潮霉素
- 杏鮑菇原生質體制備、再生及其遺傳轉化體系的建立
。同時，通過對潮霉素濃度篩選和轉化方式的優(yōu)化，建立穩(wěn)定有效的杏鮑菇原生質體的遺傳轉化體系，以期為杏鮑菇的菌種改良和優(yōu)良品種選育提供參考。1 材料與方法1.1 材料與試劑杏鮑菇菌株GIM5.344、質粒4：華南農業(yè)大學食品學院王杰教授課題組構建；溶壁酶1（≥200 U/mg）：廣東省微生物研究所；溶壁酶2（≥200 U/mg）：北京索萊寶科技有限公司；纖維素酶（≥200 U/mg）、甘露醇、聚乙二醇4000、氯化鈣、順丁烯二酸、順丁烯二酸二鈉、三羥甲基氨基甲
食品研究與開發(fā) 2023年21期2023-11-10
- 潮霉素B對擬南芥種子萌發(fā)及幼苗生長的影響
570228)潮霉素B(以下簡稱潮霉素)作為氨基糖苷類正糖霉素族Ⅱ類抗生素[1]的代表之一,被廣泛應用于生物學領域,常作為轉化的選擇劑[2],具有重要的應用價值和商業(yè)價值。潮霉素在20世紀50年代被發(fā)現,它主要通過靶向細菌中的30 S核糖體亞基[3]和真核細胞中的核糖體[4],從而阻礙蛋白質的合成[5],最終致使細胞逐漸褐化直至死亡[6]。潮霉素具有抑菌、殺蟲功能,可作為生物學研究過程中遺傳操作選擇劑[7],被廣泛應用于畜牧業(yè)和生物工程中。擬南芥(Arab
種子 2023年4期2023-06-19
- 海濱雀稗以hpt與bar基因為篩選標記的轉化體系比較研究
和hpt基因（潮霉素磷酸轉移酶，具有潮霉素抗性）的pCAMBIA1305.2和內含GUS和bar基因（膦絲菌素乙酰轉移酶基因，具有草丁膦抗性）的pCAMBIA3301；轉入根癌農桿菌（Agrobacterium tumefaciens）菌株AGL1中，作為農桿菌介導轉化的菌液。圖1 植物表達載體圖譜Fig.1 Map of plant expression vector1.3 不同類型的培養(yǎng)基在再生體系和遺傳轉化體系中，使用的培養(yǎng)基類型及配方見表1。如圖3
草業(yè)學報 2023年1期2023-02-07
- 農桿菌介導的山蒼子遺傳轉化體系的構建
長影響較小，而潮霉素能顯著殺死未轉化的植物細胞組織，大幅降低假陽性的產生，這兩種抗生素被廣泛應用于植物的遺傳轉化[20-22]。然而，如抗生素濃度使用過度，會影響愈傷組織的正常生長和分化，甚至造成已轉化成功愈傷組織的死亡，且不同植物對抗生素忍耐性不同[23]。因此，選擇合適的抗生素濃度能顯著提升遺傳轉化的效率。本研究以快繁的無菌組培苗為試驗材料，進一步優(yōu)化山蒼子組培再生過程，研究頭孢霉素和潮霉素對山蒼子再生的影響，初步建立山蒼子的遺傳轉化體系，為山蒼子種質
林業(yè)科學研究 2022年5期2022-10-12
- 寧夏枸杞潮霉素抗性濃度篩選研究
探索適合枸杞的潮霉素篩選劑量，為枸杞基因功能的研究、遺傳轉化提供參考。以寧夏枸杞無菌苗葉片為外植體，設置4個潮霉素濃度梯度，研究其對誘導愈傷組織和愈傷組織誘導分化芽的影響，以選出適合枸杞轉化體篩選的抗生素劑量。結果表明，隨著潮霉素濃度的升高，其對枸杞誘導愈傷組織和愈傷組織誘導芽分化的抑制作用加強。潮霉素濃度越高，枸杞葉片的出愈率越低，愈傷組織的褐化率越高，且葉片逐漸變黃、白化甚至死亡。將潮霉素作為抗性選擇標記時，抗性濃度以2 mg/L為最佳。關鍵詞：寧夏枸
農學學報 2022年4期2022-07-14
- 芍藥受體再生系統的建立
子葉；抗生素：潮霉素（Hygromycin）、慶大霉素（Gentamicin）、頭孢霉素、羧芐霉素。1.2 選擇抗生素的確定將芍藥試管苗的子葉接種于培養(yǎng)基MS+6-BA 1.0mg/L+GA30.5mg/L。將芍藥愈傷組織分成大小均勻小塊，接種于培養(yǎng)基MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 2.0mg/L。在以上2 種培養(yǎng)基中，分別添加不同濃度慶大霉素、潮霉素，觀察子葉不定芽生長情況和愈傷組織分化、褐化情況，確定遺傳轉化選擇壓和最佳轉化受體。1.3 抑菌抗
現代園藝 2022年7期2022-03-30
- 根癌農桿菌介導的新暗色柱節(jié)孢菌遺傳轉化
轉化法，將含有潮霉素抗性基因（hyg）和綠色熒光蛋白基因（mGFP）的雙元表達載體轉化到新暗色柱節(jié)孢菌中，并在陽性轉化子中檢測綠色熒光蛋白的表達，旨在為進一步研究新暗色柱節(jié)孢菌的菌絲生長過程、形態(tài)特征、致病菌與火龍果之間的互作致病機制等提供技術支撐。1 材料與方法1.1 菌株和質粒新暗色柱節(jié)孢菌是本實驗室從紅皮紅肉火龍果莖條分離鑒定并保存的。雙元表達載體pG-Hyg-GFP 是以pCAMBIA1300 為骨架，插入trpC啟動子、潮霉素抗性基因（hyg）和
熱帶生物學報 2021年4期2022-01-11
- 馬鈴薯品種‘并薯6號’遺傳轉化體系的建立
此載體上攜帶有潮霉素抗性基因Hyg（圖1），并由本課題組保存。圖1 pMDC85載體圖Figure 1 pMDC85 vector1.1.3 培養(yǎng)基及其成分目前，關于馬鈴薯愈傷組織誘導及再生所用的激素主要包括生長素類（IAA、NAA 和2,4-D）、細胞分裂素類（6-BA 和 ZT）以及 GA3等[15,16]。以已發(fā)表的研究報道為基礎，設計了以下的試驗。本試驗所用的基本培養(yǎng)基為MS（Murashige ＆ Skoog Medium），各種培養(yǎng)基的命名以及
