謝嘉馳 楊 寧 羅純清 羅黎霞

（湘潭市中醫(yī)醫(yī)院藥學部，湖南 湘潭 411100）

痤瘡，中醫(yī)稱之為“粉刺”“酒刺”，臨床多見為粉刺、丘疹和膿皰，嚴重時可伴有結(jié)節(jié)、囊腫等皮損，是一種常見的慢性炎癥皮膚病，多好發(fā)于青春期男女顏面部，嚴重影響了患者身心健康和生活質(zhì)量[1-3]。花黃合劑為湘潭市中醫(yī)院臨床經(jīng)驗方，由山銀花、連翹、黃芩、黃連等8 味藥組成，具有涼血解毒、散結(jié)消腫功效，用于痤瘡具有很好的療效。原方湯劑內(nèi)服臨床療效較好，但有服用量大、攜帶不便、不宜大量生產(chǎn)，且湯劑味苦等缺點。另丸劑、片劑、膠囊劑等固體制劑溶散、釋放藥物緩慢，與用藥目的不相符合，故將本方劑制成合劑，具有療效快、劑量較小、口感好、便于服用、制備方法簡單等優(yōu)點，同時還保持了原有湯劑原療效[4，5]。

本課題以浸膏得率為主要考察指標，采用單因素方法優(yōu)選提取工藝；以輔料的選擇、抑菌劑、滅菌工藝進行成型工藝考察[6-11]。為有效控制花黃合劑的質(zhì)量，根據(jù)藥品質(zhì)量標準的要求，參照相關(guān)文獻[12-14]摸索方法。建立可行的鑒別方法，為中藥制劑質(zhì)量控制提供可靠的參考依據(jù)，對下一步臨床前實驗研究奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

儀器：DZF-6090AB型電熱真空干燥箱（天津工興實驗室儀器有限公司）；STX1202ZH 電子天平[奧豪斯儀器（常州）有限公司]；Good see-Ⅱ型暗箱式薄層色譜攝影儀（上?？普苌萍加邢薰荆籆X23 OLYMPUS顯微鏡[奧林巴斯（廣州）工業(yè)有限公司]。

試劑：正丁醇、甲醇、98%甲酸、乙酸乙酯、乙酸、無水乙醇、95%乙醇均由國藥集團化學試劑有限公司購買；硫酸、三氯甲烷均由湖南匯虹試劑有限公司購買；鹽酸由株洲市星空化玻有限責任公司購買；試劑均為分析純。

試藥：連翹對照藥材（批號：120908-201817）、黃芩對照藥材（批號：120955-201810）、黃連對照藥材（批號：120913-201611）均由中國食品藥品檢定研究院提供。連翹、黃芩、黃連等8 種中藥均由岳陽天香中藥飲片有限公司購買，經(jīng)湘潭市中醫(yī)醫(yī)院藥學部鐘喜光副教授鑒定，均符合2015 版《中華人民共和國藥典》（簡稱《中國藥典》）規(guī)定。

2 方法與結(jié)果

2.1 水提取工藝研究

2.1.1 單因素考察 將浸膏得率作為考察指標，采用單因素法考察煎煮次數(shù)、加水量、煎煮時間對浸膏提取的影響。

2.1.1.1 煎煮次數(shù)考查 按處方配比稱取牡丹皮、赤芍、知母、連翹等8 味（共70 g）中藥飲片，加水煎煮3 次，第1 次加10 倍量水、煎煮2 h，第2 次加8 倍量水、煎煮2 h，第3 次加6 倍量水、煎煮2 h。將每次提取液濾過，分別減壓濃縮至相對密度1.10（60 ℃），測定3 次煎煮的浸膏重量。浸膏得率=（W/W1）× 100%。其中，W指浸膏重量（g），W1 指飲片總量（g）。結(jié)果表明，以浸膏得率為考查指標，第3 次煎煮浸膏得率占總浸膏得率的比例為7.26%，說明煎煮2次已基本提取完全，故采用煎煮2 次的工藝。見表1。

表1 花黃合劑煎煮次數(shù)的考查 (%)

