廖汝丹 黃水心

摘要：目的?采用高效液相色譜法測定咳喘停袋泡顆粒中黃芩苷的含量。方法?用薄層色譜法對其君藥黃芩中的主要成分黃芩苷進行鑒別;以高效液相色譜法對黃芩苷進行定量分析，色譜柱為CAPCELL PAK-C18柱（4.6mmL×250mm，5μm），柱溫30℃，以甲醇-水-磷酸（47：53：0.2）為流動相，流速為1mL/min，檢測波長為276nm.結(jié)果?薄層色譜無干擾，專屬性強。 黃芩苷濃度在0.10048μg/mL～1.0048μg/mL范圍內(nèi)線性關系良好，得回歸方程y=3471.6X-1.8909（r2=1），平均加樣回收率為102.15%，RSD為0.129%（n=6）。 結(jié)論?所用方法簡便、準確、重現(xiàn)性好，可用于咳喘停袋泡顆粒中黃芩苷的含量測定。

關鍵詞：咳喘停袋泡顆粒;黃芩苷;高效液相色譜法;含量測定

中圖分類號：R927.2?文獻標志碼：A?文章編號：1007-2349（2019）03-0074-04

咳喘停袋泡顆粒為玉溪市中醫(yī)醫(yī)院院內(nèi)制劑，主要成分：金銀花、連翹、黃芩、葶藶子、陳皮、甘草等。功能主治：清熱化痰，肅肺止咳，用于痰熱型急慢性支氣管炎。據(jù)臨床研究表明[1-3]：咳喘停袋泡顆粒廣泛應用于臨床，治療慢性支氣管、肺心病急性發(fā)作期、熱哮型支氣管哮喘、特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化等。黃芩為本方的主藥之一，具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎等功效，黃芩苷是其主要有效成分。 為了保證服用咳喘停袋泡顆粒的安全性以及有效性，提高院內(nèi)制劑的臨床指導用藥，本文將黃芩苷作為測定指標，對其進行薄層色譜鑒別，并采用HPLC法對其質(zhì)量標準進行研究。

1?儀器與試藥

儀器：1260型高效液相色譜儀（四元泵帶真空脫氣機、自動進樣器、柱溫箱、紫外檢測器、儀器控制及數(shù)據(jù)處理）;BSA224S-CW電子天平、BP211D-OCE電子天平;cpx5800H-C超聲波清洗儀、PURELAB FLEX超純水儀。

試藥與試劑：黃芩苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110715-201720，含量為93.5%）;咳喘停袋泡顆粒（玉溪市中醫(yī)醫(yī)院制劑室）;硅膠GF254薄層板、聚酰胺薄膜（青島海洋化工廠）;甲醇為色譜純，磷酸為分析純，水為超純水。

2?方法選擇與結(jié)果

2.1?定性鑒別[ 10]?取本品粉末 3.5g，加乙酸乙酯-甲醇（3：1）的混合溶液30 mL，加熱回流30 min，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇5 mL使溶解，取上清液作為供試品溶液 。另取黃芩苷對照品加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗，吸取上述供試品溶液、對照品溶液各2 μL，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，置日光燈下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

2.2?色譜條件?色譜柱：CAPCELL PAK-C18（4.6×250 mm，5 μm）;流動相：甲醇-水-磷酸（47：53：0.2）;檢測波長：276 nm;理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計算不低于5000[8-9]。

2.3?測定波長確定?取對照品溶液，以70%乙醇溶液為空白對照，在紫外光200 nm～400 nm波長范圍內(nèi)進行掃描，黃芩苷對照品溶液在276 nm波長處有最大吸收，且無干擾。故選擇276 nm為檢測波長。

3?溶液的制備 [10]

3.1?對照品溶液的制備?（1）取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成0.1 μg/mL的對照品溶液。（2）取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成50 μg/mL的對照品溶液。

3.2?供試品的制備?取本品3.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理10 min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1 mL，置10 mL量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

