歐陽圣昳，范玉蘭，何文嫻，謝海華，薛　珺，李　勛

(贛南師范學(xué)院 化學(xué)化工學(xué)院，江西 贛州　341000)

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釘螺化學(xué)信息物質(zhì)的提取與鑒別* 1

歐陽圣昳，范玉蘭，何文嫻，謝海華，薛珺，李勛?

(贛南師范學(xué)院 化學(xué)化工學(xué)院，江西 贛州341000)

摘要：為了探討湖北釘螺(Oncomelania hupensis)體內(nèi)化學(xué)信息物質(zhì)，本研究采用浸提法來提取釘螺的軟體組織，優(yōu)化提取時(shí)間和提取溶劑，采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(Gas Chromatography-Mass Spectrometry, GC-MS)技術(shù)分離和鑒定出提取液中的目標(biāo)化合物，并分析其相對(duì)含量.結(jié)果顯示，雄性釘螺軟體組織中提取鑒定出12種化合物，雌性釘螺軟體組織中提取鑒定出15種化合物，其中相對(duì)含量較高的物質(zhì)均為固醇類和酯類物質(zhì).

關(guān)鍵詞：釘螺；化學(xué)信息物質(zhì)；提取

血吸蟲病是一種嚴(yán)重危害人類健康的人獸共患寄生蟲病，目前主要流行于 75個(gè)熱帶和亞熱帶地區(qū)的國家，每年大約有2億多人感染血吸蟲并引起嚴(yán)重的急慢性疾病[1-2].湖北釘螺(Oncomelaniahupensis)是日本血吸蟲(Schistosomiajaponicum)的唯一中間宿主[3].釘螺存在明顯的區(qū)域聚集現(xiàn)象[4]，因此，我們初步推測(cè)其存在化學(xué)信息物質(zhì).目前為止，很多化學(xué)信息物質(zhì)已經(jīng)被鑒定出來，如小地老虎[5]、長足大竹象[6]、臍腹小蠹[7]和腐食酪螨[8]等.化學(xué)信息物質(zhì)具有無毒、無害和種屬特異性等特點(diǎn)，可利用其進(jìn)行高效、可持續(xù)的害蟲治理.目前，應(yīng)用化學(xué)信息物質(zhì)已成為國內(nèi)外特別是歐美發(fā)達(dá)國家防治害蟲的重要措施[9-10].釘螺具有很強(qiáng)的繁殖能力，近年來我國釘螺連年大發(fā)生，卻沒有有效防治手段的情況下，借鑒化學(xué)信息物質(zhì)成功應(yīng)用于昆蟲控制的方法，探討在我國利用化學(xué)信息物質(zhì)防治釘螺，無疑是一項(xiàng)極有價(jià)值的嘗試.在Oncomelania屬中，對(duì)于釘螺化學(xué)信息物質(zhì)的研究國內(nèi)外尚無相關(guān)的報(bào)道.本研究采用浸提法來提取釘螺化學(xué)信息物質(zhì)，采用GC-MS來分離鑒定化學(xué)信息物質(zhì)，研究成果將為釘螺控制提供新的途徑.

1材料與方法

1.1主要材料和儀器

主要材料釘螺樣本(星子縣)，乙醇，乙酸乙酯.

主要儀器美國Agilent 6890N-5973N氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀.

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1釘螺樣本的采集

1.2.2釘螺軟體組織樣本的制備

1.2.3提取液的制備

向分別盛有雌雄釘螺軟體組織的樣品瓶中分別加入正己烷或乙酸乙酯定容至1.0 mL，擰緊蓋子后立即用Parafilm封口膜進(jìn)行密封，然后將樣品瓶置于4 ℃冰箱中靜態(tài)提取.

1.2.4GC-MS檢測(cè)條件

氣相色譜條件: HP-5石英毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；進(jìn)樣口溫度280 ℃；柱程序升溫:初始溫度100 ℃，以20 ℃/min速率升溫至290 ℃，保留20 min；進(jìn)樣量1 μL，不分流.載氣為高純He氣，流量1.0 mL/min.

質(zhì)譜條件:電離方式為電噴霧電離EI，電子能量70 eV，離子源溫度230 ℃，接口溫度280 ℃，數(shù)據(jù)采集掃描模式為全掃描.

2結(jié)果與分析

2.1萃取時(shí)間的優(yōu)化

對(duì)釘螺軟體組織進(jìn)行24 h、48 h、72 h靜態(tài)萃取后，均得到亮黃色溶液，按上述GC-MS條件對(duì)釘螺軟體組織提取液進(jìn)行分析鑒定，發(fā)現(xiàn)目標(biāo)物沒有明顯的變化.故對(duì)其進(jìn)行24 h靜態(tài)萃取即可.

