核酸酶
- 粘質(zhì)沙雷氏菌全能核酸酶的研究進(jìn)展
6000）全能核酸酶又稱(chēng)非特異性核酸酶 （Nonspecific nuclease，NU），可降解幾乎所有形式的DNA 和RNA （包括單鏈、雙鏈、線狀、環(huán)狀、天然以及變性的核酸），生成3～5 個(gè)堿基長(zhǎng)度的5’-單磷酸寡核苷酸。全能核酸酶來(lái)源廣泛，在動(dòng)物、植物、細(xì)菌、真菌和病毒均有發(fā)現(xiàn)，到目前為止，已鑒定出30 多種不同來(lái)源的全能核酸酶，其中來(lái)源于粘質(zhì)沙雷氏菌（Serratia marcescens）的全能核酸酶活力最強(qiáng)（下文無(wú)特殊說(shuō)明，全能核酸酶均指來(lái)源
北方牧業(yè) 2023年13期2023-07-28
- 易錯(cuò)PCR定向進(jìn)化技術(shù)提高蒙古黃芪病程相關(guān)蛋白AmPR-10核酸酶活性的研究
10類(lèi)蛋白具有核酸酶活性[1]，被認(rèn)為與降解RNA類(lèi)病毒有關(guān)[2]。蒙古黃芪病程相關(guān)蛋白-10(Astragalusmembranaceuspathogenesis-related protein-10，AmPR-10)由158個(gè)氨基酸殘基組成，分子大小約為16.8 kDa。目前已有研究證明天然提取的和重組的AmPR-10都具有核酸酶活性，但是活力均偏低[3-4]，不利于更深入的研究及大范圍的應(yīng)用。酶分子的定向進(jìn)化是由美國(guó)科學(xué)家Arnold F H于199
化學(xué)與生物工程 2022年2期2022-02-28
- 重組Pol D DNA聚合酶的純化及其功能初步研究*
3′→5′外切核酸酶活性；同時(shí)發(fā)現(xiàn)，相比于雙鏈DNA，DP1更容易降解單鏈DNA。研究發(fā)現(xiàn)大部分古菌中存在B家族(Pol B)與Pol D兩種DNA聚合酶，若將細(xì)胞內(nèi)的Pol B DNA聚合酶基因敲除，古菌依舊可以存活；若將細(xì)胞內(nèi)的Pol D DNA聚合酶基因敲除，則古菌無(wú)法存活[9]。由此可見(jiàn)Pol D DNA聚合酶在古菌DNA復(fù)制過(guò)程中的重要性。相比于Pol A、Pol B等家族的DNA聚合酶，國(guó)內(nèi)外對(duì)Pol D DNA聚合酶的研究仍然較少，多種古菌中
廣西科學(xué) 2022年6期2022-02-09
- 腸炎沙門(mén)菌胞外分泌蛋白的核酸酶活性測(cè)定
明質(zhì)酸酶和胞外核酸酶等，這些酶能使細(xì)菌逃避宿主的免疫系統(tǒng)[5]。這些酶類(lèi)可以固定在細(xì)胞外膜上，也可以釋放到細(xì)胞外空間[6]。其中，胞外核酸酶是一種由人類(lèi)、動(dòng)物、細(xì)菌、真菌、寄生蟲(chóng)等多種生物分泌的酶類(lèi)，能夠降解環(huán)境中DNA或RNA的酶類(lèi)，對(duì)于細(xì)菌的毒力、生物被膜的形成、黏附、侵襲以及利用胞外DNA獲取營(yíng)養(yǎng)起著重要作用[7-9]。另外有研究發(fā)現(xiàn)，胞外核酸酶還能防御中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng)(NETs)，降解胞外誘捕網(wǎng)中的DNA[10]。雖然近年來(lái)在研究腸炎沙門(mén)菌致病
中國(guó)獸醫(yī)雜志 2021年8期2022-01-17
- 一種快速靈敏非特異性核酸酶酶活測(cè)定方法
610052)核酸酶是以核酸為底物，催化磷酸二酯鍵水解的一類(lèi)酶。核酸酶按作用底物的不同分為脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶和非特異性核酸酶；按作用的位點(diǎn)不同，又可將核酸酶分為核酸外切酶和核酸內(nèi)切酶。其中非特異性核酸內(nèi)切酶是一類(lèi)高活性水解酶，其最大的特點(diǎn)是能非特異地降解幾乎所有類(lèi)型的核酸，包括單鏈、雙鏈、線狀及環(huán)狀的 DNA 和 RNA，且對(duì)核酸的序列沒(méi)有嚴(yán)格的要求[1]。目前關(guān)于非特異性核酸酶的報(bào)道已經(jīng)很多，例如：海洋嗜熱細(xì)菌噬菌體(GBSV1-NSN)非特異性
生物學(xué)雜志 2021年6期2021-12-20
- 同源蛋白序列比對(duì)探討AmPR-10核酸酶活性機(jī)理
PR-10具有核酸酶活性[1]，且該活性很大程度是與植物防御病原體感染降解RNA類(lèi)病毒有關(guān)[2]。而無(wú)論是天然黃芪中提取的AmPR-10還是研究中得到的外源重組蛋白，核酸酶活性都比較低[3]。因此進(jìn)一步提高AmPR-10核酸酶活性，探究相關(guān)機(jī)理，對(duì)深入了解黃芪生長(zhǎng)發(fā)育抗病機(jī)制具有重要意義。目前，已知PR-10類(lèi)蛋白的核酸酶活性可能與一段保守的P-loop環(huán)(GxGGxGxxK)相關(guān)[4]，然而也有很多具有該結(jié)構(gòu)的PR-10類(lèi)蛋白被證明并沒(méi)有核酸酶活性，這一
生物學(xué)雜志 2021年5期2021-10-25
- 無(wú)血清懸浮MDCK細(xì)胞培養(yǎng)流感病毒純化工藝的初步建立
DNA通常選擇核酸酶消化、離子交換層析等方法來(lái)進(jìn)行有效去除［8］。新型復(fù)合填料Capto Core700具有未官能化的惰性外殼和位于核心的辛胺配基，使其具有分子排阻和離子吸附的雙重功能［9］，非常適合宿主細(xì)胞蛋白與核酸酶的去除［10］。本研究通過(guò)優(yōu)化核酸酶處理?xiàng)l件、復(fù)合介質(zhì)Capto Core700與強(qiáng)陰離子介質(zhì)Capto Q的純化條件，建立適于無(wú)血清懸浮MDCK細(xì)胞培養(yǎng)流感病毒的下游純化工藝，為后續(xù)MDCK細(xì)胞流感疫苗的生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。1 材料與方法1.1
中國(guó)生物制品學(xué)雜志 2021年9期2021-09-18
- 醫(yī)療器械清洗中的新酶應(yīng)用
加以介紹。1 核酸酶核酸酶是一種旨在提升內(nèi)窺鏡清潔效能的新型酶，它賦予內(nèi)窺鏡清洗劑高度實(shí)用化和差異化的清潔力。使用過(guò)的內(nèi)窺鏡會(huì)沾染生物殘?jiān)渲胁丶{的污垢物質(zhì)包含蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物和DNA。核酸酶屬于磷酸二酯酶，它直接作用于游離的黏性DNA并可使其降解，而此前還從未有過(guò)專(zhuān)門(mén)針對(duì)這一污物的酶。這是一種開(kāi)創(chuàng)性的生物酶解決方案，它可直接針對(duì)含DNA分子的黏性污物進(jìn)行有效去除。比起市面上現(xiàn)有的清洗劑，含有核酸酶的清洗劑配方可以更快和更有效地清潔被污染的內(nèi)窺鏡
