mg?g-1）200801 1.82200802 1.78200803 1.833討論

在本次研究中，分別對(duì)丹毒寧樣品進(jìn)行了50%乙醇加熱回流處理、50%甲醇超聲處理、50%甲醇加熱回流處理以及50%乙醇超聲處理，經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)50%甲醇提取方法效果最佳。同時(shí)從本次試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，與甲醇加熱回流處理方法相比，超聲處理結(jié)果更好，所以本次研究試驗(yàn)樣品試用50%甲醇超聲提取法［4］。同時(shí)還對(duì)不同超聲提取時(shí)間進(jìn)行了比較分析，最后發(fā)現(xiàn)在45min和60min時(shí)綠原酸的量均相同，所以確定提取時(shí)間為45min，以此種方法來制備供試品溶液［5］。

在對(duì)丹毒寧膠囊綠原酸進(jìn)行測(cè)定時(shí)，選擇高效液相色譜法測(cè)定具有重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便等多種優(yōu)點(diǎn)，適用于丹毒寧膠囊的綠原酸測(cè)定。

參考文獻(xiàn)

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