張東?！∑顣岳颉堓W華　商曉青　劉洪波

【摘要】 目的：研究蛋白酪氨酸激酶-7（Protein tyrosine kinase-7，PTK7）在不同級(jí)別結(jié)腸腺瘤組織及瘤旁非腫瘤黏膜組織中的表達(dá)和意義。方法：收集31例結(jié)腸腺瘤組織標(biāo)本，并進(jìn)行免疫組化染色檢測(cè)PTK7蛋白的表達(dá)，結(jié)合患者的臨床病理資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果：非腫瘤黏膜組織中PTK7檢出率為29.6%（8/27），腺瘤組織中為77.4%（24/31）。瘤旁非腫瘤黏膜組織中，高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變與低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ 字2=0.051，P>0.05）。非腫瘤黏膜組織與腺瘤組織PTK7表達(dá)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。腺瘤組織中，高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變與低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。未發(fā)現(xiàn)PTK7表達(dá)與性別（P=0.198）或年齡（P=0.198）之間有相關(guān)性。結(jié)論：PTK7參與結(jié)腸腺瘤的發(fā)生發(fā)展，其陽性表達(dá)對(duì)結(jié)腸腫瘤的早期干預(yù)有提示意義，PTK7可作為預(yù)測(cè)結(jié)直腸癌的發(fā)生候選生物標(biāo)志物。

【關(guān)鍵詞】 蛋白酪氨酸激酶-7； 結(jié)腸腺瘤； 上皮內(nèi)瘤變； 免疫組織化學(xué)

Expression and Significance of PTK7 in Different Grade of Colonic Adenoma and Non Tumor Mucosa Adjacent to Tumor/ZHANG Dong-hai，QI Xiao-li，ZHANG Yi-hua，et al.//Medical Innovation of China，2017，14（27）：116-119

【Abstract】 Objective：To investigate the expression and significance of protein tyrosine kinase-7（PTK7） in different grade colorectal adenoma and non tumor mucosa adjacent to tumor.Method：31 cases of adenoma samples and immunohistochemical staining was used to detect the expression of PTK7 protein expressions，combined with cilinical pathological data were statistical analyzed.Result：The detection rate of PTK7 was 29.6%（8/27） in non-tumorous mucosa and adenoma tissues was 77.4%（24/31）.PTK7 expression in surrounding non-tumorous mucosa between high-grade adenoma and low-grade adenoma was no significant different（ 字2=0.051，P>0.05）.The difference of PTK7 expression between non-tumorous mucosa and adenoma tissues was statistically significant（P<0.05）.A marked difference of PTK7 expression was also found between high-grade epithelial adenoma and low-grade epithelial adenoma（P<0.05）.PTK7 expression was not found to be associated with patients gender（P=0.198） or age（P=0.198）.Conclusion：PTK7 may involved in the occurrence and development of colorectal adenoma，its overexpression may be a clue for early diagnosis of colorectal tumor，PTK7 may be a candidate biomarker to predict colorectal cancer genesis.

【Key words】 Protein tyrosine kinase-7； Colorectal adenoma； Intraepithelial neoplasia； Immunohistochemistry

First-authors address：Capital Medical University Daxing Hospital，Beijing 102600，China.

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.27.033

蛋白酪氨酸激酶-7（protein tyrosine kinase-7，PTK7）通常被認(rèn)為是一種癌基因，研究發(fā)現(xiàn)PTK7與多種腫瘤如紅白血病細(xì)胞系表達(dá)以及食管鱗狀細(xì)胞癌、前列腺癌、黑色素瘤觀察、肺鱗狀細(xì)胞癌與肝細(xì)胞癌等的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)[1-6]，但目前尚不清楚PTK7的表達(dá)是否與結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。本研究收集了31例結(jié)腸腺瘤組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組化染色，檢測(cè)PTK7蛋白在不同級(jí)別腺瘤組織以及腺瘤旁非腫瘤黏膜組織的表達(dá)情況，比較其間的差異以及預(yù)后預(yù)測(cè)意義?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2014年1-6月本院病理診斷為結(jié)腸腺瘤的標(biāo)本31例，男14例，女17例。組織學(xué)分級(jí)：低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變11例，高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變20例，腺瘤旁非腫瘤黏膜組織27例。所有腺瘤標(biāo)本均為結(jié)腸鏡下高頻電刀切除，術(shù)前均未接受過與腺瘤相關(guān)的各種其他治療。endprint

1.2 方法

1.2.1 檢測(cè)標(biāo)本 由首都醫(yī)科大學(xué)大興醫(yī)院提供。

1.2.2 免疫組織化學(xué)方法檢測(cè) 標(biāo)本經(jīng)4%甲醛固定常規(guī)脫水、石蠟包埋，4 μm切片，常規(guī)HE染色，置于3%過氧化氫15 min以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。用EDTA（pH值8.0）（中國北京中山金橋生物技術(shù)有限公司）高壓修復(fù)抗原。待冷卻至室溫后，用5%脫脂牛奶封閉切片1 h，之后孵育濃縮型兔多克隆抗體anti-ptk7（1∶7500，sab3500340，Sigma）在4 ℃過夜。應(yīng)用兔/鼠通用型二抗（EnVisionTM Detection System Peroxidase/DAB，Dako），用現(xiàn)配的DAB顯色液（中國北京中山金橋生物技術(shù)有限公司）顯色，用蘇木素復(fù)染核。

