雙向電泳
- 萬壽菊不定根發(fā)生中全蛋白雙向電泳體系構建※
行了改善，對雙向電泳的上樣量、等電聚焦參數(shù)及分離膠濃度等條件進行了優(yōu)化，得到適于萬壽菊全蛋白分析的提取方法和雙向電泳技術體系。1 材料與方法1.1 試驗材料試驗所用萬壽菊種子為泛美奇跡系列黃色，2021年2月購自蘭州市甘肅新時代園林工程公司。參考Liao等[5]的方法，將萬壽菊種子進行消毒，萌發(fā)5 d?？刂坪铆h(huán)境因子，萌發(fā)期間培養(yǎng)箱溫度為（25±1）℃，每天光照14 h，光強為200 μmol/（s·m2）。培養(yǎng) 5 d 后的萬壽菊幼苗，在下胚軸基部切去乳
特種經(jīng)濟動植物 2022年9期2022-09-16
- 雙向電泳分離水稻葉片蛋白實驗教學的探索
要] 采用雙向電泳法分離水稻葉片蛋白，比較和分析了考馬斯亮藍染色方法和硝酸銀染色方法對掃描得到的雙向電泳圖譜的影響。通過改進水稻葉片蛋白的雙向電泳分離方法，可以得到更清晰的雙向電泳圖譜。結果表明，改進后的硝酸銀染色方法靈敏度更高，分離蛋白點更多且清晰。由此可知，改進的實驗方法可以得到更為靈敏、清晰的雙向電泳圖譜，能更好地適應和促進雙向電泳分離水稻葉片蛋白的實驗教學工作。[關鍵詞] 實驗教學;改進;雙向電泳;葉片蛋白;水稻[基金項目] 2018年度揚州大學
教育教學論壇 2021年51期2021-03-21
- 雙向電泳分離水稻葉片蛋白實驗教學的改進
稻葉片蛋白的雙向電泳分離方法，采用雙向電泳法分離水稻葉片蛋白，比較和分析了兩種上樣量對實驗的影響。改進的上樣量靈敏度高，分離條帶多且清晰，表明改進的實驗方法可以得到更為靈敏、清晰的圖譜，能更好地適應和促進實驗教學工作。[關鍵詞] 實驗教學;改進;雙向電泳;葉片[中圖分類號] Q503? ? ?[文獻標識碼] A? ? [文章編號] 1674-9324（2020）41-0383-02? ? [收稿日期] 2020-04-02目前，雙向電泳技術是研究蛋白組學十
教育教學論壇 2020年41期2020-11-02
- 潮間帶大型海藻小珊瑚藻蛋白質(zhì)提取方法及雙向電泳體系優(yōu)化
：小珊瑚藻;雙向電泳;蛋白質(zhì);提取方法蛋白質(zhì)組學是以細胞內(nèi)存在的全部蛋白質(zhì)及其活動規(guī)律為研究對象，是繼基因組學之后在分子水平上了解生命過程邏輯性的第2步，是后基因組時代生命科學研究的核心內(nèi)容之一。蛋白質(zhì)組學研究技術主要包括雙向電泳技術、質(zhì)譜分析技術和生物信息學技術等，其中，雙向電泳技術是目前蛋白質(zhì)組學研究的有效技術[1-2]。與陸地高等植物相比，有關海洋藻類的蛋白質(zhì)組學研究相對滯后，但近年來該方面的研究日益興起。程華民等探討了2種不同方法提取珊瑚總蛋白質(zhì)的
江蘇農(nóng)業(yè)科學 2020年9期2020-06-21
- 楊樹葉片蛋白質(zhì)雙向電泳圖譜的建立
的技術之一是雙向電泳(two-dimensional electrophoresis，2-DE)[12],雙向電泳技術與質(zhì)譜技術相結合，已成為蛋白質(zhì)組學中分離蛋白質(zhì)的有效方法[13]。雙向電泳技術已經(jīng)被廣泛應用于植物的蛋白質(zhì)組學研究中，如Romeo等[14]通過雙向電泳技術分析意大利楊根部響應鋅脅迫的關鍵因素，Liu等[15]利用雙向電泳技術分析了毛果楊早期莖從初生生長到次生生長的蛋白質(zhì)組學的變化。盡管雙向電泳體系優(yōu)化已有廣泛研究，但由于植物的生物學特性、
林業(yè)科學研究 2020年2期2020-04-21
- 茶樹葉片蛋白雙向電泳體系建立與應用
[2]。蛋白雙向電泳體系因其準確度、靈敏度和可重復性較好，對于不同物種逆境脅迫下差異蛋白的篩選和分析具有重要意義。因此，蛋白雙向電泳體系作為基礎，其建立及優(yōu)化一直備受關注[1,3—5]。茶樹Camellia sinensis 為山茶科山茶屬多年生常綠經(jīng)濟作物，喜溫暖濕潤氣候。近年來，春季的“霜凍”和“倒春寒”低溫災害及夏秋季的高溫、干旱和強光等災害，顯著降低了茶葉的產(chǎn)量和品質(zhì)[6—7]。利用2-DE 技術開展低溫、干旱等逆境脅迫下差異蛋白分析，可為深入研究
亞熱帶植物科學 2019年3期2019-10-16
- 適用于雙向電泳分析的鏈格孢菌體蛋白提取方法的篩選
出一套適用于雙向電泳分析的鏈格孢菌蛋白的提取方法，以該菌為研究材料，首先采用TCA丙酮法、磷酸TCA丙酮法、SDS提取法和TCA/丙酮SDS/酚抽提法分別提取菌絲蛋白質(zhì)，然后進行蛋白質(zhì)濃度的測定和單向SDSPAGE試驗，并建立雙向電泳體系。結果表明：TCA/丙酮SDS/酚抽提法所獲得的蛋白質(zhì)濃度為15.9 mg/mL，分別是其他三種方法所得蛋白濃度的2.64、4.61和1.43倍;SDSPAGE圖譜中形成的條帶數(shù)目最多、豐度最好;所獲得的2DE圖譜背景清晰
植物保護 2019年3期2019-06-27
- 藍莓休眠花芽蛋白質(zhì)雙向電泳體系的建立和優(yōu)化