中國(guó)洗滌用品工業(yè) 2021年7期2021-08-07
- 桔青霉產(chǎn)核酸酶P1酶分離純化及其酶學(xué)性質(zhì)
443003）核酸酶P1，又名5’-磷酸二酯酶，它是一種含鋅金屬酶。桔青霉（Penicillium citrinum）來(lái)源的核酸酶P1，分子量約為44 kDa，由331個(gè)氨基酸多肽單鏈構(gòu)成，含有2個(gè)二硫鍵，其活性中心存在一個(gè)三鋅結(jié)構(gòu)。核酸酶P1的作用為水解RNA和催化水解熱變性DNA中的磷酸二酯鍵得到5’-核苷酸。5’-核苷酸具有很好的營(yíng)養(yǎng)保健作用，其中5’-GMP和5’-AMP是天然的風(fēng)味增強(qiáng)劑，能夠顯著提高產(chǎn)品的風(fēng)味特征，還可以作營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑、藥物前體物
食品工業(yè)科技 2021年7期2021-06-17
- 貂源肺炎克雷伯菌的分離鑒定及胞外分泌蛋白的核酸酶活性分析
種酶類(lèi)物質(zhì)，如核酸酶、膠原酶、蛋白酶、幾丁質(zhì)酶和透明質(zhì)酸酶等[7]。微生物胞外蛋白核酸酶在細(xì)菌和宿主之間的相互作用過(guò)程中發(fā)揮重要作用[8-9]。病原體感染宿主細(xì)胞的過(guò)程中，DNA和RNA可被核酸酶水解消化成寡核苷酸，以此作為微生物生存的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。同時(shí)，胞外核酸酶可降解宿主細(xì)胞表面的黏性分泌物，使得細(xì)菌更容易黏附到細(xì)胞表面，有助于細(xì)菌感染宿主[10]。因此，致病性病原體的胞外核酸酶是一種重要的毒力因子[11-12]。探究細(xì)菌胞外核酸酶有助于揭示微生物病原體的
河南農(nóng)業(yè)科學(xué) 2021年3期2021-04-08
- 豬霍亂沙門(mén)菌胞外產(chǎn)物的核酸酶活性及其對(duì)巨噬細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng)形成的影響
等癥狀[6]。核酸酶廣泛存在于各種微生物胞外產(chǎn)物中，在微生物感染和宿主免疫中發(fā)揮著重要作用[7]。胞外核酸酶可以分解外源DNA作為微生物生存的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)并且保護(hù)自身結(jié)構(gòu)不被破壞[8]。胞外核酸酶可以作為毒力因子在細(xì)菌侵入宿主機(jī)體時(shí)發(fā)揮作用[9]。大量的外源DNA能使宿主細(xì)胞表面的黏性分泌物增多，而胞外核酸酶可局部降解這些分泌物，從而導(dǎo)致細(xì)菌更容易附著在隱藏的細(xì)胞表面，有助于細(xì)菌成功感染宿主[10]。探究細(xì)菌胞外產(chǎn)物有助于揭示病原體的致病機(jī)制，但目前未見(jiàn)關(guān)于豬
畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào) 2021年3期2021-03-30
- 采用核酸酶酶解聯(lián)合離子交換樹(shù)脂吸附開(kāi)發(fā)低嘌呤腐竹
文將樹(shù)脂吸附和核酸酶酶解核酸2種方法相結(jié)合，通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)確定去除嘌呤類(lèi)物質(zhì)的最佳技術(shù)條件，開(kāi)發(fā)出適宜高尿酸血癥等特殊人群的低嘌呤腐竹產(chǎn)品，擴(kuò)大腐竹消費(fèi)人群，同時(shí)可為其他豆制品的嘌呤去除提供理論參考。1 材料與方法1.1 材料與儀器材料：大豆，北京二商(江西大觀樓)食品有限公司提供；離子交換樹(shù)脂NUF01、NUF110、NUF10和NUF20，為向樹(shù)脂生產(chǎn)企業(yè)訂制實(shí)驗(yàn)室改良產(chǎn)品；腺嘌呤、鳥(niǎo)嘌呤、黃嘌呤、次黃嘌呤，色譜純，美國(guó)Sigma公司；四丁基氫氧化銨(含
食品與發(fā)酵工業(yè) 2021年1期2021-01-20
- 歐洲食品安全局對(duì)基因組編輯植物給出安全結(jié)論
上，分別是定點(diǎn)核酸酶-1（SDN-1），定點(diǎn)核酸酶-2（SDN-2）和寡核苷酸定向誘變（ODM）。這三項(xiàng)技術(shù)不同于EFSA在2012年評(píng)估的定點(diǎn)核酸酶3（SDN-3）技術(shù)，因?yàn)樗鼈冃揎椈蚪M的特定區(qū)域而不引入新的DNA。專(zhuān)家們得出的結(jié)論是：現(xiàn)有的《轉(zhuǎn)基因植物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估準(zhǔn)則》適用于對(duì)這三種新技術(shù)的安全評(píng)估。此外，EFSA的評(píng)估意見(jiàn)還將為正在進(jìn)行的關(guān)于新基因組技術(shù)的研究提供輔助信息。來(lái)源：歐洲食品安全局
國(guó)際種業(yè)前沿動(dòng)態(tài) 2020年18期2020-12-23
- 含季銨鹽的芳酰腙配體的銅 (Ⅱ)配合物的合成和表征：體外DNA鍵合和核酸酶活性
Eda ?engül Elif Cansu G?k?e Topkaya Tolga G?ktürk Ramazan Gup(Department of Chemistry,Faculty of Science,Mugla S?tk? Ko?man University,48000,Kotekli-Mugla,Turkey)0 IntroductionDNA is the storage and transport of genetic informatio
無(wú)機(jī)化學(xué)學(xué)報(bào) 2020年7期2020-07-20
- 金黃色葡萄球菌胞外分泌蛋白的核酸酶活性研究
酶、幾丁質(zhì)酶和核酸酶等多種酶類(lèi)[5]。其中核酸酶在各種微生物中廣泛存在，主要參與機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)代謝、遺傳物質(zhì)的復(fù)制、重組和修復(fù)機(jī)制以及微生物感染、免疫等相關(guān)過(guò)程[6]。在病原菌感染宿主細(xì)胞的過(guò)程中，病原菌通過(guò)分泌各種核酸酶水解磷酸二酯鍵將DNA和RNA 消化成寡核苷酸，擴(kuò)大自身可用的核苷酸庫(kù)來(lái)提供生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)。已有研究表明致病性病原體可分泌核酸酶，是細(xì)菌的重要毒力因子[7]。探究細(xì)菌胞外分泌蛋白的特性有助于揭示病原體與宿主互作的分子機(jī)制，但目前關(guān)于金黃色葡萄球菌胞