1.3 觀察指標(biāo)與判定標(biāo)準(zhǔn) （1）免疫組織化學(xué)染色結(jié)果判斷：PTK7染色結(jié)果及評(píng)分由兩名高年資病理醫(yī)生獨(dú)立盲評(píng)。PTK7染色的免疫組化評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)判定，分別按照染色陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)（PP）和染色強(qiáng)度（SI）進(jìn)行計(jì)分。PP：0分（無）；1分（<25%）；2分（25%～75%）；3分（>75%）。SI：0分（無）；1分（弱）；2分（中）；3分（強(qiáng)）。免疫組化積分（IRS）=陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)計(jì)分（PP）×染色陽性強(qiáng)度計(jì)分（SI），0分視為陰性，大于0分為陽性。因標(biāo)本量較少，故總結(jié)時(shí)僅分為0分、1分與2分三組。（2）觀察比較：高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變與低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組間的PTK7檢出率；腺瘤組織的高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變與低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組間的PTK7檢出率；瘤旁非腫瘤黏膜組織與腺瘤組織之間的PTK7檢出率；檢驗(yàn)PTK7表達(dá)與31例腺瘤患者性別之間有無相關(guān)性；檢驗(yàn)PTK7表達(dá)與31例腺瘤患者年齡之間有無相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 選擇SPSS 10.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用 字2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

31例結(jié)腸腺瘤組織及27例瘤旁非腫瘤黏膜組織PTK7免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果，（1）在瘤旁非腫瘤黏膜組織中PTK7檢出率29.6%（8/27），高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變與低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ 字2=0.051，P>0.05）。（2）在腺瘤組織中PTK7檢出率77.4%（24/31），高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變與低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ 字2=24.74，P<0.05）。（3）瘤旁非腫瘤黏膜組織與腺瘤組織比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ 字2=25.378，P<0.05）。（4）同時(shí)評(píng)估了PTK7表達(dá)與31例腺瘤患者臨床病理特征的相關(guān)性，未發(fā)現(xiàn)PTK7表達(dá)與患者性別（P=0.198）或年齡（P=0.198）之間有相關(guān)性。見表1。

3 討論

關(guān)于結(jié)直腸癌的發(fā)生，目前較公認(rèn)的是“腺瘤→癌變（adenoma→carcinoma）”學(xué)說，因此通常將結(jié)腸腺瘤列為“結(jié)直腸癌的最主要癌前病變”[7]，臨床對(duì)早期發(fā)現(xiàn)的結(jié)腸腺瘤多數(shù)進(jìn)行摘除，按照目前治療水平，多數(shù)在結(jié)腸鏡下進(jìn)行[8]。對(duì)于摘除的結(jié)腸腺瘤，目前病理診斷多將既往的異型增生改稱為“上皮內(nèi)瘤變”[7-8]，低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變對(duì)應(yīng)于Ⅰ～Ⅱ級(jí)異型增生，高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變則對(duì)應(yīng)于Ⅲ級(jí)異型增生和原位癌。上皮內(nèi)瘤變是一種以形態(tài)學(xué)改變?yōu)樘卣鞯纳掀ば圆∽儯ńM織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，伴細(xì)胞增殖動(dòng)力學(xué)和分化異常，本研究分組是按照上述原則執(zhí)行的。上述也提示對(duì)結(jié)腸腺瘤進(jìn)行PTK7檢測(cè)確有必要性及有一定的臨床意義。

有研究顯示，PTK7在脊椎動(dòng)物的胚胎發(fā)育和發(fā)生過程中發(fā)揮十分重要的作用，在許多腫瘤中PTK7出現(xiàn)高表達(dá)[9-13]。近期國內(nèi)有學(xué)者在其他腫瘤方面有關(guān)于PTK7表達(dá)的研究報(bào)告[14]。王建東等[15]發(fā)現(xiàn)PTK7在腫瘤細(xì)胞核內(nèi)皮細(xì)胞的遷移中發(fā)揮著重要的作用，在許多腫瘤中PTK7出現(xiàn)高表達(dá)[1]。黃群鋒等[16]用免疫組化法檢測(cè)了80例食管鱗狀細(xì)胞癌標(biāo)本有47例（56.25%）PTK7蛋白表達(dá)陽性，但在63例癌旁組織及正常組織中PTK7表達(dá)均為陰性，而且PTK7表達(dá)越高，患者的5年生存率越低。張關(guān)亭等[17]發(fā)現(xiàn)，在急性淋巴細(xì)胞白血病患者中PTK7的表達(dá)量高于正常對(duì)照組，血清中PTK7的含量檢查對(duì)于診斷AML有潛在臨床價(jià)值，可以用于AML的早期診斷。張萍[18]曾研究PTK7與頭頸部鱗癌的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)PTK7有可能成為頭頸部鱗癌一個(gè)比較理想的治療靶點(diǎn)，PTK7促進(jìn)頭頸部鱗癌細(xì)胞的侵襲和生長，PTK7強(qiáng)陽性為頭頸部鱗癌的不良預(yù)后因素之一。王海燕等[19]發(fā)現(xiàn)，卵巢癌與正常組織及良性腫瘤中PTK7的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，PTK7在交界性卵巢腫瘤中的表達(dá)與臨床分期（P=0.038），腹膜轉(zhuǎn)移和或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P=0.038）均有相關(guān)性。由此可見，PTK7的表達(dá)與腫瘤的生存率、預(yù)后評(píng)估關(guān)系較密切。