2.1.1.2 加水量考查 按照處方配比法稱取牡丹皮、赤芍、知母、連翹等8 味（共70 g）的飲片，各3 份，分別加水煎煮2 次，第1 次加水煎煮2 h，第2 次加水煎煮2 h。煎煮液濾過，濾液減壓后經(jīng)過濃縮后達到相對密度1.10（60 ℃），測不同加水量實驗的浸膏得率。結(jié)果表明，以浸膏得率為考查指標，加水量為10、8倍的浸膏得率與加水量為8、6 倍的浸膏得率相差不大，從省時節(jié)能考慮選擇加水煎煮2 次，第1 次加8倍量水，第2 次加6 倍量水。見表2。

表2 花黃合劑加水量的考查

2.1.1.3 煎煮時間考查 按處方配比稱取牡丹皮、赤芍、知母、連翹等8 味（共70 g）中藥飲片，各3 份，加水煎煮2 次，第1 次加8 倍量水，第2 次加6 倍量水，提取液濾過，減壓濃縮，至相對密度1.10（60 ℃），測不同煎煮時間的浸膏得率。結(jié)果表明，以浸膏得率為考查指標，煎煮時間為2.5 h、1.5 h 的浸膏得率與煎煮時間為2 h、1 h 的浸膏得率的相差較大，為了節(jié)約成本，故本品加水煎煮時間確定為加水煎煮2 次，第1 次加8 倍量水，煎煮2 h；第2 次加6倍量水，煎煮1 h。見表3。

表3 花黃合劑煎煮時間的考查

2.2 成型工藝

2.2.1 輔料的選擇 該制劑為合劑，水煎煮提取濃縮至相對密度為1.10（60 ℃）的清膏。由于處方中含有大黃、黃連、黃芩等幾味藥，藥液味苦，故選擇《中國藥典》規(guī)定輔料蔗糖、甜菊糖苷作為矯味劑改善口感，增加患者口服適應(yīng)性?，F(xiàn)取一定的清膏和矯味劑設(shè)計了3 個不同的清膏和矯味劑配方，將清膏和矯味劑混勻，以口感為考查指標，結(jié)果表明，配方2 口感最佳，故選配方2 作為本品成型工藝的輔料配方。見表4。

表4 花黃合劑輔料用量的選擇

2.2.2 抑菌劑選擇 按照《中國藥典》2020 版四部制劑通則0181 合劑中的有關(guān)規(guī)定，合劑可選擇添加抑菌劑，一般使用苯甲酸或山梨酸的用量比例應(yīng)當不得超過0.3%（其鉀鹽、鈉鹽的用量分別按酸計），其中山梨酸抑菌效果強于苯甲酸，故本制劑選擇山梨酸鉀作為抑菌劑，加入量為0.2%。

2.2.3 滅菌工藝 為保證符合衛(wèi)生標準，故選擇藥液用煮沸滅菌方法進行滅菌。本品擬定滅菌方法為配料混合后煮沸滅菌（100 ℃，30 min）。經(jīng)考察，樣品采用煮沸滅菌后的衛(wèi)生學檢查，均符合規(guī)定。

2.3 質(zhì)量控制

2.3.1 顯微鑒別 取藥液適量，放于載玻片上，滴加1～2 滴水合氯醛試液，攪拌均勻，加熱透化后，蓋上蓋玻片，除去溢出的液體，放于顯微鏡載物臺上在10倍鏡和40 倍鏡下觀察。黃連可見鮮黃色的石細胞單個散在，呈長方形，木栓細胞中有成群草酸鈣方晶；大黃草酸鈣簇晶直徑130 μ m，網(wǎng)紋導(dǎo)管非木化；山銀花的腺毛較少，頭部大多呈圓盤形，直徑188 μ m，非腺毛單細胞，長210 μ m，花粉粒，直徑82 μ m；知母的草酸鈣針晶成束或散在，長26～110 μ m，偏光下針晶呈亮黃間青色[15-19]。