眠花芽蛋白質(zhì)雙向電泳體系的建立和優(yōu)化呂晨菲，王茂思，黃唯子，楊靜慧通信作者，劉艷軍，黃俊軒（天津農(nóng)學院 園藝園林學院，天津 300384）為建立適合藍莓花芽的蛋白質(zhì)雙向電泳技術體系，以天津市薊州區(qū)主栽藍莓品種‘布里吉塔’休眠花芽為試材，采用TCA/丙酮法提取藍莓休眠花芽蛋白質(zhì)，選擇5種蛋白質(zhì)上樣量（2.00、2.25、2.50、2.75、3.00 mg）、2種聚焦電壓（8 000、10 000 V）、3種聚焦時間（6、7、8 h）進行雙向電泳，R-250考
天津農(nóng)學院學報 2019年4期2019-04-08
- 2種預處理對玉米組織全蛋白質(zhì)雙向電泳圖譜的影響
[2]創(chuàng)立的雙向電泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)是蛋白質(zhì)組學研究的核心技術之一，已廣泛應用于植物、動物、微生物等蛋白質(zhì)組學的研究。雙向電泳技術步驟較復雜，有很多因素如上樣量、聚焦時間、pH膠條的選擇、樣品的制備等，均會影響雙向電泳圖譜的效果[2]，其中樣品的制備尤為關鍵，因為植物組織富含的蛋白酶、色素、酚類、多糖、脂類等物質(zhì)均會嚴重干擾蛋白質(zhì)的提取、分離，導致雙向電泳的結果不清晰、拖帶，而且重復性得不到保證。
河南農(nóng)業(yè)科學 2018年2期2018-04-08
- 苦瓜種子蛋白質(zhì)組雙向電泳技術條件的優(yōu)化
種子蛋白質(zhì)組雙向電泳技術條件的優(yōu)化黃玉輝1,2，黃如葵1,2，梁家作1，黃熊娟1，馮誠誠1,2，陳小鳳1，劉杏連1，秦健1 (1.廣西農(nóng)業(yè)科學院蔬菜研究所， 南寧 530007； 2.廣西作物遺傳改良生物技術重點實驗室， 南寧 530007)通過對苦瓜種子蛋白質(zhì)樣品的提取方法、等電聚焦參數(shù)、SDS-PAGE分離膠濃度以及膠條pH范圍的優(yōu)化篩選，建立了適合苦瓜種子蛋白組分析的雙向電泳體系。結果表明：使用TCA-丙酮提取方法提取苦瓜種子蛋白，更適用于雙向電泳分
種子 2017年10期2017-12-01
- 雙向電泳中不同樣品裂解液對水稻葉片疏水蛋白溶解效果比較
佳。關鍵詞：雙向電泳；裂解液；疏水蛋白；溶解效果中圖分類號： S188；S511.01 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2017）18-0054-02收稿日期：2017-3-23基金項目：國家自然科學基金（編號：31271622）；揚州大學科技創(chuàng)新培育基金（編號：2016CXJ087）。作者簡介：王 琳（1978—），女，江蘇徐州人，博士，講師，主要從事植物生理和生化研究。E-mail：wanglin@yzu.edu.cn。通信作者：梁建生
江蘇農(nóng)業(yè)科學 2017年18期2017-11-18
- 甜菜雙向電泳體系條件的優(yōu)化
080)甜菜雙向電泳體系條件的優(yōu)化張 輝1，2，白 晨2，王華忠3，張惠忠2，李曉東2，付增娟2，趙尚敏2，鄂圓圓2，張自強2，王 良2(1.中國農(nóng)業(yè)科學院，北京 100081；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010031；3.中國農(nóng)業(yè)科學院 甜菜研究所，黑龍江 哈爾濱 150080)為了獲得甜菜葉片雙向電泳中蛋白質(zhì)最佳提取方法，建立甜菜葉片蛋白質(zhì)雙向電泳最佳的雙向電泳體系。以甜菜葉片為材料，通過比較分析，研究甜菜葉片總蛋白提取方法、IPG
華北農(nóng)學報 2017年5期2017-11-04
- 近紅外成像用于雙向電泳前的蛋白質(zhì)快速定量
63000)雙向電泳技術(2D)是蛋白組學研究過程中的常用技術，而蛋白質(zhì)樣品的準確定量是做好雙向電泳的前提條件。常用的蛋白質(zhì)定量方法有Bradford法和二辛可寧酸(BCA)法，兩者都是通過測定樣品吸光度值進行蛋白質(zhì)的定量。但是由于雙向電泳蛋白質(zhì)樣品在制備過程中會不可避免的引入硫脲、尿素、SDS、NP-40、Triton X-100等試劑，這些試劑易與Bradford法中的考馬斯亮藍(CBB)和BCA法中的二辛可寧酸反應顯色而影響蛋白質(zhì)定量的準確性。因此，
分析科學學報 2017年4期2017-10-15
- 福建柏葉片全蛋白3種提取方法的比較
對福建柏蛋白雙向電泳結果的影響。[結果]TCA/丙酮法制備的蛋白點數(shù)較少，為285個，蛋白質(zhì)在制備過程中流失較多；酚提法得到的蛋白點最多，為1 226個，蛋白點較清晰但pH中端部分有輕微的蛋白堆積；TCA/酚提結合法得到了813個蛋白點，蛋白點較清晰，無明顯的蛋白堆積現(xiàn)象。[結論]在福建柏蛋白質(zhì)組學研究中，酚提法更適于福建柏全蛋白的制備，且酚提法明顯優(yōu)于TCA/酚提結合法。關鍵詞 福建柏；全蛋白；蛋白提??；雙向電泳中圖分類號 S312 文獻標識碼 A 文章
安徽農(nóng)業(yè)科學 2017年1期2017-07-10
- 微囊藻受短時超聲波脅迫蛋白表達差異研究
