摘 要：目的 探討血清circTTC3水平表達(dá)與急性缺血性腦卒中患者病情嚴(yán)重程度及預(yù)后的關(guān)系。方法 回顧性選取2019年3月至2022年3月在邵陽學(xué)院附屬第二醫(yī)院收治的急性缺血性腦卒中患者110例作為研究組，選取同期健康體檢者110例作為對照組。實(shí)時熒光定量PCR法檢測circTTC3表達(dá)水平。根據(jù)美國國立衛(wèi)生研究院卒中量表（National Institute of Health Stroke Scale，NIHSS）評分將參與者分為輕度、中度和重度組。采用改良Rsnkin量表（Modified Rankin Scale，MRS）將參與者分為預(yù)后不良組和預(yù)后良好組。采用Spearman法分析血清circTTC3與NIHSS、MRS評分的相關(guān)性。采用Logistic回歸分析急性缺血性腦卒中不良預(yù)后發(fā)生的影響因素。受試者操作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線分析circTTC3對急性缺血性腦卒中患者預(yù)后的預(yù)測價值。結(jié)果 研究組circTTC3表達(dá)水平和NIHSS評分顯著高于對照組（Plt;0.05）。輕度、中度和重度組血清circTTC3水平依次升高（Plt;0.05）。預(yù)后不良組血清circTTC3水平和MRS評分顯著高于預(yù)后良好組（Plt;0.05）。Spearman相關(guān)性分析，血清circTTC3水平與NIHSS、MRS評分差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Plt;0.05）。Logistic回歸分析顯示，circTTC3是影響急性缺血性腦卒中不良預(yù)后的危險因素（P＜0.05）。由ROC曲線得知，circTTC3預(yù)測急性缺血性腦卒中患者預(yù)后的曲線下面積（area under the curve，AUC）為0.861。結(jié)論 急性缺血性腦卒中患者血清circTTC3水平顯著升高，與患者病情及預(yù)后密切相關(guān)，還對急性缺血性腦卒中患者預(yù)后具有良好的預(yù)測價值。

關(guān)鍵詞：急性缺血性腦卒中；circTTC3；病情程度；預(yù)后；相關(guān)性

中圖分類號：R743

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

收稿日期：2023-05-16

基金項(xiàng)目：

作者簡介：梁修梓，女，主治醫(yī)師，碩士，從事老年醫(yī)學(xué)專業(yè)臨床及教學(xué)研究；E-mail：418127203@qq.com

通信作者：鄧宇，男，主任醫(yī)師，從事老年醫(yī)學(xué)專業(yè)臨床及教學(xué)研究；E-mail：syyzdengyu@163.com

Expression of serum circTTC3 level with disease severity and prognosis of patients with acute ischemic stroke

LIANG Xiuzi， HE Yanyan， DENG Yu

（Department of Geriatrics， The Second Affiliated Hospital of Shaoyang University， Shaoyang 422000， China）

Abstract： Objective To explore the relationship between serum circTTC3 expression and the severity and prognosis of acute ischemic stroke patients. Methods Retrospectively， 110 patients with acute ischemic stroke admitted to the Second Affiliated Hospital of Shaoyang University from March 2019 to March 2022 were selected as an experimental group， and 110 healthy persons during the same period were selected as a control group. The expression level of circTTC3 was detected by real-time fluorescence quantitative PCR. Participants were divided into mild， moderate， and severe groups based on the National Institutes of Health Stroke Scale （NIHSS） scores. The modified Rankin scale （MRS） was used to divide participants into a poor prognosis group and a good prognosis group. Spearman method was applied to analyze the correlation between serum circTTC3 and NIHSS and MRS scores. Logistic regression was employed to explore the factors influencing the occurrence of adverse prognosis of acute ischemic stroke. The predictive value of circTTC3 on the prognosis of patients with acute ischemic stroke was analyzed by receiver operating characteristic （ROC） curve. Results The expression levels of circTTC3 and NIHSS scores in the experimental group were obviously higher than those in the control group （Plt;0.05）. Serum circTTC3 levels were sequentially elevated in the mild， moderate， and severe groups （Plt;0.05）. The serum circTTC3 levels and MRS scores in the poor prognosis group were obviously higher than those in the good prognosis group （Plt;0.05）. Spearman correlation analysis showed， the serum circTTC3 level was positively correlated with NIHSS and MRS scores （Plt;0.05）. Based on the Logistic regression analysis， circTTC3 was a risk factor affecting the poor prognosis of acute ischemic stroke （Plt;0.05）. The ROC curve showed that the AUC of circTTC3 in predicting the prognosis of patients with acute ischemic stroke was 0.861. Conclusion The notable increase of serum circTTC3 in patients with acute ischemic stroke is closely related to the condition and prognosis of patients， having good predictive value for the prognosis of patients with acute ischemic stroke.