中國馬鈴薯 2021年5期2021-12-21
- 農桿?菌介導葡萄灰葡萄孢遺傳轉化條件優(yōu)化
BIG3C（含潮霉素抗性基因）均由本實驗室保存。1.2 試驗方法1.2.1 灰葡萄孢分生孢子制備 將灰葡萄孢BcSD3菌株接種于PDA培養(yǎng)基上，參照李廷剛等［16］報道的方法進行誘導產孢；使用滅菌水洗脫分生孢子，并用三層滅菌濾紙過濾去除菌絲等雜質；離心收集分生孢子，并調節(jié)至適宜濃度，保存?zhèn)溆谩?.2.2 根癌農桿菌菌液制備 采用熱擊法將pBIG3C質粒轉入根癌農桿菌EHA105菌株中；篩選陽性菌斑接種于LB液體培養(yǎng)基（含50μg/mL卡那霉素）中，于28℃
山東農業(yè)科學 2021年10期2021-11-15
- Fonsecaea monophora聚酮合酶基因的CRISPR-Cas9敲除載體的構建
ophora于潮霉素B濃度為0、100、200、300、400 μg/mL的PDA抗性平板上劃線，25℃培養(yǎng)1周后，拍照觀察判斷是否抗性適用于篩選陽性轉化子。②構建含有潮霉素抗性的pFC334-AarⅠ載體：設計引物在gRNA骨架前插入兩個AarⅠ酶切位點(見表1)，pFC334質粒作為模板，分別擴增相對應的兩個片段(1號和2號片段)，PCR條件：98℃ 10 s，55℃ 10 s，72℃ 1 kb/min，30 cycles。切膠回收純化后融合成一個片段
中國真菌學雜志 2021年5期2021-11-01
- 農桿菌介導的栓皮櫟體胚遺傳轉化初步研究
tII基因編碼潮霉素磷酸轉移酶，轉移到植物細胞后可賦予對潮霉素的抗性，用于抗性組織的篩選[9]。在櫟類樹種中，Vidal等以Quercus robur的葉片誘導的體胚作為農桿菌介導的轉化受體，成功實現植株再生[10]。álvarez等建立了成齡歐洲栓皮櫟（Quercus suber）的遺傳轉化系統，獲得了43%的轉化率[11]。而栓皮櫟的遺傳轉化研究較少。本研究以栓皮櫟體細胞胚胎發(fā)生為受體系統，研究影響農桿菌介導遺傳轉化的關鍵因素，為利用基因工程對栓皮櫟進
西南林業(yè)大學學報 2021年5期2021-10-21
- 抗生素對刺芹側耳菌絲生長的影響
、頭孢噻肟鈉、潮霉素等抗生素的敏感性是運用該技術的關鍵，而且選擇合適的篩選標記基因以及抗生素濃度對提高轉化效率都具有很大的影響。在此背景下，筆者擬在根癌農桿菌介導的刺芹側耳的遺傳轉化研究中，對常用抗生素對刺芹側耳菌絲生長的影響進行研究和探索，以期為進一步建立并優(yōu)化根癌農桿菌介導的刺芹側耳的遺傳轉化體系提供理論基礎?，F將相關試驗結果報道如下。1 材料與方法1.1 供試菌株和試劑供試菌株為刺芹側耳“國森一號”菌絲體，保藏于上海市農業(yè)科學院食用菌研究所。供試抗生
上海農業(yè)科技 2021年2期2021-04-09
- 雞爪槭金陵丹楓組培再生體系的建立
對羧芐青霉素和潮霉素的敏感性，篩選獲得羧芐青霉素的臨界值為300～400mg/L，潮霉素的臨界值為2.5mg/L。關鍵詞：金陵丹楓;再生體系;羧芐青霉素;潮霉素中圖分類號：S792.350.5文獻標志碼：A文章編號：1002-1302（2021）01-0054-05作者簡介：朱璐（1987—），女，山東淄博人，博士，助理研究員，研究方向為雞爪槭遺傳育種。E-mail：luzhu@jaas.ac.cn。通信作者：李倩中，研究員，研究方向為槭樹新品種選育及種質
江蘇農業(yè)科學 2021年1期2021-03-15
- 根癌農桿菌介導的少孢節(jié)叢孢菌遺傳轉化體系研究
ma公司產品；潮霉素，Roche公司產品；其他化學試劑均為國產分析純；LB培養(yǎng)基、PDA培養(yǎng)基、基礎培養(yǎng)基(MM)、誘導培養(yǎng)基(IM)及共培養(yǎng)基(CM)按照常規(guī)方法制備。1.1.3 主要儀器設備 恒溫搖床(ZHWY-2102C)，PCR儀(TC4000)，真菌培養(yǎng)箱(MJX280)，恒溫培養(yǎng)箱(HIQ-X100)，振蕩培養(yǎng)箱(ZHWY-2102C)，常規(guī)離心機(Beckmanmicrofuge16)，瓊脂糖水平電泳儀(DYCP-31DN)，凝膠成像儀(Bi
動物醫(yī)學進展 2021年2期2021-02-07
- GFP標記的4種鏈格孢菌對棗樹的侵染研究
試劑和培養(yǎng)基：潮霉素B、卡那霉素、利福平、氨芐青霉素、鏈霉素的濃度分別為10、50、20、100、100 mg·mL-1，乙酰丁香酮（AS） 0.2 mg·mL-1；以IM 為培養(yǎng)基[28]，以LB 為液體培養(yǎng)基[29]。供試植物：棗樹，栽培于河北農業(yè)大學苗圃。1.2 方 法1.2.1 4 種鏈格孢菌對潮霉素B 的敏感性的測定采用生長速率法分別測定供試的4 種鏈格孢菌對潮霉素B 的敏感性。分別將ZN01、ZN02、ZN03 和ZN-XR 這4 種鏈格孢菌置
經濟林研究 2020年2期2020-07-01