蛋白質(zhì)，應用雙向電泳技術對微囊藻短時超聲波處理蛋白質(zhì)表達進行分析，結果表明，71個蛋白質(zhì)點上調(diào)，56個蛋白質(zhì)點下調(diào)，54個新增蛋白質(zhì)點，21個消失蛋白質(zhì)點。對其中8個差異大的蛋白質(zhì)點采用MALDA-TOF-MS進行質(zhì)譜分析，并經(jīng)數(shù)據(jù)庫搜索匹配，鑒定出2個未知蛋白、6個功能蛋白。這些功能蛋白參與抗氧化和抗炎癥、磷酸鹽合成、電子傳遞等生理過程，實現(xiàn)微囊藻在短時超聲波脅迫下的代謝平衡和自我保護。關鍵詞：微囊藻；短時超聲波；蛋白表達；雙向電泳中圖分類號：X703
湖北農(nóng)業(yè)科學 2017年7期2017-05-13
- 一種適于本科實驗教學的雙向電泳技術體系
科實驗教學的雙向電泳技術體系趙玉紅a, 李 欣a, 崔建林b, 周 浩a, 李登文a,李小菊a, 張金紅a, 趙立青a(南開大學 a. 生物實驗教學中心; b. 醫(yī)學院， 天津 300071)雙向電泳技術是當前蛋白質(zhì)組學研究中的重要技術。設計“雙向電泳檢測熱休克處理對細菌蛋白表達譜的影響”的實驗，以PGEX-4T-2大腸桿菌中可溶性總蛋白為研究對象, 采用雙向電泳技術篩選熱休克處理后有差異表達的蛋白。實驗獲得了穩(wěn)定性較高、分辨率和重復性較好的電泳圖譜，建立
實驗室研究與探索 2017年1期2017-04-10
- 大頭典竹葉片蛋白質(zhì)組學雙向電泳技術體系的優(yōu)化
典竹蛋白組學雙向電泳的優(yōu)化體系。方法：對大頭典竹蛋白提取方法、膠條的水化運行方式、等電聚焦（IEF）程序的設置、蛋白上樣量等步驟進行優(yōu)化。結果：大頭典竹的蛋白斑點主要分布在pH5～8的范圍；三氯乙酸-丙酮法與酚抽結合法更適合大頭典竹蛋白的提取；IPG膠條膠面向上、被動水化方式、蛋白上樣量為50μL，效果更好。結論：通過建立雙向電泳（2-DE）的優(yōu)化體系，獲得的蛋白點均勻、清晰、橫縱條紋少的凝膠圖譜，提高了分辨率，為大頭典竹差異蛋白組學研究奠定了基礎。關鍵詞
安徽農(nóng)學通報 2017年5期2017-04-06
- γ—分泌酶抑制劑對體外培養(yǎng)的糖尿病大鼠血管平滑肌細胞Notch信號通路相關蛋白表達的影響
細胞，分別用雙向電泳方法和Western blot法檢測Notch1、Notch3、Notch4、Jagged-1、Jagged-2、DLL4蛋白的表達。 結果 ①雙向電泳圖譜證實提取的蛋白中含有目的蛋白。②Western blot檢測結果顯示：隨DAPT濃度的增加，Nocth1、Nocth3、Nocth4、Jagged-1、Jagged-2、DLL4各蛋白的表達均遞減；7.50 μmol/L組與對con組比較，差異有高度統(tǒng)計學意義（P < 0.01）；0
中國醫(yī)藥導報 2017年6期2017-04-06
- 鵝掌楸愈傷蛋白質(zhì)組的樣品比較
PAGE）和雙向電泳分析。SDS-PAGE圖譜顯示：裂解液-Clean-up、裂解液-TCA/丙酮法分離高分子量蛋白質(zhì)條帶相對于Mg/NP-40-TCA/丙酮、TCA/丙酮法少；Mg/NP-40-TCA/丙酮法和裂解液-Clean up法低分子量提取、分離效果較差。在SDS-PAGE基礎上對Mg/NP-40-TCA/丙酮、TCA/丙酮法提取蛋白質(zhì)樣品進行雙向電泳，結果表明：TCA/丙酮法得到的凝膠圖蛋白質(zhì)點分布均勻、背景清晰且縱橫條紋較少，且TCA/丙酮法
江蘇農(nóng)業(yè)科學 2016年12期2017-04-05
- 硫化氫對水稻幼苗葉片中蛋白質(zhì)表達譜的影響
長發(fā)育。應用雙向電泳技術（2-DE）分析了水稻幼苗葉片經(jīng)不同濃度的H2S處理后蛋白質(zhì)表達譜的變化，并獲得29個表達豐度差異2倍以上的蛋白質(zhì)。鑒定的差異蛋白質(zhì)主要涉及到光合作用 （43%），能量代謝 （9%），氧化還原平衡 （13%），蛋白質(zhì)合成、折疊、加工與降解 （19%），信號轉(zhuǎn)導 （3%）等。gene ontology（GO）分析發(fā)現(xiàn)，受硫化氫調(diào)控的差異，蛋白主要參與光合作用、防御和非生物脅迫應答等過程。表明不同濃度的硫化氫在調(diào)控水稻幼苗的形態(tài)變化方面
江蘇農(nóng)業(yè)科學 2016年11期2017-03-21
- 不同生長年限園參根的雙向電泳分析
學變化，利用雙向電泳技術分離1～5年園參根蛋白，重點分析園參根生長（3年）、成熟（5年）之間的蛋白質(zhì)組學差異，并利用MALDI-TOF/TOF鑒定差異顯著的81個蛋白點。結果表明：有19個差異蛋白點在成熟期表達量下調(diào)，62個蛋白點表達量上調(diào)，針對其與園參根生長發(fā)育的潛在關系進行分類與討論；園參根在逐漸成熟的過程中與抗脅迫相關的過氧化氫酶、單脫氫抗壞血酸還原酶等，以及與能量代謝相關的ATP酶、甘油醛-3-磷酸脫氫酶等表達量增加，而與生長相關的果膠酯酶表達量減
江蘇農(nóng)業(yè)科學 2016年10期2017-02-05
- 肺炎支原體雙向電泳條件的探索
)肺炎支原體雙向電泳條件的探索胡 璇1，苑 鑫1*，柏長青1*,牛文凱1，袁 靜2，馮羽中1，李璞媛1，劉慧瑩1(1.軍事醫(yī)學科學院附屬醫(yī)院 呼吸與危重癥醫(yī)學科，北京100071；2.軍事醫(yī)學科學院疾病預防控制所，北京100071)目的 建立適用于肺炎支原體(mycoplasmapneumoniae,MP)的雙向電泳技術。方法 對雙向電泳實驗中的三個關鍵因素：全蛋白提取量、固相PH梯度膠條范圍、蛋白上樣量進行摸索，比較和分析標準株FH電泳圖譜，利用液相色譜