Key words： acute ischemic stroke; circTTC3; degree of illness; prognosis;correlation

梁修梓，何妍妍，鄧宇：血清circTTC3水平表達(dá)與急性缺血性腦卒中患者病情嚴(yán)重程度及預(yù)后的關(guān)系

急性缺血性腦卒中屬于腦血管疾病，主要是由腦供血動脈狹窄或閉塞引起的局灶性腦缺血，供血不足引起腦組織壞死，在臨床上屬于常見的腦卒中疾病，大多數(shù)發(fā)病者為中老年群體［1-2］?；颊吲R床表現(xiàn)為吐詞不清晰、一側(cè)面部麻木僵硬、一側(cè)肢體麻木無力等，該病致死率且致殘率高、預(yù)后差，已成為我國第二大死亡的主要原因，嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)量和身心健康［3］。盡早確診和治療可以改善急性缺血性腦卒中患者預(yù)后，而在臨床診斷中只依靠臨床癥狀判斷患者病情嚴(yán)重程度有一定的難度，因此，尋找靈敏度高的標(biāo)志物對于評估患者的病情和預(yù)后十分重要［4］。CircRNA是一類非編碼RNA，具有高度穩(wěn)定和保守的閉環(huán)結(jié)構(gòu)，其共價閉環(huán)結(jié)構(gòu)也稱為反向剪接，由mRNA的3 剪接位點(diǎn)與5’剪接位點(diǎn)的連接形成［5］。CircTTC3的表達(dá)與許多病理和生理過程有關(guān)，還在神經(jīng)系統(tǒng)疾病的進(jìn)展中起著重要作用［6］。CircTTC3參與急性缺血性腦卒中的發(fā)生、發(fā)展，可作為急性缺血性腦卒中治療和預(yù)后的標(biāo)志物［7］。基于此，本研究主要探討血清circTTC3水平表達(dá)與急性缺血性腦卒中患者病情嚴(yán)重程度及預(yù)后的關(guān)系，為臨床治療急性缺血性腦卒中提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性選取2019年3月至2022年3月在邵陽學(xué)院附屬第二醫(yī)院收治的急性缺血性腦卒中患者110例作為研究組，年齡50～76歲，男62例，女48例。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）所有患者符合《中國急性缺血性腦卒中診治指南2014》中診斷標(biāo)準(zhǔn)［8］，經(jīng)過CT和MRI等確診為急性缺血性腦卒中；（2）初次確診；（3）發(fā)病到入院時間不超過24 h；（4）患者臨床資料完整；（5）患者及家屬同意并簽署承諾書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并心、肺等重要器官功能不全者；（2）有急性缺血性腦卒中等病史者；（3）合并精神疾病者；（4）合并其他惡性腫瘤。另選取同期健康體檢者110例作為對照組，年齡51～75歲，男60例，女50例。病例搜集及分組流程圖見圖1。本研究經(jīng)邵陽學(xué)院附屬第二醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)時熒光定量PCR法檢測circTTC3表達(dá)水平

采集入院患者靜脈血3 mL，對照組在體檢時采集靜脈血3 mL，以3 000 r/min離心10 min，抽取上清液之后轉(zhuǎn)移至-80 ℃冰箱保存待測。按照Trizol試劑（購自北京凱詩源生物科技有限公司，SH-2366）提取血清中總RNA，使用NanoDrop ND-12000分光光度計評估總RNA濃度和純度，使用M-MLV反轉(zhuǎn)錄試劑盒（購自北京凱詩源生物科技有限公司，SOS-1046）反轉(zhuǎn)錄成cDNA，以cDNA為模板，采用qRT-PCR儀（購自美國Bio-rad公司，CFX384）檢測樣本中circTTC3的表達(dá)水平，內(nèi)參為GADPH，引物序列見表1。qRT-PCR反應(yīng)體系共20 μL：cDNA（50 ng/μL）2 μL，SYBR Green Master Mix（2×）10 μL，PCR上下游引物（10 μmol/L）各0.5 μL，加ddH2O至20 μL。條件為95 ℃預(yù)變性15 min，1個循環(huán)，然后在95 ℃變性15 s，65 ℃退火延伸45 s，共40個循環(huán)。為減小實(shí)驗(yàn)誤差，各樣品重復(fù)3次，使用2-ΔΔCt方法計算circTTC3的相對表達(dá)量。