本研究發(fā)現(xiàn)，在瘤旁非腫瘤黏膜組織PTK7檢出率29.6%（8/27），這與黃群鋒等[16]食管鱗狀細(xì)胞癌的結(jié)果不同，是否與腫瘤發(fā)生的部位不同相關(guān)，尚待進(jìn)一步研究。在高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變與低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組的瘤旁非腫瘤黏膜組織中，PTK7表達(dá)陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ 字2=0.051，P>0.05），提示無論何級(jí)別腺瘤的患者均有可能表達(dá)PTK7。在腺瘤組織中，PTK7檢出率77.4%（24/31），高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組與低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ 字2=24.74，P<0.05）。瘤旁非腫瘤黏膜組織與腺瘤組織之間PTK7檢出率也存在明顯差異（ 字2=25.378，P<0.05）。尚可看到，在PTK7陽性的腺瘤組織中染色強(qiáng)度為2分的比例達(dá)45.8%（11/24），而瘤旁非腫瘤黏膜組織無一例染色強(qiáng)度為2分，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），可能與病例數(shù)較少有關(guān)，但也顯示了一種趨勢(shì)，即PTK7表達(dá)強(qiáng)度與結(jié)腸腺瘤級(jí)別有可能相關(guān)。結(jié)果提示，在結(jié)腸腺瘤組織中可以檢測(cè)到PTK7且有較高的陽性率，在少數(shù)瘤旁非腫瘤黏膜組織中也可檢測(cè)到。結(jié)合結(jié)腸腺瘤的病理特征，提示對(duì)于結(jié)腸腺瘤應(yīng)該積極早期干預(yù)切除，同時(shí)應(yīng)積極追蹤，特別是對(duì)于PTK7陽性的病例。而PTK7則可能作為早期發(fā)現(xiàn)指標(biāo)（分子標(biāo)志物），納入結(jié)腸腺瘤組織標(biāo)本的常規(guī)檢查中，用于腫瘤的早期診斷以及預(yù)后判斷，也可能成為潛在的結(jié)、直腸癌治療靶點(diǎn)[20-21]。endprint

筆者曾對(duì)一個(gè)家族性腺瘤性息肉病家系進(jìn)行了系統(tǒng)觀察，并對(duì)出現(xiàn)的息肉組織反復(fù)進(jìn)行內(nèi)鏡下切除治療。觀察期間發(fā)現(xiàn)，患者的息肉組織反復(fù)發(fā)生，此起彼伏，平均半年治療一次，每次治療需要處理的息肉達(dá)67枚。經(jīng)過反復(fù)治療后，結(jié)腸組織的息肉分布逐漸稀疏，但每次治療均可見到0.5 cm左右的息肉出現(xiàn)。結(jié)合本文研究結(jié)果，提示在家族性腺瘤性息肉病患者，理論上講所有的結(jié)腸黏膜均可能發(fā)生腺瘤，而家族性腺瘤性息肉病理論上講可能100%發(fā)生癌變[7-8]。結(jié)合本文研究結(jié)果，在患者瘤旁非腫瘤黏膜組織中也可檢測(cè)到PTK7，是否提示患者的結(jié)腸黏膜瘤旁非腫瘤黏膜組織中同時(shí)存在發(fā)生的可能，只是病程未達(dá)到而已，這可能是與黃群鋒等[16]食管鱗狀細(xì)胞癌的結(jié)果不同的原因。而家族性腺瘤性息肉病患者在結(jié)腸鏡下治療后結(jié)腸組織的息肉分布逐漸稀疏，可能是由于電灼的作用從而使該局部組織黏膜受到破壞而失去了腺瘤發(fā)生的基礎(chǔ)。如果不進(jìn)行結(jié)腸切除，腺瘤發(fā)生的可能性是始終存在的，這就是要求對(duì)家族性腺瘤性息肉病患者全結(jié)腸切除的原因[7-8]。

綜上所述，鑒于我國獨(dú)生子女現(xiàn)象的存在，目前發(fā)現(xiàn)家族性腺瘤性息肉病的幾率明顯下降，因此發(fā)掘新的結(jié)、直腸腫瘤標(biāo)志物，是一項(xiàng)有意義的工作，而PTK7有可能成為其中的選擇。

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（收稿日期：2017-04-11） （本文編輯：程旭然）endprint