中國實驗診斷學 2016年12期2017-01-06
- 小麥穗突變體 Sda1與其野生型葉片總蛋白雙向電泳體系的建立
型葉片總蛋白雙向電泳體系的建立周麗敏，馬文潔，武炳瑾，張德強，楊智全，孫道杰(西北農(nóng)林科技大學農(nóng)學院，陜西楊凌 712100)為探索適合小麥穗突變體 Sda1葉片蛋白的雙向電泳體系，尋找Sda1與其野生型葉片的差異蛋白，以Sda1與其野生型的抽穗期葉片為材料，從蛋白質(zhì)提取、雙向電泳條件等方面對適合 Sda1及其野生型葉片蛋白的雙向電泳體系進行探索。分析試驗得到的雙向電泳圖譜，發(fā)現(xiàn)利用TCA/丙酮提取葉片總蛋白，用pH 4～7的17 cm線性膠條，采用13%
麥類作物學報 2016年12期2016-12-30
- 桉樹無性系葉片蛋白質(zhì)組雙向電泳體系優(yōu)化
葉片蛋白質(zhì)組雙向電泳體系優(yōu)化馬松亞1，蔣維昕1，2，屈林豐1，曹雪寧1，譚 玲1，楊 梅1，2（1. 廣西大學 林學院 ，廣西 南寧 530004；2. 廣西林業(yè)科學與工程高校重點實驗室，廣西 南寧 530004）為了建立適用于桉樹葉片蛋白質(zhì)組研究的雙向電泳體系，以尾葉桉Eucalyptus urophyllas廣林4號無性系作為試驗材料，對蛋白質(zhì)樣品獲取方法、雙向電泳等電聚焦膠條pH范圍、蛋白質(zhì)上樣量、膠條平衡條件以及染色方法進行了優(yōu)化。結果表明：提取液
中南林業(yè)科技大學學報 2016年4期2016-12-21
- 血水草根蛋白質(zhì)組學研究
白質(zhì)組學； 雙向電泳； 質(zhì)譜中圖分類號 Q51 文獻標識碼 A 文章編號 1000-2537（2016）05-0022-05Abstract To analyze the protein expression in Eomecon chionantha Hance roots with the proteomics approach， all proteins were extracted and separated by two-dimensional
湖南師范大學學報·自然科學版 2016年5期2016-12-10
- 沙漠小球藻的蛋白雙向電泳分析
小球藻的蛋白雙向電泳分析牟云，汪文倫，嚴國，王會敏，高劍峰*(石河子大學 生命科學學院，新疆石河子 832000)為建立適用于小球藻(Chlorellasp. TLD6B)蛋白質(zhì)組分析的雙向電泳體系，該研究比較了TCA/丙酮沉淀法和Trisol提取法對小球藻蛋白的提取效果，不同pH梯度IPG膠條(pH3～10和 pH4～7)、不同蛋白質(zhì)上樣量、不同聚焦程序?qū)π∏蛟宓鞍椎姆蛛x效果。結果表明：(1)采用Trisol提取法可獲得較高純度蛋白，當選擇24 cm p
西北植物學報 2016年9期2016-11-04
- 野生一粒小麥根干旱響應蛋白的篩選與鑒定
蛋白質(zhì)組學；雙向電泳作為世界主要糧食作物之一，小麥的生產(chǎn)很容易受到全球氣候變化與水分虧缺環(huán)境的影響[1]。干旱是導致農(nóng)作物減產(chǎn)最主要的非生物逆境脅迫因子[2]，而全球氣候變暖，更加深了干旱對農(nóng)作物產(chǎn)量的影響[3]。因此，有必要從分子水平揭示小麥響應干旱脅迫的機制，為干旱耐受新品種的培育提供理論依據(jù)和技術指導。植物配備有復雜而精細的響應機制以適應干旱缺水環(huán)境，這種復雜的響應機制是由植物感應干旱脅迫信號引起的轉(zhuǎn)錄翻譯機制而起始，繼而導致解剖結構、生理生化狀態(tài)的
麥類作物學報 2016年6期2016-07-29
- 不同濃度鉛脅迫對向日葵幼苗蛋白質(zhì)結構和表達的影響
光譜分析法和雙向電泳法探討向日葵試材HA89的幼苗在不同濃度(0,400,800 mg/L)鉛脅迫條件下蛋白質(zhì)水平發(fā)生的變化。結果表明:向日葵幼苗根、莖、葉的蛋白質(zhì)二級結構中的β-折疊結構和無規(guī)則卷曲結構對鉛脅迫最為敏感,同時,根據(jù)1 655 cm-1/1 637 cm-1比值可看出向日葵幼苗蛋白在鉛脅迫濃度為400 mg/L時蛋白質(zhì)二級結構較為穩(wěn)定,超過這一濃度到800 mg/L時,蛋白二級結構則趨于松散;試驗采用Tris酚提取法提取試驗材料全蛋白,經(jīng)雙
華北農(nóng)學報 2016年2期2016-06-03
- 蛋白質(zhì)組學技術及其在工業(yè)微生物研究中的應用
蛋白質(zhì)組學；雙向電泳；質(zhì)譜；微生物育種蛋白質(zhì)組學是基于蛋白質(zhì)分離、質(zhì)譜鑒定的一門新興學科，是從細胞、組織或生物體整體角度來研究蛋白質(zhì)組成及變化，從蛋白質(zhì)水平解析代謝過程及其調(diào)控機制。蛋白質(zhì)組學研究不僅彌補了傳統(tǒng)方法對單個蛋白質(zhì)研究的局限性，而且其研究結果是對基因組學、轉(zhuǎn)錄組學的補充和驗證，它比基因組學和轉(zhuǎn)錄組學更能夠代表生物體真實的生命活動規(guī)律。早期蛋白質(zhì)組學應用于微生物代謝途徑及其調(diào)控機制的研究大多集中于病源性微生物的致病機理和耐藥機理的解析。隨著工業(yè)微