3.3?陰性對照溶液的制備?取缺黃芩的其他組分，按處方工藝制成陰性制劑，按“3.2”項下方法制成陰性對照溶液。

4?方法學考察

4.1?專屬性試驗?分別精密吸取3.1.1項下的對照品溶液、3.2項下的供試品溶液、3.3項下的陰性對照溶液各10μL進樣，分別注入液相色譜儀，在2.2色譜條件下，樣品中黃芩苷色譜峰與對照品黃芩苷色譜峰保留時間相近，陰性對照溶液在黃芩苷色譜峰相應位置上無色譜峰出現(xiàn)，證明無干擾。

4.2?線性范圍考察 精密吸取3.1.2項下制備的黃芩苷對照品溶液，進樣量分別為2、4、6、8、10、15、20 μL，注入色譜儀，以待測組分的質(zhì)量為橫坐標，峰面積A為縱坐標進行線性回歸考察。得回歸方程y=3471.6X-1.8909（r=1），結(jié)果表明黃芩苷在0.10048 μg/mL～1.0048 μg/mL范圍內(nèi)線性關系良好。

4.3?精密度試驗?精密取3.1.1項下制備的同一對照品溶液10μL，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積。結(jié)果樣品溶液中黃芩苷峰面積的RSD為0.365%，說明精密度良好（n=6）。見表1。

4.4?穩(wěn)定性試驗?精密吸取同一份供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10、12、24 h分別進樣，依照樣品含量測定項下方法測定峰面積。結(jié)果24 h內(nèi)RSD為 0.06%，說明咳喘停袋泡顆粒樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。見表2。

4.5?重復性試驗?取同一批號的咳喘停袋泡顆粒樣品，精密稱取3.5 g，平行制備6份供試品溶液，每份進樣3次，測定峰面積，RSD值為0.320%，表明重現(xiàn)性良好。見表3。

4.6?加樣回收試驗?精密稱取樣品0.3 g，共6份，按3.2項下的方法制備供試品溶液，分別精密加入3.1.2項下制備的濃度相同的黃芩苷對照品溶液3.27 mL，進樣量10 μL，測得平均回收率為102.15%，RSD為0.129%。見表4。

5?樣品含量測定

取3批咳喘停袋泡顆粒，按3.2項下方法制備供試品溶液，每份進樣3次，每次取10 μL注入液相色譜儀進行測定，結(jié)果得咳喘停袋泡顆粒中黃芩苷的平均含量為5.45 mg/g。見表5。

6?實驗結(jié)果

HPLC法測定咳喘停袋泡顆粒中黃芩苷含量的方法學考察結(jié)果表明，在276 nm檢測波長下，以甲醇-水-磷酸（47：53：0.2）為流動相，C18為固定相，該方法在線性范圍內(nèi)線性關系良好，重復性和穩(wěn)定性良好。該方法簡便、準確、重復性好，空白無干擾，可作為咳喘停袋泡顆粒中黃芩苷含量測定的定量方法，為醫(yī)院制劑提供快速準確的測定方法。

7?討論

7.1?供試品提取方法的考察?分別采用以70%甲醇為溶劑進行超聲、以及用乙酸乙酯萃取和用甲醇加熱回流對供試品進行提取，結(jié)果用70%甲醇做溶劑峰形良好，分離度好，有效成分含量相對較高，操作方便。

7.2?定性鑒別?采用不同的展開系統(tǒng)以及不同的薄層板對供試品中的黃芩苷進行鑒別，結(jié)果在以聚酰胺薄膜為薄層板，醋酸為展開劑，1%三氯化鐵乙醇溶液為顯色劑條件下，斑點顯色清晰，效果相對較好，其Rf值為0.67。

7.3?測定波長的選擇?采用紫外分光光度計對黃芩苷對照品進行掃描（400.0 nm-200.0 nm），在276nm處有最大吸收，故采用該波長作為檢測波長。

7.4?色譜柱的選擇?取同一供試品溶液，采用長度不同的色譜柱進行測定：150 mm和250 mm，結(jié)果采用長柱250 mm分離效果較好，峰面積穩(wěn)定，保留時間相近。

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