- 小球藻的沼液馴化、抗生素敏感性分析和選擇標記篩選
、氨芐青霉素、潮霉素的敏感性，篩選小球藻基因工程選擇標記的抗生素。1 實驗1.1 水樣、試劑與儀器按GB/T 1.1-2009方法采集石家莊民心河、邢臺小黃河、衡水鹽河、保定府河、邯鄲沁河的夏季(6月)水樣。DNA提取試劑盒、膠回收試劑盒，OMEGA BIO-TEK公司；G418、氨芐青霉素、潮霉素，索萊寶公司。自動細胞計數儀，Countstar公司；GeneAmp?9700型PCR儀；DYY-6D型電泳槽，北京六一儀器廠；UV752N型紫外可見分光光度計
化學與生物工程 2020年4期2020-05-08
- 黃梁木遺傳轉化受體系統對篩選物敏感性研究
物的卡那霉素和潮霉素，以及抑菌劑頭孢霉素，在對篩選物較敏感的誘導不定芽分化和生根階段，進行敏感性試驗，為后續(xù)黃梁木遺傳轉化研究特別是為提高黃梁木耐寒、抗蟲的轉基因研究奠定基礎。1 材料和方法1.1 試驗材料、農桿菌株和試劑飽滿成熟的黃梁木種子，來源于廣西藥用植物園本草綱目園區(qū)內一株20 a 樹齡的健康植株。在超凈臺上將種子滅菌，轉移到無激素的MS固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，25 d 后，切取無菌植株的子葉和胚軸作為不定芽分化誘導材料；生根誘導材料則將無菌植株莖的下部
四川農業(yè)大學學報 2020年1期2020-03-19
- 大群體轉基因大麥后代快速篩選研究
摘要：以攜帶有潮霉素標記基因的RNAi轉基因大麥和常規(guī)大麥為材料，采用葉片涂抹法進行了潮霉素篩選濃度確定及轉基因大麥T2代和回交后代的篩選和PCR檢測。結果表明，3 000 mg/L潮霉素連續(xù)涂抹3次，5 d后轉基因大麥涂抹區(qū)域無受害癥狀，生長受害率顯著低于無涂抹處理。潮霉素涂抹檢測結果與其PCR檢驗結果的符合度為96.2%，目的基因篩選準確率可達61.8%。表明所建立的活體幼苗潮霉素葉片涂抹法篩選轉基因大麥快速，直觀、準確，具有一定可行性。關鍵詞：轉基因
甘肅農業(yè)科技 2019年8期2019-09-10
- 超高效液相色譜-串聯質譜法同時測定動物肌肉組織中6種氨基糖苷類藥物殘留
素、壯觀霉素和潮霉素B等6種氨基糖苷類藥物。該方法操作簡便，能大幅縮短檢測周期，靈敏度高，還能有效避免七氟丁酸等離子對試劑造成的儀器污染及離子抑制等問題，為動物源性食品中氨基糖苷類藥物監(jiān)控提供快速、準確可靠的定性和定量技術。1 材料與方法1.1 儀器與試劑1.1.1 儀器Aglient 1290超高效液相色譜儀、配有電噴霧（ESI）離子源的AB Sciex Triple Quad TM 5500質譜儀（美國AB Sciex公司）、N-EVAP-24型全自動
飼料博覽 2019年5期2019-06-01
- 擬輪枝鐮孢ATMT突變體庫的構建及分析
和擬輪枝鐮孢對潮霉素B（hygromycin B）的敏感濃度；以含有綠色熒光蛋白基因（）、潮霉素抗性基因（）的穿梭質粒為載體，通過ATMT構建GFP標記的擬輪枝鐮孢突變體庫；利用潮霉素抗性篩選、的特異性引物進行PCR檢測和熒光顯微鏡觀察，檢測分析T-DNA插入情況及轉化子穩(wěn)定性；從突變體庫中隨機挑選9個轉化子菌株并進行分析，對其產孢量、分生孢子萌發(fā)率、致病力等進行測定?！窘Y果】通過農桿菌抑菌試驗發(fā)現當Cefo/Amp的濃度為150/150 μg·mL-1時
中國農業(yè)科學 2019年8期2019-05-08
- 齒毛菌原生質體的制備與轉化
株為研究對象，潮霉素B抗性基因Hyg作篩選標記，探究影響齒毛菌原生質體制備及再生的多個重要因素，建立PEG介導的原生質體遺傳轉化體系，以獲得穩(wěn)定遺傳的轉化菌株.1 材料與方法1.1 材料齒毛菌Cerrenasp.HYB07菌株，由福建省海洋酶工程重點實驗室保藏； pCAMBIA1302質粒，該質粒攜帶有潮霉素B磷酸轉移酶基因(hygromycin B phosphotransferase,Hyg)和綠色熒光蛋白(green fluorescent prot
福州大學學報（自然科學版） 2019年1期2019-01-24
- 虎杖基因PcMYB1真核表達載體構建及遺傳轉化
n,Kan)，潮霉素(hygromycin,hyg)、PCR產物純化試劑盒、膠回收試劑盒、質粒提取試劑盒等均購于寶生物大連有限公司，所用引物和測序服務均由武漢生物工程技術服務有限公司完成。1.2 方法1.2.1PcMYB1基因植物表達載體構建以含有35S啟動子的P5002質粒為模板，以含有目的基因PcMYB1的1K-5質粒為模板，設計特異引物經PCR分別擴增虎杖PcMYB1的基因片段與35S啟動子片段，回收純化后分別將其克隆至pUC19的BamHⅠ/Pst
長江大學學報(自科版) 2018年22期2018-12-03
- 靈芝轉化體系的建立
6靈芝原生質體潮霉素抗性篩選對靈芝原生質體再生培養(yǎng)基中的潮霉素抗性濃度進行篩選，分別選取濃度值為15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80 mg/mL的潮霉素放入固體MYG培養(yǎng)基中，將制備好的原生質體均勻地平鋪到MYG培養(yǎng)基中，5～7 d后觀察原生質體再生結果。1.7PEG介導的靈芝原生質體轉化靈芝原生質體制備參照試驗前期得到的最優(yōu)靈芝原生質體制備方法進行[14]。取1×106個靈芝原生質體，放入MYG 液體培養(yǎng)基中