發(fā)酵科技通訊 2016年2期2016-06-02
- 茭白線粒體蛋白雙向電泳體系建立
白質(zhì)組分析的雙向電泳技術體系，為進一步開展茭白線粒體差異蛋白質(zhì)組學研究提供參考?！痉椒ā恳攒诪樵囼灢牧希容^不同線粒體提取純化方法、IPG膠條pH范圍及蛋白上樣量等條件對雙向電泳圖譜的影響?！窘Y果】差速離心（3000～14000×g）聯(lián)合Percoll不連續(xù)密度梯度離心（20%∶24%∶40%=2∶4∶2）對茭白線粒體的提取純化效果優(yōu)于僅采用差速離心。采用改良酚抽法提取茭白線粒體蛋白，17 cm、pH 3～10的IPG膠條，1.0 mg上樣量，12% S
南方農(nóng)業(yè)學報 2016年3期2016-05-30
- 小麥L699葉片受白粉菌脅迫后蛋白質(zhì)的差異表達
，采用蛋白質(zhì)雙向電泳和質(zhì)譜技術(MALDI-TOF-MS)檢測小麥葉片接種白粉菌 24 h后的差異蛋白。結果表明，經(jīng)PDQuest軟件分析，接種白粉菌后小麥葉片中有18個蛋白質(zhì)斑點表達量上調(diào)，38個蛋白質(zhì)斑點表達量下調(diào)。對表達量上調(diào)的蛋白質(zhì)斑點進行質(zhì)譜分析和數(shù)據(jù)庫檢索，共鑒定出15種蛋白質(zhì)，其中13種參與防御反應、碳水化合物代謝和蛋白質(zhì)周轉(zhuǎn)。這些差異蛋白與抗病途徑、植株生理過程密切相關，在小麥抗白粉病過程中起很重要的作用。關鍵詞：小麥；白粉菌； Pm40；
麥類作物學報 2016年4期2016-05-27
- 金釵石斛花芽蛋白質(zhì)提取及其雙向電泳體系優(yōu)化
白質(zhì)提取及其雙向電泳體系優(yōu)化葉婕， 尹麗梅， 葉慶生*(華南師范大學生命科學學院，廣東省植物發(fā)育生物工程重點實驗室，廣州 510631)摘要：通過對蛋白質(zhì)提取方法、水化方式、等點聚焦程序、IPG膠條選擇等方面的優(yōu)化，建立金釵石斛花芽蛋白質(zhì)雙向電泳體系.結果表明，采用酚抽提法提取蛋白，樣品與水化液1∶40復溶；被動水化，等點聚焦程序B2；選用24 cm pH 3～10NL 膠條和12% 的凝膠；采用考馬斯亮藍G-250染色，獲得了可識別1 422個蛋白質(zhì)斑點
華南師范大學學報（自然科學版） 2016年2期2016-05-25
- 廣藿香葉片總蛋白雙向電泳體系的建立
葉片總蛋白質(zhì)雙向電泳條件進行了優(yōu)化，利用MALDI-TOF-TOF和Swiss-Prot軟件對部分蛋白點進行質(zhì)譜鑒定。結果表明：使用TCA/丙酮法提取廣藿香葉片總蛋白，在10萬Vhs聚焦強度下，可獲得高分辨率雙向電泳圖譜，BPP酚抽法獲得的蛋白不適用于雙向電泳分析；經(jīng)質(zhì)譜成功鑒定了9個蛋白點，鑒定成功率90%。關鍵詞： 廣藿香；葉片；雙向電泳；蛋白質(zhì)提取中圖分類號： S567.23+9.01 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2016）03-
江蘇農(nóng)業(yè)科學 2016年3期2016-05-03
- 蜂蜜蛋白提取以及雙向電泳技術分析蜂蜜蛋白條件優(yōu)化
蛋白提取以及雙向電泳技術分析蜂蜜蛋白條件優(yōu)化周莉質(zhì)1，2，宗 凱1，呂俠影1，余曉峰1*，姚 劍1(1.安徽出入境檢驗檢疫局，安徽合肥 230022；2.安徽農(nóng)業(yè)大學，安徽合肥 230036)摘要[目的]研究蜂蜜中蛋白質(zhì)提取的有效方法，優(yōu)化蜂蜜蛋白電泳條件。[方法]該試驗使用丙酮、鎢酸鈉、硫酸銨、尿素-硫脲4種方法提取蜂蜜中的蛋白并進行比較，然后進行雙向電泳分析，對影響雙向蛋白電泳的IPG膠條的選擇、蛋白質(zhì)上樣量、等電聚焦時間等主要因素進行優(yōu)化。[結果]試
安徽農(nóng)業(yè)科學 2016年3期2016-03-16
- 污染脅迫下的蚯蚓蛋白質(zhì)組學研究進展
蛋白質(zhì)組學；雙向電泳土壤污染是一個環(huán)境污染的世界性問題，我國在這方面也日益突出。2014年調(diào)查結果顯示，部分地區(qū)土壤污染較重，耕地土壤環(huán)境質(zhì)量堪憂，工礦業(yè)廢棄地土壤環(huán)境問題突出，全國土壤總的點位超標率為16.1%，其中重度污染點位比例為1.1%。另外，種植活動中農(nóng)藥和養(yǎng)殖業(yè)中抗生素的使用，也使得土壤生態(tài)環(huán)境受到前所未有的巨大壓力。人們更多地關注如何快速、靈敏地監(jiān)測土壤環(huán)境的受污染程度。在土壤系統(tǒng)中，蚯蚓是最大的無脊椎動物，對分解活動、養(yǎng)分礦化和初級生產(chǎn)有著
生態(tài)學報 2016年1期2016-03-10
- 基于正交試驗的向日葵種子蛋白雙向電泳技術的研究
