?！×?，陳紅兵，朱純亮，朱　君，張雯雯

?

·論著·

細(xì)小病毒B19和兒童急性白血病關(guān)系的探討

常林，陳紅兵，朱純亮，朱君，張雯雯

210009江蘇南京，南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京兒童醫(yī)院檢驗科

[摘要]目的對急性白血病兒童細(xì)小病毒B19的感染及其影響進(jìn)行探討。方法回顧性分析某院2011年1月-2015年1月住院的110例急性白血病兒童的臨床資料，把110例兒童分為兩組：第1組：60名已接受化療的急性白血病兒童；第2組：50例新發(fā)現(xiàn)的、未接受化療急性白血病兒童; 第3組:選取100例性別、年齡均匹配的兒童為健康對照組。采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)檢測細(xì)小病毒B19 DNA，ELISA法檢測以上3組兒童的血清細(xì)小病毒B19 IgM抗體。結(jié)果①在110例患兒中，細(xì)小病毒B19 DNA和(或)IgM陽性的為61例，陽性率為55.5%；對照組均為陰性。②第1組細(xì)小病毒B19 DNA和IgM陽性率分別為28.3%和33.3%；第2組細(xì)小病毒B19 DNA和IgM陽性率分別為42.0%和52.0%。③細(xì)小病毒B19感染的急性白血病兒童貧血發(fā)生率為73.8%,無感染兒童貧血發(fā)生率為42.9%(P<0.05)； 細(xì)小病毒B19感染的急性白血病兒童血小板減少發(fā)生率為68.9%,無感染兒童血小板減少發(fā)生率為36.7%(P<0.05)。結(jié)論50%左右的急性白血病兒童存在細(xì)小病毒B19感染；新發(fā)現(xiàn)、未接受化療的急性白血病兒童更容易存在細(xì)小病毒B19感染；細(xì)小病毒B19感染是急性白血病兒童紅細(xì)胞系和血小板減少的重要原因。

[關(guān)鍵詞]細(xì)小病毒B19；急性白血??；兒童

細(xì)小病毒B19是近些年來發(fā)現(xiàn)的一種重要病原體，可引起人類多種疾病，2～7歲的兒童是細(xì)小病毒B19的主要傳染源[1]。已有文獻(xiàn)報道患血液系統(tǒng)腫瘤的兒童細(xì)小病毒B19感染率較高，且該病毒可誘發(fā)慢性貧血和骨髓紅細(xì)胞受抑[2]。本研究對在我院住院的急性白血病兒童進(jìn)行細(xì)小病毒B19 DNA和特異性抗體細(xì)小病毒B19 IgM進(jìn)行檢測，以探討急性白血病兒童中細(xì)小病毒B19的感染及其影響。

1對象與方法

1.1研究對象2011年1月-2015年1月來我院住院的110例急性白血病兒童，包括30例急性髓系白血病(acute myeloblastic leukemia, AML)兒童和80例急性淋巴細(xì)胞白血病(acute lymphoblastic leukemia, ALL)兒童，其中男57例，女53例，年齡從1歲到14歲。將其分為兩組：第1組：60例已接受化療的急性白血病兒童；第2組：50例新發(fā)現(xiàn)、未接受化療的急性白血病兒童。所有急性白血病兒童按照形態(tài)學(xué)(Morphology, M)、免疫學(xué)(Immunology, I)和細(xì)胞遺傳學(xué)(Cytogenetic, C)MIC分型診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]診斷。第3組：來本院體檢健康，血常規(guī)等檢查均正常的100例兒童納入對照組，其中男52例，女48例，年齡從6個月到13歲。以上三組兒童年齡、性別等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1.2主要試劑和儀器細(xì)小病毒B19 DNA抽提試劑盒 (德國QIAGEN 公司)， 細(xì)小病毒B19-IgM抗體檢測試劑盒(德國R-Biopharm 公司)，iCyclerIQ5 PCR儀(美國BIO-RAD公司)

1.3方法

1.3.1一般檢查包括血常規(guī)、血涂片分類和骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查。根據(jù)《全國臨床檢驗操作規(guī)程》(第3版)判定，血液中兒童血紅蛋白濃度<120 g/L為貧血，血小板計數(shù)<100×109為血小板減少。

1.3.2細(xì)小病毒B19 DNA的檢測靜脈抽取全血5 mL，按照說明書進(jìn)行操作，采用PCR擴增法。兩對引物序列如下: 5′-CTTTAGGTATAGC-CAACTGG-3′；5′-ACACTGAGTTTAC-TAGTGGC-3￣′￣；和￣5￣′￣-￣C￣A￣A￣A￣A￣G￣C￣A￣T￣G￣T￣-GAGTGAGG-3￣′￣；￣5￣′￣-￣C￣C￣T￣T￣A￣T￣A￣A￣T￣G￣G￣T￣-￣G￣C￣T￣C￣T￣G￣G￣G￣-￣3′(上海申能博彩生物有限公司合成)。細(xì)小病毒B19陽性對照DNA為東南大學(xué)病原微生物系饋贈。擴增產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠中電泳，EB染色，紫外線燈下觀察結(jié)果。