安徽農業(yè)科學 2018年26期2018-09-19
- 斜紋夜蛾SlSCP-2真核表達載體的構建及對膽固醇的吸收
3組.1.5 潮霉素B篩選濃度確定在轉染前對CHO細胞進行劑量反應分析，以確定潮霉素B的最適濃度.細胞對潮霉素B敏感性的測定分別用0，50，100，250，500，750和1000 mg/L 7個不同濃度梯度的Hygromycin B處理相同數目但密度小于25%的CHO細胞，重復3組，每隔24 h觀察記錄細胞生長狀況，直到120 h(約第5天)，收集細胞，用臺盼藍染色法統計3組細胞的死亡率，以殺死所有細胞的潮霉素B最低濃度(500 mg/L)為篩選濃度.2
信陽師范學院學報（自然科學版） 2018年3期2018-08-10
- 小分子海洋抗菌肽鱟素Ⅰ里氏木霉表達系統構建
、氨芐青霉素和潮霉素，均購自Sigma公司；NotⅠ、SfiⅠ酶和X-gal，均購自TaKaRa公司。1.2 方法1.2.1 天然鱟素基因(Tac)序列的人工合成 從GenBank中獲得鱟素Ⅰ的堿基序列，根據絲狀真菌里氏木霉偏愛密碼子優(yōu)化其序列：在其5′端和3′端分別加上NotⅠ和SfiⅠ酶酶切位點，并補齊宿主中信號肽的部分序列，設計目的基因序列如下：5′-GGCCTTCTTGGCCACAGCTCGTGCTAAGTGGTGCTT-CCGCGTCTGCTAC
江蘇農業(yè)科學 2018年14期2018-08-08
- CRISPR/Cas9技術編輯新疆甜瓜全緣葉基因
的表達載體帶有潮霉素抗性基因，因此，需要對甜瓜耐受潮霉素的最大濃度進行檢測，為下一步的實驗打下基礎。在植物的遺傳轉化中，抗潮霉素基因是最常用的標記基因之一，由于HPT基因(潮霉素磷酸轉移酶基因)片段較小，約只有1.1 kb左右,其很容易與沒有選擇標記的目的片段結合并導入植物基因組[18]。其毒性機理是通過干擾植物細胞葉綠體和線粒體中的核糖體與延長因子EF-2的結合，從而對肽鏈的延長進行抑制。當潮霉素抗性基因轉化到植株中時，它使轉化后的細胞或組織具有對潮霉素
新疆農業(yè)科學 2018年2期2018-04-17
- Vasorin基因穩(wěn)定敲除HepG2細胞株的建立及其生物學功能研究
/Cas9，將潮霉素B的抗性基因插入VASN基因，從而破壞了VASN的讀框，使VASN蛋白的表達發(fā)生異常；然后再利用潮霉素B抗性篩選獲得穩(wěn)定敲除VASN的HepG2細胞株；進而，利用穩(wěn)定敲除VASN的HepG2細胞株研究VASN的生物學功能和分子機制。1 材料和方法1.1 材料HepG2細胞由本室保存；表達載體pCas-guide和pSilencer2.1-U6hygro由軍事醫(yī)學研究院鄭曉飛教授惠贈；pBackZero-T載體、平末端PCR產物加A試劑盒
生物技術通訊 2018年2期2018-04-09
- 杉木遺傳轉化中抗生素種類和濃度的篩選
為材料，探討了潮霉素、卡那霉素和頭孢霉素對其生長的影響以及對農桿菌GV3101的抑菌效果。【結果】潮霉素濃度為40 mg/L和60 mg/L時，杉木嫩芽和莖段培養(yǎng)42 d存活率分別為8.78%、13.97%和7.05%、5.93%，表現出良好的效果；80 mg/L時，其生長完全被抑制?？敲顾貪舛葹?00 mg/L時，杉木嫩芽和莖段在80 d時存活率仍高達75.04%和80.37%。300 mg/L的抗生素抑菌劑頭孢霉素能有效抑制農桿菌GV3101生長，且
四川農業(yè)大學學報 2017年2期2018-01-06
- LoxP-Cre重組技術在構建馬鈴薯光呼吸代謝支路中的應用
農桿菌侵染以及潮霉素篩選，獲得了馬鈴薯轉化植株。分子檢測表明，轉基因植株中3個目的基因在mRNA水平均能得到表達，但在蛋白水平無表達。轉基因植株在表型和微型薯的發(fā)育上與野生型植株無明顯區(qū)別，可能原因是由于多基因一次性轉化與葉綠體定位的雙重要求，增加了馬鈴薯遺傳轉化及蛋白有效表達的難度。馬鈴薯；多基因轉化；光呼吸在C3植物中，通過構建光呼吸代謝支路以增加碳同化效率，從而提高生物量，這些支路包括Kebeish支路[1]、Maier支路[2]和Carvalho支
長江大學學報(自科版) 2017年18期2017-11-13
- 土壤中盾殼霉雙標記平板計數法的建立及應用
菌轉化法構建了潮霉素基因和綠色熒光蛋白基因標記的雙標記盾殼霉菌株,并測定轉化子的生長速度、產孢量和菌核致腐能力,初步分析了該方法計數土壤盾殼霉的有效性和可行性。結果顯示,潮霉素基因和綠色熒光蛋白基因可以穩(wěn)定地遺傳和表達,并且部分轉化子生長速度、產孢量和菌核致腐能力與出發(fā)盾殼霉菌株JN-CM沒有顯著差異。加入土壤中的盾殼霉轉化子可以在含潮霉素(50 μg/mL)、氯霉素(100 μg/mL)和鏈霉素(100 μg/mL)的PDA平板培養(yǎng),雜菌得到充分抑制,呈
植物保護 2017年5期2017-10-09
- 中華結縷草對潮霉素的敏感性研究