2］。蛋白質(zhì)雙向電泳技術，是一種檢測和分析蛋白質(zhì)的生化手段，是目前唯一能將數(shù)千種蛋白質(zhì)同時分離與展示的分離技術［3］，但探究出一套能夠分離不同種植物種子間的差異蛋白的雙向電泳體系，仍是當今需要解決的難題。本實驗通過正交設計，對影響向日葵蛋白質(zhì)雙向電泳技術中的3個關鍵因素進行了探討，以期為今后向日葵蛋白質(zhì)組學的研究奠定基礎，也為其它油類植物蛋白質(zhì)組學的研究提供新思路。1 實驗材料與方法1.1 實驗材料實驗材料為天津農(nóng)學院農(nóng)業(yè)分析測試中心保存干燥的向日葵種子。
種子 2016年1期2016-01-15
- 甜椒果實總蛋白質(zhì)雙向電泳優(yōu)化體系的建立
果實總蛋白質(zhì)雙向電泳優(yōu)化體系的建立蔣林惠，姜麗，徐銀，許昕，郁志芳*（南京農(nóng)業(yè)大學食品科技學院，江蘇南京210095）以甜椒果實“紅方”為實驗材料，對其果實總蛋白制備方法、蛋白提取液的pH、總蛋白的上樣量、IPG膠條的pH范圍及等電聚焦程序進行條件優(yōu)化，建立了適用于甜椒果實總蛋白分析的雙向電泳體系。結果表明，采用提取液為pH7.8的酚提法制備的甜椒果實總蛋白、17cm pH5～8的IPG膠條、上樣1200μg進行66000VH等電聚焦和垂直凝膠電泳，經(jīng)過考
食品工業(yè)科技 2015年4期2015-12-20
- 低溫脅迫下桂蕉6號幼苗葉片差異蛋白表達研究
；低溫脅迫；雙向電泳；差異蛋白中圖分類號 S188 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2015）20-032-03Abstract [Objective] To research differences in protein expression of Guijiao No.6 seedling leaves. [Method] TCA/acetone method and phenol extraction method were both
安徽農(nóng)業(yè)科學 2015年20期2015-10-21
- 不同細胞破碎方法對肉牛、牦牛背最長肌
蛋白質(zhì)提取和雙向電泳圖譜效果的最佳方法進行研究。在相同裂解液組成、等電聚焦程序、十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰氨凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electropheresis，SDS-PAGE）操作、銀染法染色等雙向電泳條件的處理下，通過Bradford法分別測定不同方法提取的肉牛和牦牛肉背最長肌中蛋白質(zhì)的含量，并采用PDQuest 8.0.1軟件對雙向電泳圖譜的效果進行分析。結果表明：3種細胞破碎方
肉類研究 2015年7期2015-05-30
- 小麥籽粒蛋白質(zhì)雙向電泳體系的優(yōu)化
白質(zhì)的提取、雙向電泳分離、質(zhì)譜鑒定等先進技術相結合，應用于小麥蛋白質(zhì)組學的研究主要集中于小麥的根、葉片、花藥、花粉等組織器官蛋白質(zhì)的雙向電泳分析及相關蛋白質(zhì)功能的初步鑒定，然而，由于受籽粒中多糖等物質(zhì)的影響，較難提取籽?？偟鞍踪|(zhì)，影響了蛋白質(zhì)組學技術在籽粒中的應用。在前人已發(fā)表的關于籽粒蛋白質(zhì)組學研究的文獻中，對不同作物所采取的蛋白質(zhì)提取方法各不相同。王慧娜等［11］在不同方法提取的小麥籽粒蛋白質(zhì)雙向電泳凝膠分離效果的分析比較一文中只介紹了提取方法對雙向電
江蘇農(nóng)業(yè)學報 2015年5期2015-03-15
- 釀酒酵母蛋白質(zhì)雙向電泳條件優(yōu)化及圖譜建立
支持[4]。雙向電泳與質(zhì)譜結合的研究方法，是現(xiàn)在蛋白質(zhì)組學最為常規(guī)的實驗技術。由于雙向電泳實驗操作性強、步驟繁瑣、周期長，實驗過程各個環(huán)節(jié)都可能影響雙向電泳對蛋白質(zhì)分離的效果，直接關系到蛋白質(zhì)圖譜分析的準確性和可靠性，因此對于不同來源的樣品，即便是同一物種也都需要摸索優(yōu)化出專用的實驗室可重復的實驗條件[5-6]。本研究的目標就是通過對影響雙向電泳結果的各種關鍵條件進行優(yōu)化，建立一套高分辨率、高靈敏度、高重復度和高穩(wěn)定性的雙向電泳技術體系。為深入研究不同氮源
食品與生物技術學報 2014年3期2014-12-25
- 外源H2O2影響山黧豆初生根蛋白表達研究
變化，并采用雙向電泳與質(zhì)譜鑒定技術，對初生根中蛋白質(zhì)表達的變化進行分析。結果顯示：施加H2O2處理引起了內(nèi)源H2O2水平的產(chǎn)生與積累；利用雙向電泳技術，共獲得了850～900個蛋白質(zhì)點，并檢測到70個蛋白質(zhì)表現(xiàn)出顯著的差異表達，其中43個蛋白發(fā)生上調(diào)，21個蛋白發(fā)生下調(diào)，新出現(xiàn)6個蛋白。對15個蛋白點MALDI-TOF-MS/MS質(zhì)譜鑒定結果表明，呼吸代謝、蛋白折疊、信號轉(zhuǎn)導及細胞防御等方面的蛋白參與了山黧豆初生根對H2O2的應答反應。這些蛋白的發(fā)現(xiàn)將有助
江蘇農(nóng)業(yè)科學 2014年9期2014-11-15
- 基于雙向電泳技術的家畜蛋白質(zhì)組學研究進展