1.3.3細(xì)小病毒B19 IgM抗體的檢測操作按試劑盒說明書進(jìn)行。

2結(jié)果

110例急性白血病兒童中兩組共38例細(xì)小病毒B19 DNA陽性,陽性率34.5%(38/110)； 共46例細(xì)小病毒B19 IgM陽性,陽性率41.8%(46/110)；對照組100例均為陰性,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，表1)。110例中有細(xì)小病毒B19感染的患病兒童為61例，陽性率為55.5%(61/110)，其中23例單獨的B19 IgM陽性，15例單獨的B19 DNA陽性，還有23例兒童B19 IgM和B19 DNA均為陽性； 49例未感染細(xì)小病毒B19。

回顧性分析患病兒童的血常規(guī)，發(fā)現(xiàn)61例細(xì)小病毒B19感染的患病兒童中，45例在檢測前7 d～6個月出現(xiàn)明顯的、進(jìn)行性面色蒼白,貧血發(fā)生率73.8%；22例長達(dá)10 d～22個月的B19 DNA陽性,連續(xù)動態(tài)監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，血紅蛋白維持在42～90 g/L持續(xù)1～18個月。而49例未感染細(xì)小病毒B19患兒中21例貧血,貧血發(fā)生率42.9%,兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。細(xì)小病毒B19感染的急性白血病兒童血小板減少發(fā)生率為68.9%,在檢測前7 d～6個月血小板計數(shù)在(10～80)×109/L之間；細(xì)小病毒B19陰性患病兒童血小板減少發(fā)生率36.7%,兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

3討論

2015年焦麗等[4]證實了近1/3的惡性腫瘤患兒存在B19感染，兒童血液系統(tǒng)腫瘤更易發(fā)生B19感染。Zaki等[5]研究表明，細(xì)小病毒B19感染是急性白血病兒童血細(xì)胞減少的重要原因，甚至細(xì)小病毒B19感染還影響化療的療效。細(xì)小病毒B19感染亦與肝脾及淋巴結(jié)腫大、紅細(xì)胞系統(tǒng)受抑制、淋巴細(xì)胞增殖均有關(guān)聯(lián)，而且細(xì)小病毒B19感染也許是急性白血病一項重要的發(fā)病機制。本組研究中， 50%左右的急性白血病兒童存在細(xì)小病毒B19感染,多數(shù)伴有不同程度的貧血; 22例細(xì)小病毒B19感染兒童持續(xù)時間長達(dá)10 d～22個月,并同時患有慢性貧血亦達(dá)1～18個月。De Maria等[6]認(rèn)為，受感染的紅細(xì)胞成為吞噬細(xì)胞的靶細(xì)胞，可能是本病發(fā)生的機理之一。本研究中感染兒童的血小板減少發(fā)生率也明顯高于未感染兒童，這與相關(guān)研究結(jié)果[7-8]相似。惡性腫瘤及化療均可造成免疫抑制,這可能是兒童易感染細(xì)小病毒B19的一個原因，化療導(dǎo)致的免疫抑制或反復(fù)地輸血亦可能造成了細(xì)小病毒B19的持續(xù)性感染[9-10]。本研究還發(fā)現(xiàn),有6例化療前是陰性,而化療期間檢出了細(xì)小病毒B19 DNA。有研究表明，亞臨床的免疫缺陷患者伴隨細(xì)小病毒B19感染可能導(dǎo)致白血病的發(fā)生，或是細(xì)小病毒B19感染可能促進(jìn)克隆樣增生[11]。但細(xì)小病毒B19是否是兒童急性白血病的致病因素，還有待進(jìn)一步的科學(xué)考證。

某些免疫缺陷或抑制者，有時缺乏可檢測到的特異性抗體反應(yīng)，因此一般情況下，若僅依據(jù)細(xì)小病毒B19 IgM和IgG檢測結(jié)果，判斷細(xì)小病毒B19感染尚有一定的局限性，因此對于細(xì)小病毒B19病毒感染診斷最好結(jié)合病毒DNA檢測。根據(jù)之前的報道，有檢測到單獨的細(xì)小病毒B19 IgM陽性和單獨的B19 DNA陽性[12]。本研究檢測出23例單獨的細(xì)小病毒B19 IgM陽性，15例單獨的細(xì)小病毒B19 DNA陽性，提示采用兩種方法檢測細(xì)小病毒B19感染的必要性。

綜上所述，不管有無進(jìn)行過化療，細(xì)小病毒B19在急性白血病兒童中具有較高的感染率，細(xì)小病毒B19感染與急性白血病發(fā)病可能具有相關(guān)性，并可能加重急性白血病的某些臨床癥狀，值得進(jìn)一步探討，以明確細(xì)小病毒B19感染與急性白血病的發(fā)病關(guān)系、臨床特征及其預(yù)后。

【參考文獻(xiàn)】

[1]彭燕. 人微小病毒B19及其研究新進(jìn)展[J]. 現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生, 2013, 29 (7):1021-1023.