)中華結縷草對潮霉素的敏感性研究劉建華1,裴福云1,宋鳳鳴1,雷江麗2*(1.廣東省深圳市鐵漢生態(tài)環(huán)境股份有限公司,廣東 深圳 518040;2.廣東省深圳市中科院仙湖植物園/廣東省深圳市南亞熱帶植物多樣性重點實驗室,廣東 深圳 518004)研究了中華結縷草3種不同外植體對不同濃度潮霉素溶液的敏感性。結果表明:中華結縷草不同外植體對潮霉素的敏感性存在差異，其中種子經50 mg/L潮霉素處理3周后,發(fā)芽率極顯著減少,只有6%;愈傷組織經20 mg/L潮霉素
江西農業(yè)學報 2017年9期2017-09-12
- 浮萍遺傳轉化體系的建立和優(yōu)化*
入抑菌抗生素和潮霉素，再生培養(yǎng)基是在文獻8中的再生培養(yǎng)基中加入抑菌抗生素和潮霉素。1.2.2浮萍轉化體系的優(yōu)化使用不同種類的農桿菌（農桿堿型 EHA105、胭脂堿型 GV3101和C58C1）對浮萍進行侵染，統計侵染3 d后浮萍愈傷的GUS瞬時表達率確定哪種農桿菌對浮萍的侵染效率最高。采 用 0、50 μmol/L、100 μmol/L、150 μmol/L、200 μmol/L的乙酰丁香酮侵染同一批浮萍愈傷，統計侵染3 d后浮萍愈傷組織的GUS瞬時表達率
生物學通報 2017年1期2017-04-09
- AtDES1基因在大白菜中的遺傳轉化
mg·L-1的潮霉素作為抗性芽和根的抗生素篩選濃度，轉化效率較高，轉化率為6%。[結論]抗性植株經PCR和qRT-PCR鑒定表明DES1基因已成功整合到大白菜基因組中且表達量有不同程度的提高。大白菜； 硫化氫； 轉化； 轉基因植株大白菜(BrassicacampestrisL.ssp.pekinensi)屬于十字花科蕓薹屬，是北方秋冬季主要的蔬菜作物。但近年來由于環(huán)境的污染，白菜種植遭受到重金屬、干旱和冷凍等多種逆境脅迫的影響，給大白菜生產造成很大損失。運
山西農業(yè)大學學報（自然科學版） 2017年3期2017-03-28
- Botryosphaeria dothidea突變體庫的構建及分析
blot證明潮霉素B抗性基因整合到B.dothidea基因組中且可穩(wěn)定遺傳。以B.dothideasdau11-126為對照，對526株轉化子的菌落形態(tài)、生長速率和致病性進行分析，篩選獲得了8個變異明顯且穩(wěn)定的突變體，以期為B.dothidea致病基因的分離、克隆和功能鑒定奠定基礎。Botryosphaeria dothidea;農桿菌介導轉化（ATMT）;突變體;篩選Botryosphaeria dothidea屬子囊菌門，葡萄座腔菌屬，是引致林果潰瘍
山東農業(yè)大學學報（自然科學版） 2017年1期2017-03-17
- 金花茶花絲愈傷組織培養(yǎng)及其對抗生素敏感性研究
究了卡那霉素和潮霉素對愈傷組織誘導和增殖培養(yǎng)的影響，為下一步開展金花茶轉基因研究提供技術參考。1 材料與方法1.1 試驗材料供試金花茶種植于廣東省農科院環(huán)境園藝研究所山茶種質資源圃。1.2 試驗方法1.2.1 外植體表面消毒 試驗于2015年1月開始進行，摘取剛剛金花茶露黃、但尚未開放的幼嫩花蕾，在超凈工作臺上用70%乙醇分別浸泡1、3、5、10、15 min，然后用滅菌水沖洗 3次，用刀片剝掉花瓣和萼片，取出雄蕊，將花絲和花藥分別接種到誘導培養(yǎng)基上，25
廣東農業(yè)科學 2017年11期2017-03-10
- 潮霉素B預混劑的臨床驅蟲試驗研究
318000)潮霉素B預混劑的臨床驅蟲試驗研究費陳忠1，蘇世廣2，李貴玉3，許月英2，吳昊1，范超1，肖文龍1，薛飛群1*(1. 中國農業(yè)科學院上海獸醫(yī)研究所，上海 200241；2. 安徽省農業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所，合肥 230031； 3. 浙江海正藥業(yè)有限公司，臺州 318000)為了解潮霉素B預混劑臨床驅除絳蟲線蟲的有效性和給藥時間的合理性，依據獸藥臨床試驗規(guī)范，試驗選擇了蠕蟲自然感染皖西麻黃雞824只，按要求隨機分為3組，分別為潮霉素B預混劑治療
中國獸藥雜志 2017年1期2017-02-15
- 菟絲子生防菌“魯保一號”生物學特性及T-DNA插入突變體庫的構建
繼代6次培養(yǎng)后潮霉素B抗性穩(wěn)定，隨機挑取的20個轉化子均能PCR克隆出潮霉素基因，轉化子是由T-DNA插入引起的，且篩選抗性能夠穩(wěn)定遺傳。以上研究為后期篩選獲得致病力穩(wěn)定的遺傳改良菌株，并進一步應用奠定了基礎。魯保一號；炭疽菌；生物學特性；突變體菟絲子(Cuscutachinensis)是一類惡性寄生雜草[1]，其纖細的莖蔓纏繞在植物的莖稈上，借吸根從植物體內汲取營養(yǎng)物質，主要危害大豆(Glycinemax)、牧草和蔬菜等作物[2-4]。“魯保一號”是山東
草業(yè)學報 2017年1期2017-02-15
- 平菇疏水蛋白Po.hyd基因RNAi載體構建及轉化