學科動態(tài)基于雙向電泳技術的家畜蛋白質(zhì)組學研究進展蘆方茹，馬 云*，徐永杰，雷 玲，宋新強(信陽師范學院 生命科學學院/動物遺傳實驗室，河南 信陽 464000)隨著人類基因組計劃的完成與落幕，各種家畜如小鼠、牛、豬等的測序工作也相繼完成，動物基因組學的研究重點已轉(zhuǎn)向功能基因組學。而蛋白質(zhì)組學是功能基因組學中非常重要的一部分，作為蛋白質(zhì)組學研究中經(jīng)典技術的雙向電泳技術就顯得尤為重要，論文對雙向電泳在牛、豬等家畜中的基礎研究進展予以綜述，并就蛋白質(zhì)組學技術的前
家畜生態(tài)學報 2014年1期2014-04-15
- 蚯蚓蛋白質(zhì)組雙向電泳技術體系的建立及條件優(yōu)化
蚯蚓蛋白質(zhì)組雙向電泳技術體系的建立及條件優(yōu)化吳石金，趙士良，沈飛超，徐 銘（浙江工業(yè)大學 生物與環(huán)境工程學院，浙江 杭州 310032）對赤子愛勝蚓（Eiseniafetida）表皮組織的兩種蛋白質(zhì)提取方法進行了比較，并對雙向電泳IPG膠條pH范圍，上樣量條件進行了優(yōu)化，結果表明：裂解液提取法提取的蛋白質(zhì)量濃度較低，蛋白種類缺失，采用TCA－丙酮沉淀法提取法，可顯著提高提取液蛋白質(zhì)提取效果，樣品中蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度可達12.49μg／μL.蚯蚓表皮組織蛋白質(zhì)主
浙江工業(yè)大學學報 2013年2期2013-08-24
- 茭白總蛋白質(zhì)雙向電泳技術體系的建立
組等[2]。雙向電泳技術（Two-dimensional electrophoresis，2-DE）作為蛋白質(zhì)組學三大關鍵核心技術之一，是目前惟一能同時將上千種蛋白質(zhì)分離和展示的方法，也是分析復雜組分蛋白質(zhì)分辨率最高的工具[3]。由于植物中蛋白質(zhì)含量相對較低，且含有如色素、淀粉、多糖、多酚、單寧和有機酸類等大量干擾性物質(zhì)，給植物蛋白質(zhì)組學研究增加了困難，因而雙向電泳技術在植物中的應用早期主要集中于擬南芥[4]、水稻[5]、小麥[6]、玉米[7]等傳統(tǒng)模式作
食品與生物技術學報 2013年6期2013-02-19
- 水稻胚乳雙向電泳技術體系的優(yōu)化分析
]。白月等用雙向電泳技術分析水稻少側(cè)根突變系MT10及其野生型IR8的根系全蛋白質(zhì)組，建立二者間的差異表達圖譜，得到了11個差異點，其中只在MT10中表達的蛋白點有2個，只在IR8中表達的蛋白點有4個，兩者間有明顯差異的蛋白點有5個[4]。劉文文等應用雙向電泳（2-DE）技術分析了烯丙異噻唑誘導后水稻蛋白質(zhì)的差異表達，在誘導4 d的雙向電泳圖譜上找到了10個差異表達蛋白質(zhì)點，選取其中3個進行質(zhì)譜（MALDI-TOF-MS）分析，分別具有泛醌-細胞色素C還原
東北農(nóng)業(yè)大學學報 2012年4期2012-09-20
- 甘藍型油菜葉片蛋白質(zhì)雙向電泳體系優(yōu)化
5］。蛋白質(zhì)雙向電泳(Two－dimensional polyacrylamide gel electrophoresis，2 － DE)技術［6，7］是利用蛋白質(zhì)等電點和分子量的不同來對蛋白質(zhì)進行分離。它通過第一向的等電聚焦(Isoelectric focusing，IEF)使蛋白質(zhì)按照等電點進行初次分離，然后通過第二向的聚丙烯酰胺凝膠電泳(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis
作物研究 2012年4期2012-09-19
- 高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒蛋白質(zhì)組雙向電泳方法的建立及優(yōu)化
ova等應用雙向電泳技術（2-DE）分析了產(chǎn)生于單核巨嗜細胞（MDM）的HIV-1病毒粒子的蛋白，鑒定了253個宿主細胞相關蛋白[7]。然而，應用2-DE技術研究HP-PRRSV蛋白質(zhì)組研究尚未見報道。為研究HP-PRRSV蛋白質(zhì)組，本實驗對影響HP-PRRSV蛋白質(zhì)組的2-DE條件進行優(yōu)化，建立了重復性好、分辨率高的HP-PRRSV 2-DE，為HP-PRRSV的病毒蛋白質(zhì)組學及免疫蛋白質(zhì)組學研究奠定基礎。1 材料和方法1.1 病毒株和細胞 HP-PRR
中國預防獸醫(yī)學報 2012年5期2012-08-30
- 藥學本科生開展雙向電泳實驗探討
學本科生開展雙向電泳實驗探討吳志鵬,林麗彬,柯益彬,李春來(莆田學院醫(yī)學院,福建莆田351100)探討藥學本科生開展雙向電泳實驗的必要性和可行性,通過理論和實踐證明,一種自制膠條的雙向電泳實驗技術適合在藥學本科生中進行推廣。藥學本科生;自制膠條;雙向電泳;必要性;可行性目前國內(nèi)高校藥學本科階段尚無開展雙向電泳實驗的報告。主要是因為常規(guī)的雙向電泳所需的儀器和試劑價格不菲,對實驗技術人員也有較高要求。這些客觀的條件限制了雙向電泳實驗在藥學本科階段的普及。然而雙
黑龍江醫(yī)藥科學 2012年2期2012-01-04