中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào) 2020年2期2020-06-01
- 多種Cas12a蛋白變體能識(shí)別不同的PAM序列（2020.4.27 Plant Biotechnology Journal）
同特性的Cas核酸酶的不斷發(fā)現(xiàn)，具體體現(xiàn)在不同的靶向性（DNA或RNA）、不同的PAM識(shí)別譜、不同的最佳溫度和能夠降低脫靶傾向等特點(diǎn)的Cas核酸酶的發(fā)現(xiàn)。因此，大量的工作集中在擴(kuò)大已知的CRISPR-Cas亞型的數(shù)量，以識(shí)別具有新特性的核酸酶。然而，新出現(xiàn)的證據(jù)表明，在每個(gè)亞型中，也存在著令人難以置信的多樣性。我們卻對(duì)它們知之甚少。Cas12a（也稱(chēng)為Cpf1）核酸酶是V-A亞型CRISPR/Cas系統(tǒng)的典型代表，與其他已知的Cas核酸酶相比，Cas12a
三農(nóng)資訊半月報(bào) 2020年8期2020-05-13
- 擬南芥核酸酶基因AtCaN2克隆及功能分析
150040)核酸酶存在于大多數(shù)生命體內(nèi)，是一種特異性作用于磷酸二酯鍵的酶，它能夠水解核酸鏈，生成低聚核苷酸或者是單核苷酸[1]，它在遺傳物質(zhì)的重組、堿基錯(cuò)配識(shí)別和切割異源DNA等多個(gè)途徑中起著重要的作用[2-6]，同時(shí)有的核酸酶活性還依賴于鈣離子、鎂離子、錳離子等各種各樣的金屬離子[7]。核酸酶在細(xì)菌和微生物里面研究的比較早，一些研究發(fā)現(xiàn)，核酸酶可以用于DNA探針進(jìn)行簡(jiǎn)單快速的細(xì)菌檢測(cè)，探針熒光信號(hào)與革蘭氏陰性大腸桿菌和革蘭氏陽(yáng)性金黃色葡萄球菌的數(shù)量相關(guān)
華北農(nóng)學(xué)報(bào) 2020年1期2020-04-16
- 基因組編輯技術(shù)及其在癌癥相關(guān)基因的功能性篩選中的應(yīng)用
大的限制。人工核酸酶的出現(xiàn)極大地提高了基因組編輯的效率，人工核酸酶經(jīng)歷了兩代技術(shù)分別是鋅指核酸酶和轉(zhuǎn)錄激活效應(yīng)物樣核酸酶，其靶向DNA的特異性是由蛋白質(zhì)與DNA堿基的特異性結(jié)合實(shí)現(xiàn)的。但是在應(yīng)用人工核酸酶時(shí)，需要根據(jù)DNA靶位點(diǎn)的序列構(gòu)建可以編碼產(chǎn)生能與靶位點(diǎn)特異性結(jié)合的鋅指蛋白或者轉(zhuǎn)錄激活效應(yīng)物的DNA結(jié)構(gòu)，由于這兩個(gè)蛋白氨基酸數(shù)量多且重復(fù)性高，給其編碼序列的構(gòu)建帶來(lái)了很大的難度。CRISPR/Cas9技術(shù)的出現(xiàn)，徹底改變了研究者實(shí)現(xiàn)基因組編輯的方式，憑
科學(xué)咨詢 2020年10期2020-01-07
- 新RNA編輯技術(shù)CRISPR-Cas13
指引下將Cas核酸酶與靶序列相結(jié)合并將其進(jìn)行剪切。當(dāng)病毒入侵時(shí)，細(xì)菌細(xì)胞能夠?qū)⑼鈦?lái)遺傳物質(zhì)的片段捕捉并整合到細(xì)胞自身基因組中的CRISPR序列中。當(dāng)病毒再次入侵時(shí)，CRISPR序列轉(zhuǎn)錄生成的CRISPR RNA(crRNA)能夠與Cas核酸酶相結(jié)合并將其引導(dǎo)到靶序列上發(fā)揮酶切活性，從而起到監(jiān)控病毒入侵的作用。當(dāng)這種外源核酸片段再度出現(xiàn)時(shí)，Cas核酸酶能夠切斷這些遺傳片段，從而為細(xì)菌細(xì)胞提供免疫保護(hù)作用。CRISPR-Cas13系統(tǒng)是以Cas13酶作為Cas
生物技術(shù)進(jìn)展 2019年6期2019-12-11
- 苦參雙功能核酸酶1的體外表達(dá)及結(jié)構(gòu)性質(zhì)分析
230038)核酸酶分為核酸外切酶和核酸內(nèi)切酶兩大類(lèi)，限制性核酸內(nèi)切酶能特異性識(shí)別切割雙鏈DNA上的特異核苷酸序列，又分為I、II和III 3種類(lèi)型；I型和III型核酸內(nèi)切酶不僅能特異性切割核酸，而且能對(duì)特殊堿基進(jìn)行甲基化修飾，其中I型核酸內(nèi)切酶切割位點(diǎn)距離識(shí)別位點(diǎn)可達(dá)數(shù)千個(gè)堿基之遠(yuǎn)；而III型核酸內(nèi)切酶切割位點(diǎn)距離識(shí)別位點(diǎn)只有25個(gè)堿基對(duì)左右。II型核酸內(nèi)切酶只具有識(shí)別切割的功能，不能對(duì)堿基進(jìn)行修飾，所識(shí)別的多為短的回文序列，所切割的堿基序列即為所識(shí)別的
生物學(xué)雜志 2019年2期2019-04-17
- 基因編輯技術(shù)及其在基因治療中的應(yīng)用
。近年來(lái)，鋅指核酸酶(zinc finger nuclease, ZFN)、類(lèi)轉(zhuǎn)錄激活因子效應(yīng)核酸酶(transcription activator-like effector nuclease, TALEN)、規(guī)律成簇的間隔短回文重復(fù)(regular clustering of short palindrome repeats, CRISPR)和單堿基編輯(base editing, BE)技術(shù)的相繼出現(xiàn)，不僅為基因功能研究提供了有力的工具，還為生命醫(yī)學(xué)
遺傳 2019年1期2019-01-30
- S1核酸酶介導(dǎo)的功能核酸生物傳感器研究進(jìn)展
，如雙鏈特異性核酸酶（Duplex-specific nuclease，DSN酶），根據(jù)其對(duì)單雙鏈核酸不同的切割特點(diǎn)，搭載不同的信號(hào)輸出及擴(kuò)增方式，已經(jīng)介導(dǎo)了一系列核酸傳感器包括光學(xué)傳感器、電化學(xué)傳感器和光磁傳感器等，實(shí)現(xiàn)了microRNA、mRNA、重金屬離子等一系列生物標(biāo)志物及食品安全風(fēng)險(xiǎn)因子的檢測(cè)。脫嘌呤/脫嘧啶核酸內(nèi)切酶1（Apurinic/apyrimidinic endonuclease 1，APE1），具有能夠在堿基缺失位點(diǎn)（AP site）
生物技術(shù)通報(bào) 2019年1期2019-01-23
- 基因編輯技術(shù)在水產(chǎn)生物中的研究進(jìn)展