，該轉化子具有潮霉素抗性，且在熒光顯微鏡下可檢測到綠色熒光信號，Po.hyd基因的表達量為野生型的43%，干擾載體T-DNA片段以單拷貝的形式整合在轉化子基因組內。糙皮側耳；疏水蛋白；RNAi；根癌農桿菌介導疏水蛋白（hydrophobin）是表面活性最高的蛋白之一，具有可在臨界面形成兩性親和蛋白膜的特殊性質，在食品生產及保藏領域具有廣闊的應用前景[1-2]。2009年Cox等[3]將里氏木霉（Trichoderma reesei）的Ⅱ型疏水蛋白HFBⅡ加
食品科學 2016年11期2016-11-12
- 不同抗生素對金發(fā)草愈傷組織生長分化的影響
類(卡那霉素、潮霉素、頭孢噻呋鈉和氨芐青霉素)和濃度對金發(fā)草愈傷組織生長分化的影響，來確定適用于金發(fā)草遺傳轉化體系中的抗性篩選劑和抑菌劑。結果表明：(1)金發(fā)草愈傷組織對卡那霉素很敏感，且其分化率隨著卡那霉素濃度的增加顯著減少(P=0.01)。當卡那霉素濃度為10 mg·L-1時，金發(fā)草愈傷組織的生長分化受到明顯抑制，且有大量的白化苗形成，但分化率仍有36.56%；當卡那霉素濃度為15 mg·L-1時，金發(fā)草愈傷組織的分化率為11.94%，只有很少部分的愈
廣西植物 2016年10期2016-11-11
- dGFP-GUS基因標記新疆棉花黃萎病原菌的研究
【方法】以帶有潮霉素抗性篩選基因的PUCCATPH載體以及pCAMBIA1304載體作為骨架，構建trpc啟動子驅動的GFP-GUS基因的新疆棉花黃萎病菌表達載體1304-P-ORF，導入農桿菌GV3101和AGL-1中。通過農桿菌介導(ATMT)法分別轉入新疆棉花黃萎病原菌VD-1和VD-278中，對表達效果進行檢測?！窘Y果】篩選的潮霉素B濃度為30 μg/mL，農桿菌AGL-1對黃萎病菌的轉化效率比GV3101高40%。T0代經含有潮霉素B的PDA培養(yǎng)
新疆農業(yè)科學 2016年1期2016-04-13
- PEG-CaCl2介導牛樟芝遺傳轉化體系的構建
l2濃度。利用潮霉素抗性、綠色熒光蛋白(Green Fluorescent Protein，GFP)標記和PCR擴增驗證擬轉化子。結果表明：新鮮的牛樟芝菌絲體在10 mg/mL溶壁酶溶液中，30℃條件下酶解4 h，原生質體的獲得率為3.55×105個/mL；菌絲體和原生質體在潮霉素B濃度分別為60 μg/mL和40 μg/mL時不能生長，最終確定篩選擬轉化子的潮霉素B濃度為60 μg/mL；濃度為20%～40%的PEG均可介導牛樟芝原生質體轉化，且40%的
貴州農業(yè)科學 2016年4期2016-03-01
- 慢病毒介導穩(wěn)定表達miR-183的人卵巢癌skov3細胞系
，經嘌呤霉素、潮霉素B篩選后獲得穩(wěn)轉細胞系，最后用RT-PCR法檢測miR-183在轉錄水平的表達。結果分離培養(yǎng)出穩(wěn)定高表達和低表達 mirR-183的單克隆細胞株。結論實驗成功建立了穩(wěn)定表達miR-183的 skov3細胞系，為研究miR-183的生物學功能提供了有效的細胞模型。關鍵詞：慢病毒；skov3細胞； miR-183；卵巢瘤作者單位：河南科技大學第一附屬醫(yī)院，河南洛陽 471003卵巢癌是女性生殖道常見的惡性腫瘤之一，由于其發(fā)病十分隱匿，大多數
食管疾病 2015年4期2016-01-20
- 羽衣甘藍下胚軸農桿菌介導遺傳轉化體系的優(yōu)化
化和生根過程中潮霉素B篩選壓力，最后對抗性植株進行了潮霉素B篩選基因的PCR檢測。結果表明，在MS + 6-BA 5.0 mg/L+AgNO39.0 mg/L培養(yǎng)基中不定芽分化率最高，為84.17%；農桿菌侵染濃度OD600值為0.5、侵染5 min時利于遺傳轉化，分化率為69.17%；不定芽分化和生根過程中潮霉素B篩選壓力分別為4.0 mg/L和30.0 mg/L；潮霉素B篩選基因的PCR鑒定結果，在預期的602 bp處出現了條帶，初步證明潮霉素B篩選基
生物技術通報 2015年6期2015-10-27
- RNA干擾技術對犬小孢子菌PQ-LRP基因沉默的研究
克隆位點,引入潮霉素抗性基因,先后構建PUC-PLULT、PCB309-PLULT載體。應用實時PCR方法檢測PCB309-PLULT載體對犬小孢子菌PQ-LRP基因表達的干擾作用。結果構建了中間載體PUC-PLUT、PUC-PLULT,并通過PCR、基因測序進行鑒定。成功構建了長為8 825 bp的干擾載體PCB309-PLULT,并通過酶切測定為該目的載體;篩選出犬小孢子菌轉化子的潮霉素最佳濃度為300 mg/L;用實時定量PCR方法對犬小孢子菌PQ-
中華皮膚科雜志 2014年8期2014-12-18
- 不同濃度卡那霉素、潮霉素對楸樹試管苗生長的影響
隆[7-8]。潮霉素是一種常用的抗性篩選藥物，其抗性基因表達產物是一種蛋白激酶，通過磷酸化潮霉素使其喪失活性。由于在真核和原核生物中潮霉素篩選假陽性率低，重復性好，現在通過潮霉素對轉基因生物進行篩選已被廣泛應用[9-12]。卡那霉素和潮霉素是目前遺傳轉化體系廣泛應用的2 種抗生素。我們進行了卡那霉素和潮霉素對楸樹無性系試管苗生長的影響研究，以確定抗生素對楸樹莖段分化和生根的敏感質量濃度，建立有效的遺傳轉化體系，為楸樹特性良種的選育與轉化提供重要理論和實踐指
生物技術通訊 2014年6期2014-11-29