- 旱柳根系蛋白質(zhì)雙向電泳體系的建立
趨勢[4]。雙向電泳是研究蛋白質(zhì)表達變化最有效的工具之一。它利用等電點和分子量2個性質(zhì)對蛋白質(zhì)進行分離，可以使得樣品中數(shù)千種蛋白得到有效分離[5]。雙向電泳技術面臨的挑戰(zhàn)是高分辨率和重復性[6]。只有具備了高分辨率和高重復性才能適用于接下來的凝膠圖片分析，蛋白點配對，找出差異蛋白。為建立旱柳根系雙向電泳體系，本研究從蛋白提取、染色及雙向電泳中蛋白上樣量、平衡時間、等電聚焦等方面對旱柳根部總蛋白雙向電泳體系進行分析比較，以建立優(yōu)化的試驗體系。1 材料與方法1
浙江農(nóng)林大學學報 2011年4期2011-05-30
- 雙向電泳技術在蛋白質(zhì)組學研究中的應用進展
大核心技術是雙向電泳、計算機圖像分析與大規(guī)模數(shù)據(jù)處理技術以及質(zhì)譜技術。而雙向凝膠電泳(two-dimensional electrophoresis，2-DE)是目前唯一可將數(shù)千種蛋白質(zhì)同時分離的方法，雙向電泳技術聯(lián)合質(zhì)譜鑒定技術被公認為是目前蛋白質(zhì)組研究技術的標準方法[2]。2 雙向電泳技術2.1 雙向電泳技術原理雙向電泳技術由Farre l等人于1975年建立。其基本原理是:第1向進行等電聚焦，因為蛋白質(zhì)是兩性分子，具有不同的等電點，在pH梯度介質(zhì)中外
浙江農(nóng)業(yè)科學 2011年6期2011-02-13
- 華溪蟹主要組織蛋白質(zhì)雙向電泳技術體系的建立
要組織蛋白質(zhì)雙向電泳技術體系的建立武陽，馬文麗，王蘭*（山西大學 生命科學學院，山西 太原 030006）為深入研究重金屬脅迫下華溪蟹主要組織蛋白質(zhì)的差異表達，對華溪蟹心臟及鰓總蛋白質(zhì)的雙向電泳技術體系進行了初步探討.通過對樣品處理方法、上樣量大小以及雙向電泳實驗條件的比較選擇，初步建立了適用于華溪蟹組織蛋白質(zhì)組分析的雙向電泳技術體系.結果表明：選取p H 3～10的24 cmIPG膠條，上樣量1.0 mg，得到了較為理想的華溪蟹心臟及鰓雙向電泳圖譜；分離
山西大學學報（自然科學版） 2011年2期2011-01-11
- 蛋白質(zhì)組學研究的有效工具——雙向電泳鑒定技術
000)1 雙向電泳的原理和方法雙向電泳技術是根據(jù)蛋白質(zhì)等電點和分子量兩個相互獨立的參數(shù),在相互垂直的兩個方向進行二次電泳的過程.首先在第一向電泳中根據(jù)蛋白質(zhì)所帶電荷的性質(zhì)進行等點聚焦(IEF),等點聚焦時由于各種蛋白等電點的不同,在高電壓場的作用下,蛋白質(zhì)在pH梯度膠中移動,直到取得不同的位置;然后再根據(jù)蛋白分子量的不同,在SDS-烯酰胺凝膠電泳 (SDS-PAGE)中進行第二次分離.第一向等點聚焦有 3種常見的方法:非固相的 ISO-DALT、固相的
重慶高教研究 2010年5期2010-08-15
- 蛋白質(zhì)組雙向電泳技術在生物醫(yī)學研究中的應用進展
質(zhì)譜技術），雙向電泳技術（two-dimensional electrophoresis, 2-DE）是目前唯一可將數(shù)千種蛋白質(zhì)同時分離的方法，雙向電泳技術聯(lián)合質(zhì)譜技術被國際公認是目前蛋白質(zhì)組研究技術的標準方法。由于雙向電泳技術在蛋白質(zhì)組與醫(yī)學研究中所處的重要位置，它可用于蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后修飾研究、蛋白質(zhì)組的比較和蛋白質(zhì)間的相互作用、細胞分化凋亡研究、致病機制及耐藥機制的研究、療效監(jiān)測、新藥開發(fā)、癌癥研究、蛋白純度檢查、小量蛋白純化、新替代疫苗的研制等許
生命科學儀器 2010年1期2010-04-14
- 雙向凝膠電泳技術在中醫(yī)證候研究中的應用
面。本文擬對雙向電泳技術在證候研究中的應用做一綜述。1 雙向電泳技術原理及應用雙向電泳(two-dimensional gel electrophoresis，2-DE)是根據(jù)蛋白質(zhì)等電點和分子量的不同，通過兩次方向互相垂直的高分辨率等電聚焦電泳和十二烷基磺酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)，將帶不同凈電荷和不同分子量的蛋白質(zhì)二維
世界中醫(yī)藥 2010年5期2010-04-13
- 大豆花瓣蛋白雙向電泳分析技術體系的優(yōu)化*
大豆花瓣蛋白雙向電泳分析技術體系的優(yōu)化*鄭天慧，宋 波，姜自芹，刁桂珠，曾 蕊，吳 帥，拓 云，劉珊珊＊＊(東北農(nóng)業(yè)大學)雙向電泳技術體系的優(yōu)化是蛋白質(zhì)組學研究的前提和基礎.本文針對大豆花瓣含有大量色素和酚等干擾物質(zhì)的現(xiàn)象，比較6種蛋白提取方法和2種蛋白裂解液配方，優(yōu)化膠條范圍和等電聚焦程序.結果表明:pH為4～7 IPG膠條適于大豆全花蛋白分離;TCA/丙酮+2D Clean Up試劑盒法去除雜質(zhì)充分，提取的蛋白含量高、純度好、分離效果佳、耗時短;蛋白裂
哈爾濱師范大學自然科學學報 2010年6期2010-01-07