[24]和人工核酸酶技術(shù)（鋅指核酸復(fù)合酶（ZFNs）、轉(zhuǎn)錄激活子樣效應(yīng)因子核酸酶（TALEN）、成簇規(guī)律性間隔的短回文序列重復(fù) (CRISPR)技術(shù)）?；蚓庉嫾夹g(shù)的出現(xiàn)為快速、高效驗(yàn)證基因功能提供的最有效的技術(shù)手段?；蚓庉嬍且环N對(duì)基因組及其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行定點(diǎn)修飾、定向敲除或敲入外源的DNA序列，使之產(chǎn)生可遺傳的改變的技術(shù)。與射線誘導(dǎo)和化學(xué)誘變相比，具有高效、可控和定向操作的特點(diǎn)?；蚓庉嫾夹g(shù)被麻省理工科技評(píng)論評(píng)為2014年十大突破性科學(xué)技術(shù),其中CRIS
興義民族師范學(xué)院學(xué)報(bào) 2018年3期2018-07-19
- 綠豆核酸酶的提取及活力測(cè)定
目的]優(yōu)化綠豆核酸酶的提取條件并測(cè)定其活力。[方法]利用單因素和正交試驗(yàn)，考察提取時(shí)間、料液比、pH、芽長(zhǎng)幾個(gè)因素對(duì)從綠豆芽中提取核酸酶的影響，優(yōu)選出各影響因素的最佳水平，并進(jìn)行活力測(cè)定。[結(jié)果]提取時(shí)間20 h，料液比1∶12（g∶mL），pH 3.0，芽長(zhǎng)是綠豆長(zhǎng)的4倍時(shí)，綠豆核酸酶酶活最高為478.86 U/ mL 。影響綠豆核酸酶提取的因素主次順序依次為提取時(shí)間、pH、料液比、芽長(zhǎng)。采用飽和度為80%的硫酸銨鹽析沉淀后，酶活達(dá) 1 569.6 U/
安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2018年2期2018-05-14
- 金黃色葡萄球菌核酸酶A在溫控雙表達(dá)載體中的表達(dá)及其活性分析
金黃色葡萄球菌核酸酶A被引入菌蛻的制備之中[6]。SNA為金黃色葡萄球菌核酸酶的結(jié)構(gòu)基因，其產(chǎn)物具有核酸酶活性，可在鈣、鎂離子存在時(shí)降解單鏈或雙鏈DNA或RNA[7-8]。在實(shí)際應(yīng)用中，出于經(jīng)濟(jì)性和操作便利性考慮，多將裂解基因E和SNA克隆至同一溫控表達(dá)載體，各自置于一個(gè)pR啟動(dòng)子或分別置于pR和pL啟動(dòng)子控制之下，通過(guò)升溫誘導(dǎo)兩者的聯(lián)合表達(dá)[9-11]。兩者的聯(lián)合表達(dá)可使殘存活菌數(shù)在單純基因E介導(dǎo)滅活的基礎(chǔ)上進(jìn)一步下降2個(gè)數(shù)量級(jí)，而值得注意的是，在單表達(dá)
生物學(xué)雜志 2018年2期2018-04-17
- 人、豬和雞源SAMHD1蛋白的酶活性研究
P水解酶活性或核酸酶活性抑制病毒的復(fù)制，具有廣譜抗病毒功能．利用生物信息學(xué)分析該蛋白家族序列保守性，并借助HPLC層析色譜分析與酶活性測(cè)定和酶標(biāo)儀方法，對(duì)人源、豬源和雞源三物種SAMHD1蛋白的酶活性進(jìn)行了比較．比對(duì)發(fā)現(xiàn)SAMHD1蛋白在活性空腔、變構(gòu)位點(diǎn)及磷酸化位點(diǎn)等處序列上具有高度的保守性；而且發(fā)現(xiàn)豬源和雞源SAMHD1蛋白同樣具有dNTP水解酶和核酸酶活性；3種蛋白中，人源SAMHD1蛋白dNTP水解酶活性最高，豬源蛋白核酸酶活性最低．這一結(jié)果為研究
天津大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)與工程技術(shù)版) 2018年1期2018-01-20
- 重組旋毛蟲(chóng)plancitoxin-1-like活性位點(diǎn)突變體蛋白的核酸酶活性
點(diǎn)突變體蛋白的核酸酶活性廖成水1，王曉利2，田文靜1，張夢(mèng)珂1，張春杰1，李銀聚1，吳庭才1，程相朝1,31 河南科技大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院 洛陽(yáng)市活載體生物材料與動(dòng)物疫病防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河南 洛陽(yáng) 471023 2 河南科技大學(xué) 醫(yī)學(xué)院，河南 洛陽(yáng) 471023 3 洛陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南 洛陽(yáng) 471099廖成水, 王曉利, 田文靜, 等. 重組旋毛蟲(chóng)plancitoxin-1-like活性位點(diǎn)突變體蛋白的核酸酶活性. 生物工程學(xué)報(bào), 2017, 33(8
生物工程學(xué)報(bào) 2017年8期2017-09-03
- 新型基因編輯技術(shù)在生物制藥領(lǐng)域的應(yīng)用與發(fā)展
現(xiàn)，其中，鋅指核酸酶、轉(zhuǎn)錄激活子樣效應(yīng)因子核酸酶以及CRISPR/Cas RNA引導(dǎo)核酸酶等基因組編輯技術(shù)在生物制藥領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。此類(lèi)技術(shù)編輯效率高，在建立細(xì)胞模型新藥開(kāi)發(fā)，新型動(dòng)物模型開(kāi)發(fā)建立，細(xì)胞工程改造以及蛋白產(chǎn)物糖基化水平優(yōu)化等方面應(yīng)用廣泛。本文主要介紹了三種新的基因編輯技術(shù)以及其在生物制藥方面的應(yīng)用發(fā)展。基因編輯；生物制藥；鋅指核酸酶；轉(zhuǎn)錄激活子樣效應(yīng)因子核酸酶；CRISPR/Cas RNA引導(dǎo)核酸酶隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展進(jìn)步，新型的基因編輯
生物化工 2017年5期2017-04-09
- 基因編輯技術(shù)簡(jiǎn)介
目前主要有鋅指核酸酶、轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應(yīng)物核酸酶和RNA引導(dǎo)的CRISPR/Cas核酸酶技術(shù)三種新型的基因編輯技術(shù)。綜述了三種技術(shù)的結(jié)構(gòu)原理和作用機(jī)理，并對(duì)基因編輯技術(shù)進(jìn)行了展望。關(guān)鍵詞 基因編輯 鋅指核酸酶 轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應(yīng)物核酸酶 CRISPR/Cas9核酸酶中圖分類(lèi)號(hào) Q-49 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 E基因編輯是指對(duì)基因組進(jìn)行定點(diǎn)修飾的一項(xiàng)新技術(shù)。利用該技術(shù)，可以精確地定位到基因組的某一位點(diǎn)上，在這位點(diǎn)上剪斷靶標(biāo)DNA片段并插入新的基因片段。此過(guò)程既模擬了基