1.2.2 患者病情評估

患者病情由邵陽學(xué)院附屬第二醫(yī)院2名神經(jīng)內(nèi)科的高資質(zhì)醫(yī)師進(jìn)行評估，主要根據(jù)美國國立衛(wèi)生研究院卒中量表（national institute of health stroke scale，NIHSS）評分［9］。NIHSS總分為42分，得分越高則病情越嚴(yán)重，0～4分為輕度損傷，5～20分為中度損傷，21～42分為重度損傷。將入選的患者根據(jù)病情嚴(yán)重程度分為輕度組48例，中度組32例，重度組30例。

1.2.3 患者預(yù)后評估

患者出院后定期進(jìn)行隨訪，詢問患者的情況，90 d后采用改良Rsnkin量表（modified rankin scale，MRS）來評估患者的預(yù)后情況［10］，其得分越高說明患者的預(yù)后越差，評分＞2為預(yù)后不良，評分≤2為預(yù)后良好，根據(jù)預(yù)后情況將所選的患者分為預(yù)后不良組43例，預(yù)后良好組57例。

1.2.4 臨床資料的收集

入院時收集所有入選患者吸煙史、飲酒史、高血壓、糖尿病、高脂血癥、總膽固醇、甘油三酯等一般資料。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 25.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)。所有連續(xù)變量均符合正態(tài)分布，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x-±s）表示，行t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，計數(shù)資料采用頻數(shù)（率）［例（%）］表示，行χ2檢驗(yàn)。采用Spearman法分析血清circTTC3與NIHSS、MRS評分的相關(guān)性。采用Logistic回歸分析急性缺血性腦卒中不良預(yù)后發(fā)生的影響因素。采用受試者操作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線分析circTTC3對急性缺血性腦卒中患者預(yù)后的預(yù)測價值。P＜0.05代表差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料的比較

由表2可知，研究組和對照組一般資料比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。

2.2 血清circTTC3水平的比較

由表3可知，研究組血清circTTC3表達(dá)水平顯著高于對照組（Plt;0.05）。

2.3 不同病情嚴(yán)重程度急性缺血性腦卒中患者血清circTTC3水平和NIHSS評分的比較

由表4可知，輕度、中度和重度組血清circTTC3水平和NIHSS評分依次升高（Plt;0.05）。

2.4 不同預(yù)后急性缺血性腦卒中患者血清circTTC3水平和MRS評分的比較

由表5可知，預(yù)后不良組血清circTTC3水平和MRS評分顯著高于預(yù)后良好組（Plt;0.05）。

2.5 血清circTTC3水平與NIHSS、MRS評分的相關(guān)性分析

由表6可知，根據(jù)Spearman相關(guān)性分析得知，血清circTTC3水平與NIHSS、MRS評分均為正相關(guān)（Plt;0.05）。

2.6 Logistic回歸分析影響急性缺血性腦卒中不良預(yù)后的影響因素

由表7可知，以是否發(fā)生急性缺血性腦卒中不良預(yù)后作為因變量，以circTTC3為自變量進(jìn)行Logistic回歸分析，分析得知circTTC3是影響急性缺血性腦卒中不良預(yù)后的危險因素（P＜0.05）。

2.7 血清circTTC3對急性缺血性腦卒中患者預(yù)后的預(yù)測價值分析

根據(jù)ROC曲線得知，circTTC3預(yù)測急性缺血性腦卒中患者預(yù)后的曲線下面積（area under the curve，AUC）為0.861（95%CI：0.785～0.938），截斷值為4.132，靈敏度為72.1%，特異度為92.1%。見圖2。

3 討論

急性缺血性腦卒中主要是由頸動脈狹窄造成的腦供血不足、腦組織損傷、管腔狹窄部位硬化斑塊破碎、血栓脫落引起的，特點(diǎn)是發(fā)病迅速、并發(fā)癥多、預(yù)后差、易復(fù)發(fā)［11］。急性缺血性腦卒中的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，主要涉及動脈粥樣硬化、炎癥反應(yīng)以及神經(jīng)細(xì)胞損傷失活，發(fā)病后多數(shù)患者生活不能自理，嚴(yán)重影響患者和家屬的生活質(zhì)量［12］。目前在臨床對急性缺血性腦卒中患者的診斷主要依靠臨床癥狀、頭顱CT等影像學(xué)，然而大部分患者的癥狀不明顯，尤其輕度癥狀的檢出率較低，導(dǎo)致延誤最佳治療時間，最后發(fā)展為重癥，容易使患者昏迷、偏癱甚至死亡，即使治療后延續(xù)生命，機(jī)體中的神經(jīng)功能受損，也會給患者帶來嚴(yán)重的影響［13-14］。因此，尋找與急性缺血性腦卒中患者病情及預(yù)后相關(guān)的指標(biāo)尤為關(guān)鍵。