- 秈稻R996轉Pi9基因純系的篩選及稻瘟病抗性鑒定
因植株后代進行潮霉素抗性、GUS染色和PCR檢測分析，鑒定出Pi9基因陽性轉化子；經稻瘟病抗性鑒定，從T1代符合孟德爾分離比(1∶2∶1)的分離群體中，成功篩選出轉Pi9基因的秈稻R996純系。秈稻R996；Pi9基因；轉基因植株；稻瘟病抗性1 材料和方法1.1 材 料R996轉 Pi9基因植株；含 Pi9基因植株75–1–127；稻瘟病菌生理小種110–2。1.2 方 法1.2.1 潮霉素抗性篩選選擇 T1代符合孟德爾分離比(1∶2∶1)的轉基因植株，經
湖南農業(yè)大學學報（自然科學版） 2014年6期2014-08-31
- 根癌農桿菌介導的虎杖莖尖轉化研究
8 mg/L 潮霉素的培養(yǎng)基上誘導不定芽。利用該體系從 300 塊莖尖外植體中共轉化獲得 15株抗性再生植株，經 PCR 和 Southern 雜交檢測，有 6 株虎杖的基因組中已整合進了目的基因?；⒄?莖尖 根癌農桿菌 遺傳轉化虎杖（Polygonum cuspidatumSieb. et Zucc.）是蓼科多年生草本植物，根或根莖入藥?；⒄雀泻写罅烤哂兄委熜в玫拇渭壌x物，如白藜蘆醇、虎杖苷、蒽醌類等。其中白藜蘆醇具有抗腫瘤、抗衰老、保護心血管系統
生物技術通報 2014年2期2014-04-08
- 根癌農桿菌介導的赭曲霉遺傳轉化體系的建立
為受體菌株，以潮霉素B基因作為篩選標記，成功建立了根癌農桿菌介導的赭曲霉遺傳轉化體系并對其轉化效率的主要影響因素，如農桿菌濃度、孢子濃度、共培養(yǎng)時間和溫度等進行了分析。在最佳條件下，轉化效率可以達到57個轉化子/108個分生孢子。隨機挑選的8個陽性轉化子10代連續(xù)培養(yǎng)結果表明所獲得的轉化子能穩(wěn)定遺傳。該遺傳轉化體系的建立為赭曲霉菌株的定向遺傳改造提供了重要的操作平臺。赭曲霉 根癌農桿菌 轉化體系赭曲霉（Aspergillus ochraceus），屬于殼霉
生物技術通報 2014年6期2014-03-17
- 向日葵下胚軸遺傳轉化影響因素的研究
計1.2.1 潮霉素適宜篩選濃度試驗將3個向日葵品種的下胚軸作為外植體，接種到含潮霉素分別為0、5、10、15、20mg／L的誘導培養(yǎng)基上培養(yǎng)，每一梯度每一品種接種外植體數10，各4次重復。2～3周后調查下胚軸的分化情況。1.2.2 影響農桿菌轉化因素試驗實驗中設置共培養(yǎng)時間、侵染時間、農桿菌菌液濃度和干燥時間4個因子試驗，共培養(yǎng)時間設置5個處理 （1、2、3、4、5d）；侵染時間設5個梯度 （1、5、10、15、20min）；農桿菌菌液濃度A600值分別
河北北方學院學報（自然科學版） 2013年1期2013-10-22
- 根癌農桿菌介導甘蔗遺傳轉化Bt（cry1Ab）基因
y1Ab，攜帶潮霉素磷酸轉移酶基因（Hpt），以玉米的Ubi-1為啟動子。1.1.3 試劑 卡那霉素（Kan）、利福平（Rif）、羧芐青霉素（Car）、乙酰丁香酮（AS）和潮霉素（Hyg）均為Sigma公司產品，Taq DNA聚合酶、dNTP為上海生工產品，聚乙烯吡咯烷酮（PVP）及其它試劑為國產分析純。1.1.4 培養(yǎng)基 甘蔗植株再生及遺傳轉化各個階段的最佳培養(yǎng)基，見表1。表1 甘蔗再生體系建立及遺傳轉化培養(yǎng)基的組成1.2 方法1.2.1 胚性愈傷的誘導
生物技術通報 2013年2期2013-09-13
- 甘藍枯萎病菌REMI轉化體系的建立
將線性化的含有潮霉素抗性基因的pUCATPH質粒轉化甘藍枯萎病菌A6菌株的原生質體，摸索獲得轉化子最適的潮霉素篩選濃度以及不同限制性內切酶和酶量對轉化效率的影響；利用PCR（polymerase chain reaction）技術對潮霉素抗性轉化子進行驗證。結果表明轉化子的最適潮霉素篩選濃度為50μg／mL；轉化效率較高的限制性內切酶為HindⅢ，并且轉化效率最高時的酶量為20U。利用該轉化體系構建了含1 050個轉化子的甘藍枯萎病菌轉化子庫，對轉化子進行
植物保護 2013年3期2013-08-27
- PEG介導的玉米彎孢葉斑病菌遺傳轉化
化供體，它具有潮霉素抗性基因（HyB）標記和氨芐青霉素抗性基因（Amp）標記，有HindⅢ等多種限制酶的單酶切位點。1.2 培養(yǎng)基及緩沖液1.2.1 菌絲培養(yǎng)基馬鈴薯200g，葡萄糖20g，酵母膏15g。1.2.2 原生質固體再生培養(yǎng)基NaNO32g，K2HPO41g，KCl 52g，MgSO4·7H2O 0.05g，FeSO4·7H2O 10mg，蔗糖20g，瓊脂18g。1.2.3 酶解緩沖液pH 5.6檸檬酸－磷酸氫二鈉緩沖液配制的0.7mol／L K
植物保護 2012年6期2012-09-28
- 穩(wěn)定表達熒光素酶的nm23-H1表達缺失人肺腺癌細胞株的構建及其體內外活性檢測
細胞株中，利用潮霉素B篩選出能穩(wěn)定表達熒光素酶的細胞株A549/nm23-H1-shRNA-luc。借助活體成像技術，對構建的細胞株進行體內外生物發(fā)光檢測，為后續(xù)轉移相關的動物試驗的研究奠定好基礎。1 材料與方法1.1 材料 nm23-H1表達缺失的人肺腺癌細胞株A549（A549/nm23-H1-shRNA）由本實驗室構建；細胞培養(yǎng)基是RPMI-1640（GIBCO）并添加10%的小牛血清（NCS, GIBCO）；質粒表達載體（PGL4.50）購自Pro