中學(xué)生物學(xué) 2017年2期2017-03-20
- 用megaTAL 核酸酶對(duì)原代人T 細(xì)胞CCR5 基因座進(jìn)行有效修飾可建立HIV-1 抵抗力
egaTAL 核酸酶對(duì)原代人T 細(xì)胞CCR5 基因座進(jìn)行有效修飾可建立HIV-1 抵抗力已有研究表明，HIV-1 協(xié)同受體( co-receptor) CCR5 基因中自然發(fā)生的32 個(gè)堿基對(duì)缺失( 32-base pair deletion)可保護(hù)人CD4+T細(xì)胞，對(duì)抗HIV感染。最近，用工程化核酸酶干擾該基因和模擬此突變的基因工程方法展示了HIV 治療獲得成功的跡象。Romano Ibarra 等研制了一個(gè)靶向CCR5 基因第3 細(xì)胞外莖環(huán)( extr
中國(guó)病理生理雜志 2017年2期2017-01-17
- 金黃色葡萄球菌核酸酶A與不同外源DNA片段融合表達(dá)的作用比較
金黃色葡萄球菌核酸酶A與不同外源DNA片段融合表達(dá)的作用比較付立霞1，冀德君1，盧徐斌1，韓先干2，魏文志11 揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院 江蘇省人畜共患病學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 揚(yáng)州 2250092 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所，上海 200241付立霞, 冀德君, 盧徐斌, 等. 金黃色葡萄球菌核酸酶A與不同外源DNA片段融合表達(dá)的作用比較. 生物工程學(xué)報(bào), 2016, 32(12): 1654-1663.Fu LX, Ji DJ, Lu XB, et a
生物工程學(xué)報(bào) 2016年12期2016-12-28
- 氨基噻唑酮Cu(II)核酸酶的合成、結(jié)構(gòu)及活性研究
酮Cu(II)核酸酶的合成、結(jié)構(gòu)及活性研究邵佳1，徐靖源2（1.天津市第一中心醫(yī)院藥學(xué)部，天津300192；2.天津醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，天津市臨床藥物關(guān)鍵技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津300070）目的：探究氨基噻唑酮Cu（II）核酸酶的合成、晶體結(jié)構(gòu)及其活性，預(yù)期得到一種高效的體外化學(xué)核酸酶試劑。方法：利用單晶衍射、瓊脂糖凝膠電泳分別確定氨基噻唑酮Cu(II)核酸酶試劑的空間結(jié)構(gòu)及其活性。結(jié)果：氨基噻唑酮Cu(II)核酸酶試劑為單斜晶系，空間群為P2(1)/n，由單個(gè)
天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào) 2016年6期2016-12-15
- 發(fā)芽及提取條件對(duì)大麥麥芽根中核酸酶活性的影響
對(duì)大麥麥芽根中核酸酶活性的影響劉馨予，楊洋，朱思齊，秦陽(yáng)，李新，張洪微，高玉榮，崔素萍（黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)食品學(xué)院，大慶163319）為了從大麥芽根中制備高活性的核酸酶，以麥芽根及成品麥芽根中核酸酶活性為指標(biāo)，確定了內(nèi)蒙墾大麥和澳洲大麥的最佳發(fā)芽條件。在此基礎(chǔ)上，研究了麥芽根中核酸酶的提取條件對(duì)核酸酶活性的影響。結(jié)果表明：最佳發(fā)芽條件是25℃，發(fā)芽64 h時(shí)，內(nèi)蒙墾和澳洲麥芽根中核酸梅的活性最高分別為316.7 U·mL-1，364.5 U·mL-1。麥芽
黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報(bào) 2016年2期2016-11-12
- 2，6-二甲基-3，5-吡啶二甲酰腙衍生物的合成及與DNA的作用
啶;酰腙;人工核酸酶;DNA近十幾年來(lái)，人工核酸酶的研究取得了很大進(jìn)展，這些成果將有助于細(xì)胞學(xué)、分子生物學(xué)的發(fā)展，并有可能應(yīng)用于基因治療中。因?yàn)樘烊?span id="syggg00" class="hl">核酸酶的活性中心有一個(gè)或多個(gè)金屬離子參與反應(yīng)，所以以金屬配合物作為人工核酸酶的研究受到了廣泛的關(guān)注，其中就包括許多酰腙金屬配合物[1-2]。但是金屬及金屬配合物類(lèi)核酸酶涉及到的多數(shù)為有氧化或還原活性的金屬離子，很可能發(fā)生一些比較復(fù)雜的化學(xué)反應(yīng)，比如金屬離子從配合物中解離出來(lái)，或發(fā)生一些難以控制的氧化還原反應(yīng)，這
- 三種檢測(cè)內(nèi)源性基因修飾方法比較
確定了3種人工核酸酶生物學(xué)活性檢測(cè)方法。利用Surveyor nuclease、T7E1（T7 Endonuclease 1）和HRM（High resolution melt），均以變性退火突變型和野生型DNA序列形成扭曲的雙螺旋DNA（distorted duplex DNA）為基礎(chǔ)的3種人工核酸酶生物學(xué)活性檢測(cè)方法，確定目標(biāo)位點(diǎn)是否發(fā)生突變。實(shí)驗(yàn)成功檢測(cè)出作用于綿羊MNST基因第一外顯子的CRISPR/Cas9和第三外顯子的TALEN目標(biāo)位點(diǎn)發(fā)生突變
生物技術(shù)通報(bào) 2016年2期2016-10-13
- 作物改良領(lǐng)域人工核酸酶技術(shù)全球?qū)＠季址治?/a>
物改良領(lǐng)域人工核酸酶技術(shù)全球?qū)＠季址治龊蜗姝?，趙永江1，譚永華2，田 野1，田文文1，朱 寧1，潘衛(wèi)東2*(1.國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局專(zhuān)利局專(zhuān)利審查協(xié)作湖北中心，湖北武漢 430070；2.貴州省中國(guó)科學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州貴陽(yáng) 550002)利用德溫特世界專(zhuān)利索引數(shù)據(jù)庫(kù)(DWPI)，分析作物改良領(lǐng)域人工核酸酶技術(shù)專(zhuān)利布局，揭示關(guān)鍵技術(shù)發(fā)展方向和趨勢(shì)、技術(shù)分布區(qū)域、專(zhuān)利申請(qǐng)人情況、競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手情況以及各技術(shù)方向?qū)?yīng)的技術(shù)功效分布，以期為我國(guó)研究者的技術(shù)研