CircRNA作為一類特殊的內(nèi)源性非編碼RNA，具有高組織特異性表達(dá)和穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)，富集在神經(jīng)系統(tǒng)中，還在多種生物進(jìn)展包括轉(zhuǎn)移、遷移、侵襲和增殖中起至關(guān)重要的作用［15-16］。CircRNA通過調(diào)節(jié)細(xì)胞存活、炎癥、血管生成、氧化應(yīng)激、神經(jīng)元凋亡和血腦屏障的通透性，在腦缺血中起重要作用［6］。有研究發(fā)現(xiàn)circRNA在調(diào)節(jié)腦缺血損傷和神經(jīng)干細(xì)胞方面具有關(guān)鍵功能［7］，還與腦卒中嚴(yán)重程度和炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，在腦卒中診斷、預(yù)后和治療中起關(guān)鍵作用［15， 17］。Circcamk4有助于腦缺血誘導(dǎo)的神經(jīng)元損傷［18］。Circ HIPK2的抑制可調(diào)節(jié)神經(jīng)干細(xì)胞缺血性腦卒中后的功能恢復(fù)［19］。CircTTC3可以靶向心肌梗死中的miR-15b調(diào)節(jié)機(jī)體心臟功能，參與調(diào)節(jié)缺氧損傷，在機(jī)體缺氧后其表達(dá)水平異常升高［20-21］。CircTTC3還參與調(diào)節(jié)腦梗死中的腦缺血損傷和神經(jīng)干細(xì)胞凋亡，為circTTC3治療腦缺血損傷提供了新的見解［7］。在本研究中，研究組circTTC3表達(dá)水平顯著升高，與上述研究相似，說明circTTC3參與急性缺血性腦卒中的發(fā)生、發(fā)展。

NIHSS評分作為在臨床上評估患者神經(jīng)功能受損程度的量表，評分越高說明患者的神經(jīng)功能受損越嚴(yán)重［22］。本研究發(fā)現(xiàn)，輕度、中度和重度組血清circTTC3水平依次升高，說明circTTC3水平可以反映患者病情的嚴(yán)重程度，其升高會促進(jìn)機(jī)體發(fā)生炎癥反應(yīng)，使得血管收縮，從而加重病情。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，預(yù)后不良組血清circTTC3水平顯著高于預(yù)后良好組，說明circTTC3與患者的預(yù)后密切相關(guān)。Spearman相關(guān)性分析顯示血清circTTC3水平與NIHSS、MRS評分均為正相關(guān)，說明circTTC3參與急性缺血性腦卒中的生物學(xué)發(fā)展，還與患者的病情嚴(yán)重程度和預(yù)后有關(guān)系。根據(jù)Logistic回歸分析得知circTTC3是影響急性缺血性腦卒中不良預(yù)后的危險因素，再根據(jù)ROC曲線得知，circTTC3預(yù)測急性缺血性腦卒中患者預(yù)后的靈敏度為72.1%，特異度為92.1%。提示circTTC3可以預(yù)測患者的預(yù)后，當(dāng)其水平升高時可能預(yù)示不良結(jié)局，臨床治療中應(yīng)高度警惕，盡早進(jìn)行干預(yù)，從而降低患者的病死率和致殘率，改善患者的預(yù)后。

綜上所述，急性缺血性腦卒中患者血清circTTC3水平顯著升高，其水平與患者病情程度及預(yù)后密切相關(guān)，還對急性缺血性腦卒中患者預(yù)后具有良好的預(yù)測價值。本研究尚存在一些局限性，如選取的樣本量較少，可能導(dǎo)致研究結(jié)果出現(xiàn)一定偏倚，后續(xù)會擴(kuò)大樣本量，對其進(jìn)一步驗(yàn)證。

參考文獻(xiàn)：

［1］OSPEL J M， HOLODINSKY J K， GOYAL M. Management of acute ischemic stroke due to large-vessel occlusion： JACC focus seminar［J］." Journal of the American College of Cardiology， 2020， 75（15）： 1832-1843.

［2］NOOR A， BENNETT G， ARNDT S， et al. Comorbidities related to clinical outcomes in patients with acute ischemic stroke undergoing mechanical thrombectomy： review of literature and experience at a single comprehensive stroke center［J］. The Ochsner Journal， 2019， 19（1）： 13-16.

［3］KAMEDA-SMITH M M， PAI A M， JUNG Y， et al. Advances in mechanical thrombectomy for acute ischemic stroke due to large vessel occlusion［J］. Critical Reviews in Biomedical Engineering， 2021， 49（5）： 13-70.