中國肺癌雜志 2012年3期2012-09-10
- 轉基因及常規(guī)水稻穗期對潮霉素的敏感性
314016)潮霉素B是一種氨基糖苷類抗生素，可破壞細胞中核糖體的功能。水稻中潮霉素通過單鍵細胞葉綠體和線粒體中的核糖體與延長因子EF-2的結合位點，從而抑制肽鏈的延長，破壞細胞功能，使敏感組織褐化死亡而呈現毒性癥狀。潮霉素磷酸轉移酶基因(hpt)導入水稻后，使細胞具有了潮霉素磷酸轉移酶(HPT)活性，從而可忍耐較高濃度的潮霉素毒性，因此，在水稻轉基因育種中，hpt基因已成為最有效的選擇基因之一。先期通過農桿菌介導法轉育的Bt克螟稻都攜帶潮霉素抗性基因Hy
浙江農業(yè)科學 2012年3期2012-07-31
- 導入抗逆基因的轉雙抗蟲基因741楊的獲得1)
因，篩選標記為潮霉素磷酸轉移酶基因(hpt)。1.2 外植體不定芽再生體系的優(yōu)化選取生長良好、健壯的繼代培養(yǎng)試管苗，用解剖刀剪取葉片，在葉片一側垂直主脈剪1個傷口，然后將其接種于附加不同質量濃度 6－BA(0.1、0.5、1.0、1.5 mg/L)和 IBA(0.05、0.10、0.20 mg/L)的 MS 培養(yǎng)基中，接種時葉正面朝上放置，下表皮與培養(yǎng)基接觸。每種培養(yǎng)基接種40個葉片(4個培養(yǎng)皿，每個培養(yǎng)皿接種10塊片)，培養(yǎng)溫度(25±2)℃，光照強度2
東北林業(yè)大學學報 2012年1期2012-06-13
- 玉米彎孢葉斑病菌ATMT轉化條件優(yōu)化及轉GFP單孢的獲得
［9］，并含有潮霉素B(HyB)和卡那霉素(kan)抗性，由 Marina Franceschetti(john inner Center，UK)惠贈。1．2 主要試劑潮霉素B、頭孢噻肟鈉、卡那霉素、乙酰丁香酮、MES購自北京鼎國生物技術有限責任公司;其他所用試劑均購于北京萬鑫化業(yè)商貿中心。1．3 方法1．3．1 頭孢噻肟鈉對農桿菌抑菌濃度的測定 將農桿菌接種于LB液體培養(yǎng)基中，37℃搖培至OD600約為0．6后，取100 μL分別涂于含有頭孢噻肟鈉 (0
河北科技師范學院學報 2011年3期2011-10-10
- 一株玉米彎孢葉斑病菌生長緩慢型突變株獲得及T-DNA右翼序列分析
μg·mL-1潮霉素的5 mL LB液體培養(yǎng)基中，28℃下震蕩培養(yǎng)至對數生長期，得到OD660=0.6的農桿菌菌液；然后取農桿菌菌液250μL，加到新鮮的5 mL LB液體培養(yǎng)基中，28℃下振蕩培養(yǎng)過夜至對數生長期，然后在液體IM培養(yǎng)基上誘導培養(yǎng)6 h，將農桿菌菌液濃度調至OD660=0.2備用。取誘導后的農桿菌菌液與萌發(fā)分生孢子懸浮液等體積混合，涂布于IM（10 mM glucose）固體培養(yǎng)基的玻璃紙上，在黑暗條件下培養(yǎng)數小時，然后將IM固體培養(yǎng)基上的
黑龍江八一農墾大學學報 2011年3期2011-03-13
- 潮霉素A的生物合成研究進展
253023)潮霉素A是一種天然的抗生素，1953年第一次從吸水鏈霉菌NRRL 2388的發(fā)酵產物中被分離得到［1］，由5-脫氫-α-L-巖藻糖、(E-3-(3，4-二羥苯基)-2-甲基丙烯酸和2L-2-氨基-2-脫氧-4，5-O-亞甲基肌醇3個結構單元組成。早期的研究顯示，潮霉素A具有廣泛的生物學活性，如抗菌活性［2］(G+、G－)、抗紅細胞凝聚活性和抗密螺旋體活性［3］及免疫抑制活性［4］等。進一步的研究表明，潮霉素A抗菌作用機理為其通過與核糖體50S
微生物學雜志 2011年2期2011-01-11
- 農桿菌介導的甜瓜蔓枯病菌遺傳轉化體系的建立
。本研究以攜帶潮霉素 B磷酸轉移酶基因(hph) 的pBIG2RHPH2作為轉化載體，根癌農桿菌C58C1作為轉化介體，轉化甜瓜蔓枯病菌的強致病菌株DB11。研究發(fā)現，甜瓜蔓枯病菌的最優(yōu)轉化體系為：甜瓜蔓枯病菌的分生孢子懸浮液濃度為1×106個孢子/mL，農桿菌懸浮液OD600為0.15，共培養(yǎng)時間48 h，誘導培養(yǎng)基中添加200 μg/mL乙酰丁香酮，選擇培養(yǎng)基添加100 μg/mL潮霉素B、200 μg/mL頭孢噻肟鈉、200 μg/mL氨芐青霉素和2
生物工程學報 2010年6期2010-10-11
- 甘蔗遺傳轉化中不同階段潮霉素抗性篩選
因，其選擇試劑潮霉素B（Hygromycin B，簡稱Hyg）與卡那霉素一樣，是一種氨基糖苷類抗生素（Gritz and Davis，1983），它來源于鏈球菌（Streptomyces hygroscopicus），Linda等（1983）從大腸桿菌中克隆出hpt，轉化到大腸桿菌和酵母菌中，得到了潮霉素抗性轉化子[7]。從1989年開始hpt基因成為主要的篩選標記基因，其編碼的潮霉素磷酸轉移酶可將磷酸基團共價地加到Hyg的第4位上，通過酶促磷酸化作用而使
中國糖料 2010年2期2010-09-10