安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2016年23期2016-10-10
- 氨基樹(shù)脂表面活化提高固定化核酸酶P1連續(xù)催化性能
活化提高固定化核酸酶P1連續(xù)催化性能何林姣1,2，劉曉靜1,2，黃金莎1,2，莊偉1,2,3，應(yīng)漢杰1,2,3（1南京工業(yè)大學(xué)材料化學(xué)工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京 210009；2南京工業(yè)大學(xué)制藥與生物工程學(xué)院國(guó)家生化工程技術(shù)研究中心，江蘇 南京 211816；3南京工業(yè)大學(xué)江蘇先進(jìn)生物與化學(xué)制造協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇 南京 211816）考察了固定化酶常用載體-氨基樹(shù)脂幾何結(jié)構(gòu)及表面活化過(guò)程對(duì)固定化核酸酶P1性能的影響，并進(jìn)行了動(dòng)力學(xué)和連續(xù)催化穩(wěn)定性研究。
化工學(xué)報(bào) 2016年9期2016-09-26
- 熱敏型核酸酶在畢赤酵母中的分泌表達(dá)及催化特性
，陳鵬?熱敏型核酸酶在畢赤酵母中的分泌表達(dá)及催化特性陳芳霞，陳鵬西北農(nóng)林科技大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，陜西 楊凌 712100核酸酶在生物工程領(lǐng)域有著重要的應(yīng)用價(jià)值。本研究在優(yōu)化北極蝦核酸酶 (Shrimp nuclease，SNU) 基因序列的基礎(chǔ)上，構(gòu)建SNU的畢赤酵母分泌表達(dá)載體SNU-pPICZα A并轉(zhuǎn)化酵母，以高拷貝整合轉(zhuǎn)化子為基礎(chǔ)，優(yōu)化酶表達(dá)的條件，并對(duì)該酶的催化特性進(jìn)行分析，結(jié)果顯示SNU可在畢赤酵母SMD1168H中高效分泌表達(dá)，最佳誘導(dǎo)表達(dá)條
生物工程學(xué)報(bào) 2016年7期2016-09-19
- Serratiamarcescens非特異性核酸酶研究進(jìn)展
ens非特異性核酸酶研究進(jìn)展張瑜，鄭偉，顧劍飛，石陸娥(杭州師范大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，浙江杭州310016)Serratiamarcescens核酸酶是一種非特異性核酸內(nèi)切酶，可降解不同形式的DNA和RNA。本文綜合國(guó)內(nèi)外的研究概況,主要介紹了Serratiamarcescens非特異性核酸酶的水解位點(diǎn)、催化機(jī)制及其降解底物的特點(diǎn)，另外也闡述了Serratiamarcescens非特異性核酸酶的原核表達(dá)的研究以及其應(yīng)用現(xiàn)狀，為Serratiamarces
廣州化工 2016年5期2016-09-01
- 新醫(yī)學(xué)時(shí)代：治療性基因組編輯
鍵的原則?；?span id="syggg00" class="hl">核酸酶的基因組編輯基本過(guò)程是在基因組內(nèi)構(gòu)建一個(gè)位點(diǎn)特異性DSB，然后催動(dòng)細(xì)胞自己的內(nèi)源性修復(fù)機(jī)制來(lái)修復(fù)折斷（圖1）。細(xì)胞可以使用兩種基本機(jī)理來(lái)修復(fù)折斷：非同源性末端連接（NHEJ）或同源重組（HR）。當(dāng)單個(gè)折斷的編輯因NHEJ而發(fā)生，就可以在折斷位點(diǎn)上構(gòu)建出插入/缺失之類(lèi)的突變（圖1a）。缺失的尺寸趨向于大于插入的尺寸，當(dāng)染色體外DNA在折斷位點(diǎn)處被捕捉時(shí)例外（其發(fā)生率罕見(jiàn)但是可測(cè)量），這種時(shí)候可以發(fā)生數(shù)百堿基對(duì)的插入。當(dāng)使用捐贈(zèng)者的供體序列
世界科學(xué) 2016年8期2016-08-27
- 探索基因組編輯的新工具
列，它能與多種核酸酶（其中之一為Cas9）協(xié)同，起到識(shí)別并摧毀入侵病毒DNA的作用。已有研究發(fā)現(xiàn)，CRISPR-Cas9系統(tǒng)可轉(zhuǎn)用于基因組編輯，成功實(shí)現(xiàn)生物醫(yī)學(xué)上的基因靶向修飾，效率大大超過(guò)以往的基因組編輯工具。2015年9月，又有研究發(fā)現(xiàn)了核酸酶Cpf1與CRISPR組成的CRISPR-Cpf1系統(tǒng)，它比起CRISPR-Cas9有諸多特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)，可望發(fā)展成更加高效的基因組編輯工具。黃志偉課題組首先解析了結(jié)合CRISPR RNA（crRNA）的Cpfl復(fù)合
科學(xué) 2016年3期2016-05-30
- 動(dòng)物轉(zhuǎn)基因研究中鋅指核酸酶的應(yīng)用及進(jìn)展
基因研究中鋅指核酸酶的應(yīng)用及進(jìn)展王嘉彬華中農(nóng)業(yè)大學(xué)作為一種比較先進(jìn)的基因修飾技術(shù)，鋅指核酸酶技術(shù)已經(jīng)在多種生物轉(zhuǎn)基因研究領(lǐng)域得到了應(yīng)用，包括植物、昆蟲(chóng)、各類(lèi)動(dòng)物乃至人類(lèi)細(xì)胞中，強(qiáng)化了人們對(duì)于動(dòng)物復(fù)雜生理系統(tǒng)的理解和認(rèn)知，不僅使得鋅指核酸酶技術(shù)成為構(gòu)造轉(zhuǎn)基因生物的強(qiáng)力工具，更使得其在許多疾病的治療中發(fā)揮出了重要作用。本文主要對(duì)鋅指核酸酶在動(dòng)物轉(zhuǎn)基因研究中的應(yīng)用及進(jìn)展進(jìn)行了討論。動(dòng)物轉(zhuǎn)基因；鋅指核酸酶；應(yīng)用；進(jìn)展前言轉(zhuǎn)基因在當(dāng)前的科學(xué)研究領(lǐng)域雖然并非新的課題，
科學(xué)中國(guó)人 2016年26期2016-03-15
- 氨基樹(shù)脂表面活化提高固定化核酸酶P1連續(xù)催化性能