［4］ZHOU J， MA M M， FANG J H， et al. Differences in brain-derived neurotrophic factor gene polymorphisms between acute ischemic stroke patients and healthy controls in the Han population of southwest China［J］. Neural Regeneration Research，" 2019， 14（8）： 1404-1411.

［5］TIAN M H， CAO Z P， PANG H. Circular RNAs in sudden cardiac death related diseases： novel biomarker for clinical and forensic diagnosis［J］. Molecules， 2021， 26（4）： 1155.

［6］SIRACUSA C， SABATINO J， LEO I， et al. Circular RNAs in ischemic stroke： biological role and experimental models［J］. Biomolecules， 2023， 13（2）： 214.

［7］YANG B， ZANG L E， CUI J W， et al. Circular RNA TTC3 regulates cerebral ischemia-reperfusion injury and neural stem cells by miR-372-3p/TLR4 axis in cerebral infarction［J］. Stem Cell Research amp; Therapy， 2021， 12（1）： 125.

［8］中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)病學(xué)分會腦血管病學(xué)組， 劉鳴， 蒲傳強(qiáng). 中國急性缺血性腦卒中診治指南2014［J］. 中華神經(jīng)科雜志， 2015， 48（4）： 246-257.

［9］KWAH L K， DIONG J. National institutes of health stroke scale （NIHSS）［J］. Journal of Physiotherapy， 2014， 60（1）： 61.

［10］范玉華， 姬曉曇， 藍(lán)琳芳. 國內(nèi)腦卒中臨床試驗(yàn)療效判斷方法中改良Rankin評分的應(yīng)用現(xiàn)狀［J］. 中國神經(jīng)精神疾病雜志， 2015， 41（7）：412-415.

［11］CSECSEI P， VRNAI R， NAGY L， et al. L-arginine pathway metabolites can discriminate paroxysmal from permanent atrial fibrillation in acute ischemic stroke［J］. Ideggyogyaszati Szemle， 2019， 72（3/4）： 79-88.

［12］MENDELSON S J， PRABHAKARAN S. Diagnosis and management of transient ischemic attack and acute ischemic stroke： a review［J］. Journal of the American Medical Association， 2021， 325（11）： 1088-1098.

［13］TAGUCHI K， ITOH T， FULD M K， et al. “X-map 2.0” for edema signal enhancement for acute ischemic stroke using non-contrast-enhanced dual-energy computed tomography［J］. Investigative Radiology， 2018， 53（7）： 432-439.

［14］KAESMACHER J， CHALOULOS-IAKOVIDIS P， PANOS L， et al. Mechanical thrombectomy in ischemic stroke patients with Alberta stroke program early computed tomography score 0-5［J］. Stroke， 2019， 50（4）： 880-888.

［15］LIU M M， LIU X L， ZHOU M R， et al. Impact of CircRNAs on ischemic stroke［J］. Aging and Disease， 2022， 13（2）： 329.

［16］OSTOLAZA A， BLANCO-LUQUIN I， URDNOZ-CASADO A， et al. Circular RNA expression profile in blood according to ischemic stroke etiology［J］. Cell amp; Bioscience， 2020， 10： 34.

［17］OLSCHEWSKI D N， RUEGER M A. The silencing of circular RNA in neural stem cells—a gateway to new therapeutic strategies in cerebral ischemia？［J］. EBioMedicine， 2020， 53： 102705.

［18］ZHANG Z H， WANG Y R， LI F， et al. Circ-camk4 involved in cerebral ischemia/reperfusion induced neuronal injury［J］. Scientific Reports， 2020， 10（1）： 7012.

［19］WANG G T， HAN B， SHEN L， et al. Silencing of circular RNA HIPK2 in neural stem cells enhances functional recovery following ischaemic stroke［J］. EBioMedicine， 2020， 52： 102660.

［20］CAI L D， QI B Z， WU X Y， et al. Circular RNA Ttc3 regulates cardiac function after myocardial infarction by sponging miR-15b［J］. Journal of Molecular and Cellular Cardiology， 2019， 130： 10-22.

［21］YU L L， WANG Q Y， LIU N， et al. Circular RNA circ-Ttc3 protects HaCaT cells from hypoxic injury by downregulation of miR-449a［J］. International Union of Biochemisery and Molecular Biology Life， 2020， 72（3）： 505-514.

［22］李崇祎. sdLDL-C、IMA及UACR與急性缺血性腦卒中病情及預(yù)后的關(guān)系［J］. 分子診斷與治療雜志， 2021， 13（3）： 495-499.