2.2萃取溶劑的選擇

圖1　雄性釘螺軟體組織萃取液的GC-MS總離子流圖

分別采用正己烷和乙酸乙酯對(duì)釘螺軟體組織進(jìn)行24 h靜態(tài)提取，按上述GC-MS條件對(duì)釘螺軟體組織提取液進(jìn)行分析鑒定，經(jīng)美國NIST 質(zhì)譜庫檢索，并輔助以人工解析，發(fā)現(xiàn)正己烷萃取獲得目標(biāo)物較少，而乙酸乙酯萃取獲得目標(biāo)物較多，并且在正己烷中萃取出來的目標(biāo)物在乙酸乙酯萃取液中均出現(xiàn)，故選用乙酸乙酯為萃取溶劑.

2.3雌雄釘螺軟體組織提取的化學(xué)信息物質(zhì)

分別采用乙酸乙酯對(duì)雌雄釘螺軟體組織進(jìn)行24 h的靜態(tài)萃取， 按上述GC-MS條件對(duì)釘螺軟體組織提取液進(jìn)行分析鑒定，經(jīng)美國NIST 質(zhì)譜庫檢索，并輔助以人工解析，按峰面積歸一化測(cè)得各成分相對(duì)質(zhì)量百分含量，分別獲得雄性釘螺軟體組織提取目標(biāo)物結(jié)果(見圖1和表1)和雌性釘螺軟體組織目標(biāo)物結(jié)果(見圖2和表2).

表1　雄性釘螺軟體組織提取液GC-MS分析結(jié)果

由圖1和表1可知，在雄性釘螺軟體組織中共提取和鑒定出12個(gè)物質(zhì)，主要為酯類和醇類化合物，還有烷烴和含磷化合物.通過面積歸一化法測(cè)定其中各物質(zhì)的相對(duì)含量，其中保留時(shí)間為16.024 min的Cholest-5-en-3-ol[3β]-物質(zhì)相對(duì)含量較高，為39.14%；其次為保留時(shí)間為10.022min的Phenol,2,2′-methylenebis[6-[1]-dimethylethyl〗-4-methyl-物質(zhì)，其相對(duì)含量為19.91%.

圖2　雌性釘螺軟體組織提取液的GC-MS總離子流圖

由圖2和表2可知，在雌性釘螺軟體組織中共提取和鑒定出15個(gè)化合物，也主要為醇類和酯類化合物，還有一個(gè)烷烴化合物.通過面積歸一化法測(cè)定其中各物質(zhì)的相對(duì)含量，發(fā)現(xiàn)保留時(shí)間為16.024 min的Cholest-5-en-3-ol[3β]-物質(zhì)相對(duì)含量高達(dá)56.02%，其次為保留時(shí)間為16.642 min的Ergosta-5,22-dien-3-ol[3β,22e,24s]-物質(zhì)相對(duì)含量為10.39%.

通過比較雄性和雌性釘螺軟體組織提取的化學(xué)信息物質(zhì)可知，雌性釘螺軟體組織中增加了4個(gè)雄性中沒有的物質(zhì)，包括8.967 min的Heptadecanoic acid,1,5-methyl-,ethyl ester物質(zhì)、15.464 min的Ethyl iso-alloc holate物質(zhì)、17.323 min的Erogosterol物質(zhì)和18.187 min的Stigmasterol，而雄性釘螺軟體組織提取物中在20.975 min中的Methylene bis[2,4.6-triisoppropy]phenyl phosphine物質(zhì)在雌性釘螺中未發(fā)現(xiàn)該組分.

表2　雌性釘螺軟體組織提取液GC-MS分析結(jié)果

3結(jié)論與討論

通過對(duì)星子縣湖沼釘螺進(jìn)行雌雄區(qū)分，采用有機(jī)溶劑靜態(tài)提取其軟體組織，采用GC-MS聯(lián)用技術(shù)分離鑒定其化學(xué)信息物質(zhì)，主要結(jié)論如下：

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* 收稿日期：2016-04-01

DOI：10.13698/j.cnki.cn36-1037/c.2016.03.008

基金項(xiàng)目：江西省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(20142BAB203011)；國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(50968002)

作者簡介：歐陽圣依，女，贛南師范學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院2015級(jí)分析化學(xué)專業(yè)碩士研究生.

通訊作者：?李勛，男，贛南師范學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院教授、博士，研究方向：環(huán)境分析.

中圖分類號(hào)：O656

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1004-8332(2016)03-0030-03

Extraction and Identification of the Semiochemicals in Oncomelania Hupensis

OUYANG Shengyi, FAN Yulan, HE Wenxian, XIE Haihua, XUE Jun, LI Xun

(SchoolofChemistryandChemicalEngineering,GannanNormalUniversity,Ganzhou341000,China)

Abstract:The aim of this study is to identify the semiochemicals from Oncomelania hupensis. The extraction method was used to extract the soft tissues of Oncomelania hupensis, and the extraction time and extraction solvent were optimized. GC-MS method was used to qualitative and semi-quantitative analysis. The results showed that there were 12 substances in the male Oncomelania hupensis and 15 substances in the female Oncomelania hupensis respectively. The relatively high contents were sterols and esters.

Key words:Oncomelania hupensis; semiochemicals; extraction

·有機(jī)藥物化學(xué)·

網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/36.1037.C.20160510.1213.026.html