活化提高固定化核酸酶P1連續(xù)催化性能何林姣1,2，劉曉靜1,2，黃金莎1,2，莊偉1,2,3，應(yīng)漢杰1,2,3（1南京工業(yè)大學(xué)材料化學(xué)工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京 210009；2南京工業(yè)大學(xué)制藥與生物工程學(xué)院國(guó)家生化工程技術(shù)研究中心，江蘇 南京 211816；3南京工業(yè)大學(xué)江蘇先進(jìn)生物與化學(xué)制造協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇 南京 211816）考察了固定化酶常用載體-氨基樹(shù)脂幾何結(jié)構(gòu)及表面活化過(guò)程對(duì)固定化核酸酶P1性能的影響，并進(jìn)行了動(dòng)力學(xué)和連續(xù)催化穩(wěn)定性研究。
化工學(xué)報(bào) 2016年9期2016-03-13
- 基因組編輯技術(shù)及其在昆蟲(chóng)遺傳轉(zhuǎn)化中的應(yīng)用
93摘要:鋅指核酸酶、類(lèi)轉(zhuǎn)錄激活因子式核酸酶和CRISPR/Cas技術(shù)是近幾年發(fā)展起來(lái)的3種主要基因組編輯技術(shù)，其原理都是通過(guò)在生物基因組特定位點(diǎn)制造DNA雙鏈斷裂損傷，從而激活機(jī)體自身的DNA 損傷修復(fù)機(jī)制，在此過(guò)程中引發(fā)各種變異?；蚪M編輯技術(shù)已在研究基因功能和基因修復(fù)中成功應(yīng)用，基于基因組編輯技術(shù)的諸多優(yōu)點(diǎn)，如CRISPR/Cas技術(shù)能對(duì)基因組中多個(gè)特定位點(diǎn)進(jìn)行編輯，其有望成為昆蟲(chóng)遺傳轉(zhuǎn)化的主要策略。本文就鋅指核酸酶、類(lèi)轉(zhuǎn)錄激活因子式核酸酶和CRIS
生物安全學(xué)報(bào) 2015年2期2015-12-17
- 后基因組時(shí)代的基因編輯技術(shù)
相比，基于人工核酸酶的基因組編輯技術(shù)，憑借其效率高、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，迅速成為生物醫(yī)學(xué)研究的新熱點(diǎn)。人工核酸酶介導(dǎo)的基因組編輯核酸酶可以水解DNA的特異堿基序列，通過(guò)人為改造，可實(shí)現(xiàn)對(duì)基因的修飾。目前主要的人工核酸酶有三種：鋅指核酸酶（zinc finger nucleases，ZFN）、類(lèi)轉(zhuǎn)錄激活因子核酸酶（transcription activator-like effectornucleases。TALEN）和規(guī)律成簇的間隔短回文重復(fù)序列系統(tǒng)（clus
科學(xué) 2015年6期2015-05-30
- 利用常壓室溫等離子體(ARTP)誘變選育高產(chǎn)核酸酶P1菌株
)誘變選育高產(chǎn)核酸酶P1菌株梁劍光1,2,顧秋憶1,秦修東1,陳中兵2,余華順3,姚 娟3(1.常熟理工學(xué)院 生物與食品工程學(xué)院，江蘇常熟 215500；2.浙江升華拜克生物股份有限公司，浙江湖州 223232；3.安琪酵母股份有限公司，湖北宜昌 215500)為提高核酸酶P1的發(fā)酵酶活,以桔青霉菌株CK-3為出發(fā)菌株,利用常壓室溫等離子體(ARTP)誘變方法,獲得了3株(CK-3-1,CK-3-7,CK-3-9)高產(chǎn)核酸酶P1菌株,其中CK-3-9突變株
食品工業(yè)科技 2015年21期2015-05-05
- 基于SSA修復(fù)機(jī)制和特異性核酸酶活性檢測(cè)的雙熒光報(bào)告載體系統(tǒng)的開(kāi)發(fā)及應(yīng)用
復(fù)機(jī)制和特異性核酸酶活性檢測(cè)的雙熒光報(bào)告載體系統(tǒng)的開(kāi)發(fā)及應(yīng)用韓芙蓉1，王令1,2，徐坤1，張智英1，王昕1 1. 西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，楊凌 712100；2. 陜西理工學(xué)院生物科學(xué)與工程學(xué)院，漢中 723000報(bào)告載體系統(tǒng)因構(gòu)建快捷、改造簡(jiǎn)單、操作容易、經(jīng)濟(jì)有效，并且能通過(guò)介導(dǎo)篩選核酸酶陽(yáng)性細(xì)胞富集基因組修飾的陽(yáng)性細(xì)胞克隆，而成為特異性核酸酶活性檢測(cè)的重要手段?；诜峭茨┒诉B接(Non-homologous end joining，NHEJ)修
遺傳 2015年10期2015-01-03
- CRISPR/Cas9系統(tǒng)的分子機(jī)制及其在人類(lèi)疾病基因治療中的應(yīng)用
相繼開(kāi)發(fā)出鋅指核酸酶(Zinc finger nuclease, ZFN)技術(shù)[3,4]和轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應(yīng)物核酸酶(Transcription activator-like effector nucleases, TALEN)技術(shù)[5～7]，基因組編輯技術(shù)得到迅速發(fā)展。細(xì)胞內(nèi)有兩種DNA損傷修復(fù)途徑：一種是同源介導(dǎo)修復(fù)(Homology directed repair, HDR)，可實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確的DNA修復(fù)，不會(huì)產(chǎn)生基因突變；另一種是非同源末端連接(Non-
遺傳 2015年10期2015-01-03
- 美國(guó)：基因剪輯“刪除”艾滋病毒
后，一種被稱(chēng)為核酸酶的DNA剪切酶與一種被稱(chēng)為向?qū)Ш颂呛怂幔╣RNA）的RNA結(jié)合在一起瞄準(zhǔn)病毒的基因組，并將HIV-1病毒的DNA切除。哈利利的實(shí)驗(yàn)室研制了含有20個(gè)核苷酸鏈的gRNA來(lái)瞄準(zhǔn)HIV-1病毒的DNA，并將其與Cas9基因剪輯技術(shù)配對(duì)。隨后，細(xì)胞的基因修復(fù)機(jī)制開(kāi)始發(fā)揮作用，將基因組的松散末梢重新整合在一起——這樣細(xì)胞中就不再帶有病毒。這些分子工具還有望成為一種治療性疫苗；攜帶核酸酶與RNA組合的細(xì)胞不會(huì)受到HIV病毒的感染。endprint
東西南北 2014年21期2014-11-25
- 氧化石墨烯保護(hù)的核酸分子探針及其在生物分析中的應(yīng)用
核酸、蛋白質(zhì)、核酸酶、小分子及金屬離子的檢測(cè)[8-10]．除此之外,核酸與GO相互作用帶來(lái)的新的效應(yīng),如吸附于GO表面的核酸能夠抵抗核酸酶的降解,也被證明并得到了新的應(yīng)用[11]．在本文里,我們綜述了科學(xué)家們對(duì)GO保護(hù)核酸抵抗核酸酶降解的研究及在此研究基礎(chǔ)上展開(kāi)的一系列應(yīng)用[12]．1 GO對(duì)核酸的吸附、保護(hù)性能及機(jī)理探討圖1 熒光標(biāo)記的ssDNA用于核酸(A)[7]、蛋白質(zhì)(B)[13]及小分子(C)[14]的檢測(cè)原理Fig.1 Fluorophore-