2.3.2 薄層鑒別

2.3.2.1 連翹薄層鑒別 取50 mL內(nèi)容物，用20 mL正丁醇振搖萃取3 次，合并正丁醇液，再用20 mL 氨試液洗滌2 次，除去氨試液，蒸干正丁醇液，加1 mL甲醇使殘渣溶解，作為供試品溶液。另取連翹對照藥材1 g，加水40 mL，置水浴中加熱1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加20 mL 乙醇，加熱回流30 min，濾過，濾液蒸干，加1 mL乙醇使殘渣溶解，作為對照藥材溶液。同供試品溶液制備方法制備缺連翹的陰性樣品溶液。參照2015 版《中國藥典》[20]，分別吸取上述3 種溶液各10 μ L，點于同一硅膠板上，以三氯甲烷-甲醇（8∶1）展開，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃下加熱至斑點顯色清晰，在日光下檢視[21]。見圖1。

圖1 連翹TLC

2.3.2.2 黃芩薄層鑒別 取10 mL 內(nèi)容物，蒸干，加40 mL甲醇，加熱回流30 min，過濾，蒸干，加水15 mL將殘渣溶解，濾過，濾液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至3.0～3.5，每次20 mL，用乙酸乙酯振搖萃取2 次，將萃取液合并蒸干，加1 mL無水乙醇使殘渣溶解，作為供試品溶液。另取黃芩對照藥材0.5 g 加水50 mL，煎煮，濾過，濾液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3.0～3.5，同法制成對照藥材溶液。同供試品溶液制備方法制備缺黃芩的陰性樣品溶液。參照2015 版《中國藥典》[20]，分別吸取上述3 種溶液各10 μ L，點于同一硅膠板上，以乙酸乙酯-丁酮-冰醋酸-水（5∶2∶1∶1）展開，晾干，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液在日光下檢視[22]。見圖2。

圖2 黃芩TLC

2.3.2.3 黃連薄層鑒別 取12 mL 內(nèi)容物，蒸干，加60 mL甲醇，超聲20 min，過濾，蒸干，加1 mL甲醇將殘渣溶解，作為供試品溶液。另取黃連對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液。同供試品溶液制備方法制備缺黃連的陰性樣品溶液。參照2015 版《中國藥典》[20]，分別吸取上述3 種溶液各3 μ L，點于同一硅膠板上，以正丁醇-冰乙酸-水（7∶1∶2）展開，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視[23]。見圖3。

圖3 黃連TLC

3 討論

花黃合劑方系湘潭市中醫(yī)院內(nèi)科醫(yī)師李琳教授10多年的臨床經(jīng)驗總結(jié)，治療效果明顯，未見不良反應(yīng)。但是由于湯劑存在攜帶、貯存不便，服用劑量無法準確掌握等問題。因此，需改變服用劑型[24]。而合劑正好具有攜帶、貯存方便、服用量準確等優(yōu)勢，最后選擇合劑進行研究。

本實驗選擇提取浸膏所得率作為評價指標，通過單因素方法考查提取浸膏的煎煮次數(shù)、加水量、煎煮時間，選擇最優(yōu)提取工藝。最后確定煎煮2 次，第1次添加8 倍量水，煎煮2 h；第2 次添加6 倍量水，煎煮1 h。合并2 次濾液，濃縮至清膏?？紤]藥液味苦，故選擇蔗糖、甜菊糖苷作為矯味劑改善口感，增加患者口服適應(yīng)性。以口感為考查指標，選擇合適的矯味劑，確定最佳口感。

本實驗建立的顯微鑒別方法顯微特征明顯，可控性強。進行顯微評價時，必須注意制作細節(jié)，否則很容易影響到顯微觀察。建立了花黃合劑中連翹、黃連、黃芩的薄層色譜鑒別方法，該方法簡單、準確度高、斑點明顯、再現(xiàn)性好、陰性對照無干擾，所以此方法可以作為該制劑的質(zhì)量管控標準。通過實驗，更好地控制其產(chǎn)品質(zhì)量，促進醫(yī)院制劑質(zhì)量標準的提高。

本實驗針對花黃合劑的制備工藝和質(zhì)量控制進行了系統(tǒng)性的研究，為醫(yī)院制劑開發(fā)工作提供了基礎(chǔ)性的實驗證明依據(jù)，對于拓展我國中藥方劑在醫(yī)學領(lǐng)域的臨床運用范圍有著重要的指導(dǎo)意義。