[2]焦麗,張國成,錢新宏,等.血液系統(tǒng)腫瘤患兒人微小病毒B19感染的檢測及意義[J].中華血液學(xué)雜志, 1999, 20 (2):94-95.

[3]竺曉凡.小兒血液學(xué)[M ].天津:天津科學(xué)技術(shù)出版社, 2005:424-443.

[4]焦麗,李林瑞,胡偉,等.兒童惡性腫瘤與人細(xì)小病毒B19DNA的關(guān)系探討[J]. 武警醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2008, 17(8):669-671.

[5]Zaki ME, Ashray RE.Clinical and hematological study for Parvovirus B19 infection in children with acute leukemia[J].Int J Lab Hematol,2010,32(2):159-166.

[6]De Maria A,Zolezzi A,Passalacqua G,et al.Melkersson-Rosenthal syndrome associated with parvovirus B19 viraemia and haemophagocytic lymphohistiocytosis[J].Clin Exp Dermatol,2009,34(8):623-625.

[7]王穎超,劉冬杰,馬麗娜，等.兒童噬血細(xì)胞綜合征與人微小病毒B19感染的相關(guān)性及臨床特征分析[J].中國當(dāng)代兒科雜志, 2015,17(1):26-30.

[8]張篤飛,陳桂芳,謝躍琦.特發(fā)性血小板減少性紫癜患兒血清微小病毒B19檢測及意義[J].中國小兒血液與腫瘤雜志,2007,12(3):119-123.

[9]Fattet S, Cassinotti P, Popovic MB. Persistent human parvovirus B19 infection in children under maintenance chemotherapy for acute lymphocytic leukemia[J].J Pediatr Hematol Oncol,2004,26(8):497-503.

[10]Mihneva Z. Clinical manifestations, risks and trends regarding human parvovirus B19 infection[J].Med Rev, 2005,41:5-14.

[11]Yetgin S, Cetin M, Aslan D, et al. Parvovirus B19 infection presenting as pre-B-cell acute lymphoblastic leukemia: a transient and progressive course in two children[J].J Pediatr Hematol Oncol,2004,26(10):689-692.

[12]常林,陳紅兵, 朱君,等.急性白血病患兒感染細(xì)小病毒B19的血常規(guī)和臨床體征分析[J].東南國防醫(yī)藥, 2013,15(5):470-473.

(本文編輯：張仲書；英文編輯：王建東)

Relationship between human parvovirus B19 and acute leukemia in child patients

CHANG Lin,CHEN Hong-bing, ZHU Chun-liang,ZHUJun,ZHANGWen-wen.

ClinicalLaboratory,NanjingChildren′sHospitalAffiliatedtoNanjingMedicalUniversity,Nanjing,Jiangsu210009,China

[Key words]parvovirus B19; acute leukemia; children

[Abstract]ObjectiveTo study the condition of B19DNA infection in child patients with acute leukemia and the correlation between B19 infection and acute leukemia. Methods110 cases of acute leukemia from January 2011 to January 2015 were analyzed by the method of retrospective study. Two groups were included: Group Ⅰ comprised 60 children with acute leukemia receiving chemotherapy and Group Ⅱ comprised 50 children with recently diagnosed acute leukemia. Serum parvovirus B19 IgM were investigated by enzyme-linked immunosorbant assay and the virus DNA was sought by polymerase chain reaction assay in 110 cases of acute leukemia and 100 cases of healthy children. Results①The positive rate of B19 DNA and/or B19 IgM in acute leukemia group was 55.5% (61/110) and the control group was negative. ②Viral DNA was found in 28.3% and B19 IgM was found in 33.3% of Group I patients; Viral DNA was found in 42.0% and B19 IgM was found in 52.0% of Group Ⅱ. ③There was significant difference in incidence of anemia between B19 positive and negative children with acute leukemia. The former was 73.8%, the latter was 42.9%. There was significant difference in incidence of thrombocytopenia between B19 positive and negative children with acute leukemia. The former was 68.9%, the latter was 36.7%. ConclusionAbout half of the children with acute leukemia have been infected by B19. Children with recently diagnosed acute leukemia are more easily infected by parvovirus B19. Parvovirus B19 infection is an important cause of cytopenia in children with acute leukemia.

基金項目：南京醫(yī)科大學(xué)科技發(fā)展基金資助課題(2013NJMV103)

[中圖分類號]R733.71

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

doi：10.3969/j.issn.1672-271X.2016.02.019

(收稿日期：2016-01-12；修回日期：2016-02-17)

引用格式：常林，陳紅兵，朱純亮,等.細(xì)小病毒B19和兒童急性白血病關(guān)系的探討[J].東南國防醫(yī)藥，2016,18(2):171-173.