- 科學(xué)家成功打造植物基因組“剪刀”
s系統(tǒng)是繼鋅指核酸酶（ZFNs）和TALEN核酸酶之后另一個(gè)可精確定點(diǎn)編輯基因組DNA的新技術(shù)。該系統(tǒng)利用短RNA序列引導(dǎo)Cas核酸酶在基因組上特定的位置進(jìn)行切割形成雙鏈斷裂，隨后利用植物自身的修復(fù)機(jī)制，引入隨機(jī)突變或?qū)胩囟ǖ腄NA序列，從而對(duì)基因組進(jìn)行突變、置換、插入等精確編輯，具有設(shè)計(jì)簡(jiǎn)單、快速等優(yōu)點(diǎn)。該系統(tǒng)首先被科學(xué)家在細(xì)菌抵抗噬菌體侵染的過(guò)程中被發(fā)現(xiàn)，隨后被科學(xué)家改造成基因組修飾工具，并在動(dòng)物細(xì)胞中成功實(shí)施，但由于植物的復(fù)雜性和遺傳轉(zhuǎn)化的高難度，
種業(yè)導(dǎo)刊 2014年2期2014-01-22
- 與人遺傳病相關(guān)的DNA重復(fù)序列的體外核小體定位特性
質(zhì)及摸索微球菌核酸酶酶切條件。然后用本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的含有上述人遺傳病相關(guān)重復(fù)序列的質(zhì)粒體外組裝染色質(zhì)與微球菌核酸酶酶切分析方法，在質(zhì)粒層次初步研究了重復(fù)序列核小體定位的特性，為該類(lèi)疾病機(jī)理的理解奠定了一定的基礎(chǔ)。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 試驗(yàn)菌株:大腸桿菌DH5α、質(zhì)粒pUC19、pBS-601 由本實(shí)驗(yàn)室保存。重組質(zhì)粒pUC(GAA)42、pUC(ATTCT)43和pUC(GCCT)18由本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建，在質(zhì)粒的多克隆位點(diǎn)分別含有重復(fù)序列(GAA
基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床 2013年3期2013-03-15
- 人工核酸酶用于基因組定點(diǎn)編輯的研究進(jìn)展
發(fā)展起來(lái)的人工核酸酶(engineered nucleases，EN)技術(shù)為此帶來(lái)了新的曙光，使研究者能夠?qū)Σ煌锓N和細(xì)胞中的幾乎所有基因進(jìn)行編輯［4］。本文對(duì)EN 的類(lèi)型、原理、應(yīng)用及存在的問(wèn)題等進(jìn)行綜述。1 利用EN 進(jìn)行基因組定點(diǎn)修飾的一般原理EN 進(jìn)行基因組定點(diǎn)修飾主要包括2 個(gè)步驟［5］:首先，設(shè)計(jì)并構(gòu)建EN，進(jìn)而在靶位切斷基因組DNA，形成雙鏈斷裂(double-strand break，DSB);其次，DNA 損傷激活DNA 修復(fù)通路，啟動(dòng)自
基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床 2013年12期2013-02-19
- 靈桿菌非特異性核酸酶的原核表達(dá)、純化及活性分析
，已有通過(guò)加入核酸酶去除蛋白樣品中核酸的研究實(shí)例。如商業(yè)化產(chǎn)品 Benzonase endonuclease、DNase和RNase A等，其中Benzonase endonuclease來(lái)源于靈桿菌。靈桿菌核酸酶 (Serratia marcescens nuclease，smNU) 是一種分泌至胞外的非特異性磷酸二酯酶，其在金屬陽(yáng)離子存在下可以高效切割任意形式的核酸 (DNA和RNA，雙鏈和單鏈)[1-5]，其催化效率是葡萄球菌核酸酶的4倍，牛胰DNa
生物工程學(xué)報(bào) 2011年8期2011-02-09
- DNA聚合酶Ⅰ的功能與結(jié)構(gòu)的發(fā)現(xiàn)
3′→5′外切核酸酶活性和5′→3′外切核酸酶活性。1969年，科恩伯格研究了各種各樣的DNA結(jié)構(gòu)與聚合酶的結(jié)合，提出了DNA聚合酶的活性中心模型，顯示了在這個(gè)活性中心內(nèi)的幾種活性位點(diǎn)，表示了錯(cuò)配堿基被外切核酸酶切除和DNA聚合酶的修復(fù)過(guò)程。同年，科恩伯格和他在斯坦福大學(xué)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)系的同事還用沉降平衡法確定了DNA聚合酶的相對(duì)分子量，并通過(guò)蛋白水解作用把DNA聚合酶剪切成兩個(gè)片段，較大的片段保持了聚合酶活性和3′→5′外切核酸酶活性，小片段包含了5′→
自然雜志 2011年6期2011-01-24
- 桔青霉發(fā)酵制備核酸酶P1研究進(jìn)展
桔青霉發(fā)酵制備核酸酶P1研究進(jìn)展喻 晨1，趙 劼2，張亞雄1，朱昌雄2，姚 鵑2，李知洪2（1.三峽大學(xué)生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北宜昌443002；2.安琪酵母股份有限公司，湖北宜昌443003）核酸酶P1是一種重要的工業(yè)酶制劑，可用于水解核酸生產(chǎn)5’-核苷酸。本文綜述了利用桔青霉發(fā)酵得到核酸酶P1的菌種選育、培養(yǎng)基優(yōu)化、發(fā)酵工藝控制、濃縮、相關(guān)應(yīng)用和國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)狀況。核酸酶P1，桔青霉，發(fā)酵法核酸酶P1（Nuclease P1），又名5′-磷酸二酯酶，其作用
食品工業(yè)科技 2010年11期2010-11-14
- 基于分子信標(biāo)和S1核酸酶檢測(cè)鋅離子的研究
利于普及。S1核酸酶是能夠特異性切割核酸單鏈的核酸酶，對(duì)鋅離子有很強(qiáng)的依賴性，基于此特性發(fā)展了一種基于分子信標(biāo)和S1核酸酶的鋅離子檢測(cè)新方法。該方法操作簡(jiǎn)便，不需要昂貴儀器，不涉及復(fù)雜的離子載體合成，對(duì)鋅離子的檢測(cè)下限為120 μmol/L。1 實(shí)驗(yàn)部分1.1 儀器和試劑F-4500熒光分光光度計(jì)(Hitachi，日本)；恒溫循環(huán)水浴(Amersham Biosciences公司，美國(guó))；超純水裝置（Elix3，Millipore，U.S.A）。分子信標(biāo)序
化學(xué)傳感器 2010年4期2010-03-23